萬祥輝 ,楊細媚 ,銀天嬌 ,文燦
在動力學法檢測的生化反應中,由于標本酶含量過高,導致反應體系中酶的底物短時間內(nèi)消耗殆盡,使得從開始讀數(shù)點之前至反應終點的吸光度反應曲線的一段或整段為一平坦曲線,導致結果偏低甚至為“0”或負值,與實際值不符的現(xiàn)象稱為底物耗盡。底物耗盡是生化實驗室日常工作中常遇到的情況,丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、α-羥丁酸脫氫酶(HBDH)是最常見底物耗盡的酶類項目。本實驗室生化試劑為河北艾歐路生物有限公司提供,按照說明書上參數(shù)設置乳酸脫氫酶(LDH)檢測上限可以達到 10000U/L,肌酸激酶(CK)、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰轉移酶(GGT)和淀粉酶(AMY)檢測上限可以達到3000U/L以上,這幾種酶線性范圍寬臨床上不易出現(xiàn)底物耗盡;而HBDH、ALT、AST線性范圍上限只能達到1000U/L,容易出現(xiàn)底物耗盡。當結果為負值或兩個相關項目結果相差過大時的底物耗盡容易被發(fā)現(xiàn),但當結果為正常值或相關項目結果沒有明顯沖突時則不易被發(fā)現(xiàn)[1]。雖然可以通過設置儀器參數(shù)對底物耗盡報警提示[2-4],但當實驗室信息系統(tǒng)(LIS)不具備接收儀器報警信息功能時,底物耗盡結果存在誤審的可能性。筆者在實際工作實踐中發(fā)現(xiàn),利用HBDH/LDH的比值可以用于發(fā)現(xiàn)HBDH和轉氨酶的底物耗盡,尤其是有利于發(fā)現(xiàn)容易被忽略的轉氨酶底物耗盡情況。
1.1 臨床資料 收集我院240例肝功能、腎功能、心功能指標均正常的參考人群的LDH、HBDH結果,男女比例1:1。同時收集了2017年7月至10月生化實驗室日常工作中遇到的HBDH和轉氨酶底物耗盡29個案例。
1.2 儀器與試劑 日立7600(210)全自動生化分析儀,ALT、AST、LDH、HBDH 生化分析試劑盒 (河北艾歐路生物有限公司),校準品(英國朗道),質(zhì)控品(英國朗道)。
1.3 儀器參數(shù)設置及質(zhì)量控制 試劑參數(shù)均按照試劑說明書設置。四個項目的室內(nèi)質(zhì)控變異系數(shù)(CV)控制在WS/T403-2012規(guī)定的室內(nèi)質(zhì)控偏倚范圍內(nèi)[5],室間質(zhì)評合格。
1.4 HBDH/LDH比值在發(fā)現(xiàn)底物耗盡中的應用用SPSS18軟件分析240例參考人群的HBDH/LDH比值的95%的置信區(qū)間。評價比值在實際工作中發(fā)現(xiàn)HBDH和轉氨酶底物耗盡的應用價值。
240例參考人群年齡分布為10歲至83歲,平均年齡52歲。參考人群的HBDH/LDH比值的95%的置信區(qū)間為 0.80~0.82,均值為 0.81,性別差異無統(tǒng)計學意義(t=0.583,P>0.05)。 以 0.80 為判斷閾值,HBDH/LDH小于0.8,LDH升高其組織來源主要為肝臟、紅細胞或多種組織器官混合型;HBDH/LDH大于0.80,LDH升高其組織來源主要為心肌。HBDH線性范圍上限可以做到1000U/L,因此當LDH測量值大于1250U/L且HBDH/LDH比值小于0.8時,LDH升高可能為肝臟損傷引起,需要同時查看HBDH、AST和ALT反應曲線,確認是否存在底物耗盡;當LDH測量值大于1250U/L且HBDH/LDH比值大于0.8時,LDH升高可能為心肌損傷引起,需要同時查看HBDH和AST反應曲線,確認是否存在底物耗盡。
我們將上述規(guī)則作為發(fā)現(xiàn)底物耗盡的一個篩查指標。實踐證明2017年7月至10月發(fā)生的29例HBDH、ALT、AST底物耗盡案例均可通過HBDH/LDH比值關系推斷發(fā)現(xiàn),敏感性達100%,并且發(fā)現(xiàn)了多例容易被忽略的轉氨酶底物耗盡情況。表1為容易被忽略的轉氨酶底物耗盡5個案例。
表1 通過HBDH/LDH發(fā)現(xiàn)容易被忽略的轉氨酶底物耗盡案例
當人體肝臟、心臟等器官發(fā)生嚴重損傷時,ALT、AST、HBDH等酶的大量釋放使血中濃度急劇升高,有時超過正常水平的幾百倍甚至幾千倍[6],若此時底物耗盡未能及時被工作人員發(fā)現(xiàn),采取稀釋重測的糾正程序,則可能最終報出與實際酶活性相差甚遠的假結果[7]。因此,對檢驗人員來說發(fā)現(xiàn)底物耗盡是一項非常重要的工作。表1 5個案例中ALT、AST稀釋前的結果未出現(xiàn)負值,兩者的趨勢也未出現(xiàn)不符合臨床的可疑情況,儀器雖然有字符報警”W”,但LIS不具備接收儀器字符報警的功能,此時若只查看HBDH的反應曲線,則ALT、AST的底物耗盡不能被發(fā)現(xiàn),容易出現(xiàn)誤審,影響患者的診療。
LDH幾乎存在于所有組織中,以心肌、骨胳肌、腎臟和肝臟最為豐富,紅細胞中也含量豐富。LDH包含5種同工酶,根據(jù)電泳遷移率快慢,依次為 LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5,心肌和紅細胞含量以LDH1、LDH2為主,肝臟以LDH5為主,HBDH反應的是LDH1和LDH2的活性[8]。因此當心肌損傷為主時,HBDH活性顯著增高,HBDH/LDH比值大于0.8;當肝臟損傷或多器官組織損傷為主時,HBDH/LDH比值小于0.8。根據(jù)HBDH線性范圍及HBDH/LDH比值發(fā)現(xiàn)HBDH底物耗盡不難,但容易忽視可能同時存在的AST、ALT底物耗盡。
HBDH、LDH作為傳統(tǒng)心肌酶已經(jīng)被新的心肌損傷標志物取代[9,10],也有人認為沒有必要聯(lián)合檢測HBDH和LDH[11]。本文29例底物耗盡案例顯示,當心肌、肝臟或多組織器官嚴重損傷時,HB-DH、LDH活性會顯著性增高,雖沒有新心肌損傷標志物的敏感性高、特異性強,但依然可以成為臨床協(xié)助診斷和療效監(jiān)測指標。此外研究顯示HBDH、LDH還可以應用于多種疾病的輔助診斷,例如妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥[12]、白血病[13]、淋巴瘤骨髓侵犯[14]、精神分裂癥[15]等。
有研究認為HBDH/LDH與精子活力和精液質(zhì)量密切相關[16],但未見HBDH/LDH用于發(fā)現(xiàn)底物耗盡方面的報道。本文給出的HBDH和轉氨酶底物耗盡篩查規(guī)則實踐證明可以發(fā)現(xiàn)HBDH和轉氨酶的底物耗盡,防止HBDH和轉氨酶底物耗盡的誤審,不失為HBDH和LDH的新用途。