朱來華，王 艷，季新成，周仲芳，顧志軍，劉金龍，竇樹龍，顧炳泉

（1.山東出入境檢驗檢疫局，山東青島 266002；2.上海出入境檢驗檢疫局，上海 200035；3.國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局，北京 100088；4.廣東出入境檢驗檢疫局，廣東廣州 510623；5.無錫出入境檢驗檢疫局，江蘇無錫 214101；6.南通出入境檢驗檢疫局，江蘇南通 226004）

馬傳染性貧血（Equine infectious anemia，EIA）是由反轉錄病毒科慢病毒屬的馬傳染性貧血病毒（Equine infectious anemia virus，EIAV）引起馬屬動物的一種急性烈性傳染病。EIA的傳播途徑是多方面的，主要是通過吸血昆蟲（虻、蚊、蠓等）的叮咬而機械性傳染，也可經(jīng)消化道和交配傳染，還可經(jīng)病毒污染的醫(yī)療器械散播傳染[1]。EIA在全球大多數(shù)國家呈地方性流行；我國EIA的陽性檢出率逐年下降，有望在2020年消滅EIA。

EIA在美國呈散發(fā)性流行，在各州均有零星發(fā)生。為了控制EIA，美國農(nóng)業(yè)部（United States department of agriculture，USDA）動植物衛(wèi)生檢驗 署（Animal and plant health inspection service，APHIS）獸醫(yī)局（Veterinary services，VS）參考了美國動物衛(wèi)生協(xié)會（Animal health association）、美國馬委員會（American horse council）、美國馬獸醫(yī)協(xié)會（American association of equine practitioners）的建議，制定了EIA監(jiān)測與防控程序，并在全美國實施[2]。

1 監(jiān)測程序

USDA對EIA實施被動監(jiān)測程序，規(guī)定了監(jiān)測頻率、實驗室、檢測方法與試劑、檢測人員及送樣人員要求。

USDA統(tǒng)一要求每年至少檢測1次，在高風險州（如EIA地方性流行地區(qū)）要求每6個月檢測1次。強制性要求在馬匹參加展覽或競賽等事項、跨州調(diào)運、變更馬主、進入拍賣或銷售市場、配種前，必須攜帶符合UADA要求的陰性檢測報告。USDA規(guī)定，送樣人員可以是州或聯(lián)邦的動物衛(wèi)生官員或USDA/APHIS/VS認可的獸醫(yī)。

EIA檢測實驗室可以是官方檢測實驗室或私立實驗室，但必須經(jīng)過USDA/APHIS/VS認可，并通過美國國家獸醫(yī)服務實驗室（National veterinary services laboratories，NVSL）組織的年度能力驗證。實驗室檢測人員必須接受NVSL培訓并通過能力驗證試驗。EIA診斷的實驗室方法和試劑需要經(jīng)USDA批準登記，其檢測方法主要包括ELISA、AGID及免疫印跡試驗。

1.1 檢測實驗室

官方檢測實驗室包括NVSL和肯塔基大學獸醫(yī)診斷實驗室以及聯(lián)邦/州實驗室。NVSL是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）EIA參考實驗室，也是USDA的參考和確診實驗室，主要提供標準診斷試劑、診斷試驗培訓、能力驗證、實施科學研發(fā)工作以提高診斷技術?？纤髮W獸醫(yī)診斷實驗室是美國的國家級EIA參考實驗室，負責科研和咨詢。私立實驗室也可以進行EIA的實驗室檢測診斷，但必須經(jīng)USDA/APHIS/VS認可與批準。無論是官方檢測實驗室還是私立檢測實驗室，都需按照NVSL提供的標準檢測程序，使用USDA注冊登記的標準試劑進行檢測，并按照規(guī)定的渠道報告檢測結果。這些實驗室必須使用常規(guī)實驗室檢測方法，每年參加并通過NVSL組織的能力驗證，并接受NVSL至少2年1次的檢查審核。

1.2 實驗室檢測人員

1.2.1 官方實驗室檢測人員 至少有1人接受NVSL培訓并通過能力驗證試驗，掌握EIA的實驗室檢測診斷方法，并能對實驗室其他技術人員進行再培訓。

1.2.2 私立實驗室檢測人員 在開展檢測活動前，接受NVSL檢查審核，所有技術人員接受NVSL培訓并通過能力驗證試驗，掌握EIA的實驗室檢測診斷方法。

1.3 官方檢測方法

實驗室檢測方法（ELISA、AGID和免疫印跡試驗）需要經(jīng)USDA/APHIS/VS批準登記，才能應用于EIA的實驗室檢測診斷。

1.3.1 ELISA USDA批準了4種用于EIA診斷的ELISA試劑盒，1種為競爭性ELISA，另外3種為非競爭性ELISA。競爭性ELISA和2種非競爭性ELISA檢測p26核心蛋白抗原產(chǎn)生的抗體。另1種非競爭性ELISA檢測抗體為p26核心蛋白和gp45病毒跨膜蛋白產(chǎn)生的抗體。ELISA反應快速、靈敏，很少出現(xiàn)假陰性，但可能產(chǎn)生假陽性結果。假陽性結果可以通過AGID或其他參考實驗室方法來確認[3-5]。

1.3.2 瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID） AGID針對EIAV p26抗原（主要核心蛋白），與血液中存在的EIAV具有高度相關性，是國際上廣泛接受的EIA實驗室檢測診斷方法，是EIA陽性結果確認的實驗室方法，因此被稱為EIA診斷的金標準。AGID很少出現(xiàn)假陽性結果，即使出現(xiàn)也是由于技術人員錯誤操作引起的，可通過反復檢測來修正。假陰性結果出現(xiàn)可能是由于抗體滴度過低，或通常是由于對結果觀察的錯誤解讀引起[5-6]。

1.3.3 補充實驗室方法 免疫印跡試驗（Immunoblot test），或稱蛋白轉印試驗（Western blot test），應用EIAV的3種病毒結構蛋白（囊膜蛋白gp90、跨膜蛋白gp45、主要核衣殼蛋白p26），比ELISA、AGID具有更高的敏感性和特異性。但因技術復雜、操作繁瑣、費用昂貴，加之免疫印跡試驗不是認可的官方實驗室方法。經(jīng)USDA/APHIS/VS批準，只能在NVSL和肯塔基大學進行，可以用于確認模棱兩可的結果[7]。

1.4 官方實驗室記錄表格

EIA實驗室檢測結果必須按USDA統(tǒng)一格式的官方實驗室表格（Official laboratory form）進行提交，如VS表格10-11：EIA實驗室試驗（The VS Form 10-11：Equine Infectious Anemia Laboratory Test），由認可獸醫(yī)簽署，認可獸醫(yī)還可以要求馬主或馬主代理人共同簽名確認，偽造、變造表格屬于刑事犯罪，可以處以罰款或拘役。

1.5 強制檢測馬的目錄

馬匹在參加展覽或競賽等事項、跨州移動、變更馬主、進入拍賣或銷售市場、配種前以及從外部農(nóng)場引入、從國外進口前，必須獲得認可實驗室出具的EIA陰性檢測報告。

1.5.1 參加展覽或競賽等事項的馬 馬在參加展覽或競賽等事項前，必須在當?shù)毓芾聿块T規(guī)定的時間內(nèi)進行EIA檢測，結果須為陰性。賽事官員查看有關文件，確保參加賽事的所有馬的EIA檢測結果為陰性。

1.5.2 跨州移動的馬 馬在移動前12個月內(nèi)EIA檢測結果為陰性，且隨運輸工具攜帶準許移動的官方許可證。沒有陰性檢測報告或移動許可證的馬，不得進行跨州移動。

1.5.3 變更馬主的馬 通過銷售、交換或捐贈而改變馬主的馬，在變更前12個月內(nèi)，進行EIA檢測，結果為陰性。在高風險地區(qū)的馬，建議新馬主在獲得馬60 d后重新檢測。所有馬主的變更必須伴有認可獸醫(yī)簽發(fā)的證書。

1.5.4 進入拍賣或銷售市場的馬 所有拍賣或銷售市場，不管規(guī)模大小，必須獲得州政府的注冊登記，并保留交易記錄便于追溯。馬在拍賣或銷售前，進行EIA檢測，結果為陰性。拍賣或銷售市場必須雇傭認可獸醫(yī)，參與銷售活動，檢查證明文件的有效性，并對沒有陰性檢測報告的馬采集血液樣品，送官方實驗室進行檢測。

1.5.5 進入美國境內(nèi)的馬 不管是臨時進境參加展覽、表演或比賽，還是永久進境，在入境美國前都需要進行EIA檢測，結果需為陰性。永久進境的馬在入境后還需進行隔離檢疫，并接受實驗室檢測，結果需為陰性。

1.5.6 配種前的種馬 馬在配種前1年內(nèi)，需接受至少1次EIA檢測，結果需為陰性。

1.6 小馬駒

由于任何年齡階段馬都是EIA易感動物，所以都必須進行EIA檢測。幼齡小馬在斷奶時（小于6月齡），進行第一次檢測，然后經(jīng)適當?shù)母綦x檢疫（超過60 d）后，再次檢測。如果母馬為EIA陽性，小馬從初乳獲得EIA被動免疫抗體的時間可能超過6個月。在這種情況下，馬駒至少隔離60 d，在隔離結束后和混群前，檢測結果為陰性。如果母馬為陰性，幼齡小馬，可不檢測。

2 防控程序

2.1 執(zhí)行EIA常規(guī)檢測

USDA規(guī)定的防控程序包括常規(guī)檢測，陽性馬及時處置，同群馬反復檢測以及加強生物安全措施。陽性馬的處置措施包括陽性馬隔離檢疫、永久標識及限制移動，陽性馬只能返回原農(nóng)場、送往科研機構或屠宰場。

馬的州際移動標準統(tǒng)一為12個月。根據(jù)當?shù)氐娘L險情況，建議對EIA進行常規(guī)檢測。各個州可以實施更嚴格的防控程序。參加展覽或競賽等事項的馬、州際移動的馬、變更馬主的馬、進入拍賣或銷售市場的馬以及從外部農(nóng)場引入的馬、從國外進口的馬，需要采集樣品送檢官方實驗室。

2.2 陽性馬的處理

一旦確定為陽性馬，可以實施安樂死、屠宰或隔離檢疫。

2.2.1 隔離檢疫 隔離場所接受官方人員的定期監(jiān)管，防止違反隔離檢疫的有關規(guī)定。如果官方試驗檢測為陽性馬，馬主在得知陽性結果24 h內(nèi)立即隔離陽性馬，防止與其它馬的進一步接觸。在陽性馬所在地約180 m內(nèi)，與其接觸的同群馬，也實施單獨隔離。隔離區(qū)域與其它未接觸馬的距離不少于180 m。Barros等認為，虻科昆蟲（如馬虻、鹿虻、牛虻等）的機械傳播距離不超過50 m，而建議180 m應是有效的安全距離[8]。

2.2.2 反復檢測并移除陽性馬 在得知陽性檢測結果24 h內(nèi)，移除陽性馬，并對其它同群馬進行反復檢測，間隔30～60 d，或更高的頻率，直到所有與其接觸的馬為陰性。其它同群馬陰性狀態(tài)保持至少60 d，才可解除隔離。

2.2.3 移動限制 所有陽性馬和同群接觸馬，在檢測結果確定后24 h內(nèi)進行隔離，限制其移動。只有在獲得官方移動許可證（APHIS、州獸醫(yī)或認可獸醫(yī)簽署）后，受限制的馬才能進行州際移動。到達目的地后，繼續(xù)保持陽性馬隔離狀態(tài)，防止病毒傳播，直到自然死亡、屠宰或安樂死。陽性馬只能移動到在聯(lián)邦注冊的屠宰場、聯(lián)邦批準的診斷或科研場所及原農(nóng)場。同群的接觸馬，因特殊用途，可以進行移動，但接觸馬必須以15 d的間隔反復檢測，直到最后脫離接觸后至少60 d一直為陰性，才能進行移動。

2.2.4 陽性馬的標識 由APHIS、州官員代表或認可獸醫(yī)對EIA檢測陽性的馬進行永久標識，如熱鐵烙印、化學烙印、冷凍標識。永久標識在陽性馬頸部左側，至少5 cm厚。如果是唇部刺青，大小至少為2.54 cm×1.91 cm。如果陽性馬直接移動到屠宰場，可不實施官方標識?？缰菀苿拥鸟R，必須攜帶APHIS、州官員代表或認可獸醫(yī)簽署的移動許可證，且必須在起運5 d內(nèi)達到目的地，到達后立即屠宰。

2.2.5 陽性馬的最終目的地 美國沒有強制撲殺陽性馬的法律規(guī)定，陽性馬最終目的地包括返回原農(nóng)場、科研機構或屠宰場。一旦確定為陽性馬，可以在原農(nóng)場實施安樂死或隔離飼養(yǎng)。原農(nóng)場是指轉運前所在的農(nóng)場或養(yǎng)殖場所（出生或停留30 d或以上）。如果實施屠宰，必須在聯(lián)邦或州注冊的屠宰場屠宰。

2.3 加強生物安全措施

嚴格控制外部人員進入。馬用物品、設備、設施進行清洗、消毒；醫(yī)用物品，如注射器、針頭一次性使用。糞尿、墊料等經(jīng)堆積密封發(fā)酵至少1個月，以殺滅病毒、媒介昆蟲等。對馬或養(yǎng)殖場噴灑驅蟲劑或殺蟲劑，防止蚊、虻等吸血昆蟲侵襲馬匹，減少馬暴露于媒介昆蟲的機會。搞好馬廄及其周圍的環(huán)境衛(wèi)生，清除馬活動場所的污水，刈短雜草，減少昆蟲孳生和藏匿，對養(yǎng)殖場及其活動場所噴灑驅蟲劑或殺蟲劑[9-10]。

3 對我國消滅EIA的啟示

在全面分析美國EIA監(jiān)測與防控措施及其防控效果的基礎上，借鑒其成功的經(jīng)驗，進一步優(yōu)化我國EIA防控措施，實現(xiàn)我國在2020年消滅EIA的目標。

3.1 擴大監(jiān)測范圍和監(jiān)測數(shù)量

抓好監(jiān)測凈化，加大監(jiān)測頻率，擴大監(jiān)測范圍和監(jiān)測數(shù)量。馬在跨省調(diào)動、銷售、參加展覽或比賽、配種、引群前，必須獲得認可實驗室出具的EIA陰性檢測報告。

3.2 加強對實驗室的監(jiān)管提高其檢測能力

對檢測實驗室、檢測人員、檢測方法及其試劑進行認可登記，通過能力驗證、實驗室間比對等措施保證其檢測質量；強化檢測技術的培訓，確保實驗室具備EIA檢測的技術能力。

3.3 對陽性動物要實施嚴格采取撲殺

對臨床檢查和實驗室檢測為陽性動物，要嚴格采取撲殺、無害化處理等措施，消滅傳染源。馬一旦感染EIAV，就終生帶毒，成為潛在的傳染源，美國不強制撲殺陽性動物是EIA在美國呈散發(fā)性流行的主要原因。

3.4 同群馬反復檢測

確認陽性檢測結果后，立即將陽性馬移除并撲殺銷毀，并對同群馬進行反復檢測，間隔30～60 d或更高的頻率，直到所有接觸馬檢測為陰性。其它同群馬陰性狀態(tài)保持至少60 d，才可以解除隔離措施。

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