梁愛芬，何韶堅(jiān)，華仙麗，雷亞利，隋洪

為了解東莞地區(qū)尖銳濕疣（condyloma acuminate，CA）組織中人乳頭瘤病毒 （human papilloma virus，HPV）感染的型別特點(diǎn)及分布情況，采用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)檢測HPV21種亞型?，F(xiàn)對在我院門診就診的513例尖銳濕疣患者HPV亞型陽性結(jié)果進(jìn)行分析，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 研究對象參照中國疾病預(yù)防控制中心制定的《性傳播疾病臨床診療指南》中CA的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取2014年6月-2016年6月來自本院皮膚科確診為HPV陽性的CA患者，共513例，男性尖銳濕疣患者156例，占30.41%；女性尖銳濕疣患者357例，占69.59%，年齡16～55歲。

1.2 采樣方法 疣體樣本使用專用手術(shù)剪刀，剪下疣體組織放入細(xì)胞保存液或使用棉拭子反復(fù)摩擦疣體直至疣體出血，然后將棉拭子放入細(xì)胞保存液中。

1.3 儀器與試劑 廣東凱普生物科技股份有限公司提供的PCR儀（KPTC48）、Hybrid Max醫(yī)用核酸分子快速雜交儀、人乳頭瘤病毒HPV分型試劑盒（PCR+膜雜交法）。

1.4 檢測方法 ⑴DNA分離提?。喝”４嬗袠颖镜募?xì)胞保存液500μl，14000rpm離心5min，去上清后，加入細(xì)胞裂解液提取DNA。最后取1μlDNA提取液進(jìn)行PCR擴(kuò)增；⑵PCR擴(kuò)增：在KPTC48型PCR擴(kuò)增儀器上進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件為95℃9min→95℃20s、55℃ 30s、72℃ 30s 擴(kuò) 增 40 個(gè) 循 環(huán) →72℃5min，擴(kuò)增結(jié)束后進(jìn)行第二個(gè)程序，95℃7min變性處理；⑶導(dǎo)流雜交：95℃7min變性處理的PCR產(chǎn)物→冰水浴 2～5min→加入反應(yīng)槽孔 45℃雜交10min→加入0.5ml封阻液封閉膜→顯色。⑷結(jié)果判讀：陽性為呈藍(lán)紫色的點(diǎn)，HPV病毒類型判斷依據(jù)HPV分型膜條上的陽性點(diǎn)分布位點(diǎn)情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為 P<0.05。

2 結(jié)果

2.1 513例尖銳濕疣患者HPV亞型檢測結(jié)果和分布 21種HPV亞型均被檢出，其中單一型HPV感染占 74.27%（381/513）， 多重型 HPV感染占25.73%（132/513），低危型陽性率為 59.84%，高危型陽性率為40.16%；主要HPV型別：6型(23.93%)、11 型 (19.52%)、16 型 (8.91%)、52 型(7.64%)、58 型(6.09%)、18 型(4.87%)，詳見表 1。

2.2 HPV感染性別分組比較 男性患者感染HPV陽性率為30.41%(156/513)，多重型感染率為13.46%（21/156），高危型感染率為 36.54%（57/156，包含多重）；女性患者感染HPV陽性率為69.59%(357/513)，多重型感染率為 31.09%（111/357），高危型感染率為63.03%（225/357，包含多重）。男、女性HPV高危型以16、52、58亞型為主。男女性高危型HPV感染陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

表1 513例尖銳濕疣患者HPV亞型分布情況

2.3 多重感染病例分布情況 132例多重HPV亞型混合感染者中，二重HPV亞型感染87例（65.91%），三重 HPV 亞型感染 30例（22.73%），四重HPV亞型感染9例（6.82%），五重HPV亞型感染 3例 （2.27%）， 六重 HPV亞型感染 3例（2.27%）。組合方式以低-低危型、低-高危型和高-高危型三種，主要以低-高危型為主，詳見表2。

表2 HPV多重感染病例分布情況

3 討論

尖銳濕疣（CA）是以生殖器部位皮膚黏膜的良性增生性損害為主的一種性傳播疾病，復(fù)發(fā)率及傳染性強(qiáng)，據(jù)報(bào)道其居于國內(nèi)性傳播疾病的第二位[1]。而人乳頭瘤病毒（HPV）是其病原體，與多種惡性腫瘤如宮頸癌、陰莖癌、食道癌、肺癌、腸癌的發(fā)生相關(guān)[2]，是宮頸癌發(fā)生的主要因素[3，4]。 目前已發(fā)現(xiàn)的HPV基因型約200多種，有45型HPV可感染生殖道和經(jīng)性接觸傳染，主要有 6，11，16，18，31，33等20多個(gè)型別[5]。本研究運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)導(dǎo)流雜交基因芯片法，是目前常用的檢測方法，可同時(shí)檢測多種HPV型別，在檢測的靈敏度和特異性有很大的提高[6]。本研究所用試劑盒檢測出21種高低危型HPV基因型，涵蓋了主要流行型別，結(jié)果顯示在陽性患者中共檢出21種型別，單一型HPV亞型感染的低危型感染率較高的有HPV6型(23.93%)，HPV11 型(19.52%)，高危型感染率前四名有 HPV16 型(8.91%)、HPV52 型(7.64%)、HPV58 型(6.09%)、HPV18型(4.87%)。與國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道CA患者 HPV 亞型分布相似[7，8]，與國外 Potocnik U 等[9]研究CA患者皮損中HPV分型以低危型為主，且HPV6、11型明顯占優(yōu)的報(bào)道一致，而在檢測結(jié)果中多重型感染的感染率為25.73%，多重型感染形式有低-高危型、低-低危型和高-高危型，以二重感染（65.91%）最多，與山西報(bào)道的多重型感染占22.5%和二重感染占72.22%相近[10]。本研究顯示在本地區(qū)CA患者中以HPV6型和HPV11型感染為主，可存在多重型別HPV亞型感染。

HPV感染與患者性別因素的關(guān)系非常密切，國內(nèi)一項(xiàng)針對3489例CA患者的流行病學(xué)調(diào)查顯示，男性患者的發(fā)病率明顯高于女性患者，但女性的HPV檢出率卻高于男性[11]，與本研究結(jié)果相似，在HPV感染性別分組比較顯示，女性感染比例（69.59%）明顯高于男性。而在HPV感染類型中，本研究結(jié)果顯示，男性以HPV6、11、43型等低危型感染為主，女性以HPVl6、52、58型等高危型感染為主，在HPV多重感染中，高危型HPV以混合感染為主(89.7%)，女性更容易感染高危型HPV，而且女性多重感染比例明顯高于男性[12-15]，這值得引起我們的重視。

本研究通過對尖銳濕疣組織HPV型別的檢測，所映出目前該地區(qū)尖銳濕疣患者HPV感染型別特點(diǎn)，女性對高危型HPV的易感性，男女性別感染具有差異性，加強(qiáng)HPV感染的預(yù)防與健康教育，重視女性CA患者的HPV篩查。