劉及生 ,譚福燕 ,焦安君 ,馮曉晶 ,譚立明 ,劉文華 ,胡志輝 ,張 嶸
自身抗體是自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)的重要標(biāo)志[1],患者血液中存在高效價(jià)自身抗體是AID的特點(diǎn)之一,也是臨床確診AID的重要依據(jù)[2]。AID多為慢性病,如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)、 干燥綜合征(Sjogren Syndrome,SS)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)等。任何性別、年齡均可發(fā)病,以女性為多見;常累及多器官、多系統(tǒng)、反復(fù)發(fā)作、慢性遷延[3]。AID的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一是檢測出疾病特異性或相關(guān)性自身抗體,這些自身抗體是AID的重要標(biāo)志,每種AID都伴有特征性的自身抗體譜?,F(xiàn)對196例患者血清進(jìn)行了抗核抗體 (ANA)譜檢測,對其檢測結(jié)果進(jìn)行分析。
1.1 一般資料 自2011年1月至2017年1月在江西省宜春市宜豐縣中醫(yī)院檢測抗核抗體譜的患者196例,年齡7月12d~80歲,平均51歲。其中男性74例,女性122例。男女比例為0.61:1。其中SLE 20例,男 2例,女 18例,年齡 9~73歲,平均41歲。SS 9例,男1例,女8例,年齡33~80歲,平均57歲。硬皮病 (Progressive Systemic Sclerosis,PSS)8例,男 1例,女 7例,年齡 23~65歲,平均45.1歲。RA 5例,男2例,女3例,年齡14~80歲,平均55.76歲。多發(fā)性肌炎/皮肌炎(Polymyositis/dermatomyositis,PM/DM)7 例,男 1 例,女 6 例,年齡9~76歲,平均49.7歲。60例健康體檢者為對照組,男性22例,女性38例,年齡18~56歲,平均28歲。所有入選者自愿接受實(shí)驗(yàn)并簽署知情同意書。
1.1.1 診斷依據(jù) ⑴SLE按1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)并成為國際通用的診斷SLE的標(biāo)準(zhǔn)[4]。⑵SS按2012年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)發(fā)表的SS診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。⑶RA按2015年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)/歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟痛風(fēng)分類標(biāo)準(zhǔn)[6]。⑷PM/DM的診斷依據(jù):90%患者有肌電圖異常;尿肌酸排出量增多,尿肌酐排量明顯減少;肌活檢90%異常,表現(xiàn)為肌纖維或空泡性壞死,肌纖維粗細(xì)不一,有再生現(xiàn)象,間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤和纖維化。⑸PSS的診斷依據(jù):掌指關(guān)節(jié)近端的硬皮變化,可累及整個(gè)肢體、面部、全身及軀干;雙肺基底纖維化;手指間有凹陷性瘢痕和指墊消失。
1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴自愿參與且進(jìn)行ANA譜檢測者;⑵符合診斷標(biāo)準(zhǔn)且有完整臨床、影像學(xué)、組織學(xué)病理資料;⑶健康對照同時(shí)滿足以下條件:①無自身免疫疾病;②心、肝、腎功能基本正常。
1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者;⑵檢測期間發(fā)燒、女性月經(jīng)和妊娠期等;⑶合并嚴(yán)重心、肝、肺、腎臟等系統(tǒng)疾病、甲狀腺疾病者;⑷健康對照組者血常規(guī)、乙肝、血壓、血糖血脂、肝腎功能、胸片、肝膽胰檢查出現(xiàn)異常。
1.2方法
1.2.1 標(biāo)本處理 采集受檢者靜脈血3.0ml左右,1028g/15min離心后分離血清備用。
1.2.2 儀器與方法 ⑴儀器和試劑:EUROBlotMasterⅡ免疫印跡儀、ANA譜(IgG)檢測試劑盒,均購自德國歐盟公司。⑵方法:線性免疫印跡法(LIA)檢測抗核抗體譜,檢驗(yàn)方法[7]:檢測結(jié)果的解釋:在ANA譜檢測膜條徹底干燥后,根據(jù)膜條上抗原帶著色深淺來判定結(jié)果。ANA譜檢測抗AMA M2、抗AnuA、抗 Histon、抗 Jo-1、抗 CENP、抗 PCNA、抗dsDNA、抗 PM-Scl、抗 Rib P、抗 Ro-52、抗 SS-A、抗 SS-B、抗 Scl-70、抗 Sm、抗 RNP/Sm 抗體,只要有一種抗體陽性,即視為ANA-LIA檢測陽性。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,分布資料陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 抗核抗體譜分布情況及性別差異情況 在196例ANA譜檢測結(jié)果中,抗SS-A抗體陽性率最高為15.3%,抗J0-1抗體陽性率最低為1.0%,15種自身抗體中除抗J0-1、抗PCNA抗體外,其余抗體陽性率在男女性別上存在明顯差異。見表1。
表1 196例ANA譜不同性別陽性率分布表[n(%)]
2.2 ANA譜陽性檢出情況 在196例標(biāo)本中共檢出ANA譜陽性61例,陽性率為31.1%。其中兩個(gè)及以上抗體同時(shí)陽性的患者明顯高于單項(xiàng)抗體陽性患者。見表2。
表2 61例ANA譜陽性患者中部分臨床診斷結(jié)果[n(%)]
2.3 不同AID中抗核抗體陽性率分布 在51例AID中,15種抗核抗體在不同疾病中陽性率有差別,在SLE中抗SS-A抗體陽性率最高,達(dá)70.0%,在PM/DM中,抗Ro-52抗體陽性率最高,達(dá)42.9%。見表3。
AID是指機(jī)體的免疫效應(yīng)或免疫效應(yīng)分子,針對自身組織或細(xì)胞產(chǎn)生的一系列病理性免疫應(yīng)答反應(yīng),導(dǎo)致自身組織器官損傷的一大類自身抗體多樣化,譜型范圍廣的疾病[8]。ANA譜廣泛應(yīng)用于各種AID的臨床診斷[9],其中抗Sm抗體和抗dsDNA抗體陽性可作為診斷SLE的特異性指標(biāo)[10]。SS是一種侵犯外分泌腺體的慢性自身免疫性疾病??筍S-B抗體和抗SS-A抗體,抗Ro-52抗體陽性與 SS有很大的相關(guān)性[11,12]。 RA,是一種慢性、系統(tǒng)性的AID,以對稱的多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)[13],自身抗體與RA的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)聯(lián)[14]。PM/DM是以橫紋肌受損為主的系統(tǒng)性炎性肌病,抗Jo-1抗體是臨床診斷PM和DM比較特異性的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[15]。
筆者回顧分析196例ANA譜檢測結(jié)果,ANA譜陽性率達(dá)31.1%,與國內(nèi)報(bào)道[16]基本一致,15種特異性抗體的陽性率在人群中存在明顯差異,其中抗SS-A抗體的陽性率最高,為15.3%,是目前ANA譜分布最廣,最常見的一種抗體,其與各種AID相關(guān),最常見于SS。抗Ro-52抗體的陽性率次之,為13.3%,此抗體沒有疾病特異性,在PM/DM,PSS和其他風(fēng)濕性疾病中均可出現(xiàn)陽性??笿o-1抗體陽性率為1.0%,抗Jo-1抗體是PM/DM的標(biāo)志性抗體。各抗核抗體(除抗Jo-1抗體、抗PM-Scl抗體和抗PCNA抗體外)在性別上存在顯著差異,女性陽性率最高的前兩項(xiàng)依次為:抗SS-A抗體、抗Ro-52抗體,陽性率分別為:41.0%,36.1%。男性陽性率最高的前兩項(xiàng)依次為:抗SS-A抗體、抗Ro-52,陽性率分別為:8.2%,6.6%。自身抗體女性陽性率明顯高于男性,這在很大程度上與性激素水平有關(guān),有研究認(rèn)為,人類易患性與年齡,性別,激素水平均有一定的關(guān)系,一般來說,雌激素的作用是增強(qiáng)免疫功能,可以影響抗體類別轉(zhuǎn)換,而睪酮的作用是降低免疫功能。性激素影響B(tài)淋巴系統(tǒng)產(chǎn)生Ig的量,女性比男性能分泌更多的循環(huán)抗體量,尤其當(dāng)女性患AID時(shí),會(huì)產(chǎn)生更高滴度的自身抗體[17]。由此可見,與抗核抗體相關(guān)的疾病好發(fā)于女性人群。
表3 51例AID抗體血清IGg檢測結(jié)果[n(%)]
在61例ANA譜陽性抗體陽性率檢測結(jié)果中,單項(xiàng)抗體陽性占47.5%,兩個(gè)及兩個(gè)以上抗體同時(shí)陽性占52.5%,兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),由此說明各特異性抗體常聯(lián)合出現(xiàn)在人體,這與研究報(bào)道[18]相符,抗SS-A抗體和抗SS-B抗體共同陽性占13.1%,抗SS-A抗體和抗R0-52抗體共同陽性占34.4%,抗Sm抗體和抗dsDNA抗體共同抗體陽性占4.9%,抗ds-DNA單項(xiàng)、抗ds-DNA+nRNP/Sm+Sm平行聯(lián)合對SLE的診斷具有最好的診斷效率[19]。51例AID患者ANA譜的檢測結(jié)果顯示,抗 SS-A 抗體在 SLE、PM/DM、RA、PSS、SS中的陽性率普遍較高??筍S-A抗體與各類AID有關(guān),最常見于干燥綜合征,也見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡和原發(fā)性膽汁性肝硬化中,在SLE中,各種自身抗體的陽性率普遍較高,說明SLE中存在多種自身抗體,抗SS-A抗體、抗Sm抗體、抗dsDNA抗體、抗Ro-52抗體、抗RNP/Sm抗體均是SLE的標(biāo)志性抗體[20],其陽性率分別為:70.0%、25.0%、45.0%、55.0%。抗dsDNA抗體不僅可以作為SLE患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)還對其活動(dòng)性的評估有著指導(dǎo)作用[21]??笿o-1抗體在PM/DM中的陽性率最高,達(dá)28.6%,而其在RA、PSS、SS及健康對照組中的陽性率為0.0%,由此說明某些抗體只特定存在于某些疾病中,Jo-1抗體是診斷PM/DM的特異性抗體。在RA中各抗核抗體陽性率均較低,其與ANA譜無明顯相關(guān)性。在PSS中,抗Scl-70的陽性率最高,達(dá)62.5%,這與文獻(xiàn)報(bào)道相符[22]。在SS中,抗SS-A抗體的陽性率與抗Ro-52抗體的陽性率均很高,由此發(fā)現(xiàn),抗SS-A抗體、抗SS-B抗體、抗Ro-52抗體與SS存在明顯的相關(guān)性,結(jié)果與文獻(xiàn)中報(bào)道:抗SSA、SSB抗體是診斷SS的標(biāo)志性抗體[23]相符。 61 例 AID 中除 RA、PM/DM 外,SLE、PSS、SS中的ANA譜陽性率均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05),說明這三種AID均與ANA譜有較大的相關(guān)性。
總之,ANA譜檢測各抗體陽性率在不同性別間存在差異,一種抗體能存在多種AID中,一種AID也可表現(xiàn)出多種自身抗體,所以在臨床檢測中應(yīng)采用多種自身抗體的聯(lián)合檢測,防止漏檢,以提高AID的診斷率。ANA譜檢測對臨床疾病的診斷具有重要意義。