馬 瑞，李常軍，李文濤，張秀梅

(中國海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,山東青島 266003)

線形硬毛藻Chaetomorpha linum隸屬于綠藻門Chlorophyta、綠藻綱Chlorophyceae、剛毛藻目Cladophorales、剛毛藻科Cladophoraceae、硬毛藻屬Chaetomorpha,主要繁殖方式包括有性繁殖、無性繁殖和營養(yǎng)繁殖[1]。線形硬毛藻在富營養(yǎng)化水體中常占據(jù)優(yōu)勢地位,形成大規(guī)模草叢[2],同時其較高的光合作用速率可以提高水體溶解氧水平,腐敗分解后釋放多種元素,影響水體的化學(xué)過程和物質(zhì)組成[3]。線形硬毛藻作為綠潮藻類的優(yōu)勢種之一,國內(nèi)外學(xué)者對它的研究多集中在營養(yǎng)鹽吸收方面[4]。如MCGLATHERY,et al[5]研究表明,在氮限制的情況下,線形硬毛藻會加快對NH4+的吸收速度,而對NO3-的吸收滯后;在氮充足的情況下,會優(yōu)先吸收NH4+而抑制對NO3-的吸收;KRAUSE-JENSEN,et al[6]研究表明線形硬毛藻在高光照強度條件下比在低光照強度條件下可以更有效地阻止NH4+向上層水中擴散,光期比暗期吸收量更大。另外,有關(guān)線形硬毛藻的生長和物質(zhì)積累方面也有一些報道,如XU,et al[7]研究了溫度、鹽度和光照強度對于線形硬毛藻生長影響的最佳組合。

光是調(diào)控植物生長發(fā)育的關(guān)鍵生態(tài)因子之一,而光質(zhì)是光的重要屬性[8-9]。藻類對光質(zhì)的吸收具有選擇性,光質(zhì)對藻類的生長發(fā)育、形態(tài)建成、光合作用和物質(zhì)代謝等具有重要的調(diào)控作用[10-14],直接影響藻類的生長和發(fā)育。目前,對于線形硬毛藻的研究多集中在營養(yǎng)鹽吸收[15]、溫度[7]、鹽度[7]和光照強度[16]等方面,而關(guān)于光質(zhì)對于線形硬毛藻生長發(fā)育及其理化指標的影響研究甚少。鑒于此,本文利用發(fā)光二極管(LED)作為光源,探討紅光(R)、藍光(B)、紅光：藍光=3：1(3RB)、紅光：藍光=1：1(RB)、紅光：藍光=1：3(R3B)和紅光：綠光：藍光=1：1：1(RGB)2種單色光及4組混合光對線形硬毛藻生理生化指標的影響,為綠潮藻類的后續(xù)研究提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

實驗用線形硬毛藻于2016年11月采自山東省榮成市天鵝湖(37°21′N,122°34′E),測得天鵝湖實時水溫13.5℃,鹽度31.76、DO 8.2 mg/L。挑選色澤艷麗,生長狀態(tài)良好的線形硬毛藻,伴隨少量海水置于保溫箱內(nèi)低溫避光保存,并于采樣當(dāng)天將樣品運回實驗室。

1.2 藻體暫養(yǎng)

將運回實驗室的藻體用過濾海水反復(fù)清洗以去除藻體表面的附生生物及雜質(zhì),將挑選健康且生長狀態(tài)一致的藻體置于實驗室循環(huán)水槽(70 cm×40 cm×50 cm)內(nèi)培養(yǎng) 7～10 d,期間光照強度為 60 μmol·m-2·s-1,光周期為12 L：12 D,同時,保持每天1℃的速度給水槽內(nèi)海水升溫,每天更換1次全部海水。

1.3 實驗設(shè)計

使用1 000 mL燒杯作為實驗用培養(yǎng)瓶,隨機稱量4份相同鮮重(3.0±0.1 g)的藻體,分別置于不同培養(yǎng)瓶中,并向培養(yǎng)瓶中注入800 mL滅菌的PES培養(yǎng)液。用保鮮膜將培養(yǎng)瓶封口,并用細針在保鮮膜上穿孔20個,既防止培養(yǎng)液蒸發(fā)鹽度升高,又保持了氣體的交換。將培養(yǎng)瓶置于一不透光的紙箱(60 cm×60 cm×75 cm)內(nèi),不同紙箱內(nèi)設(shè)有不同光質(zhì)(R、G、B、3RB、RB、R3B、RGB)的 LED 排燈照射,通過氣泵向每個培養(yǎng)瓶注入空氣,注入空氣的速度以藻體可以在培養(yǎng)瓶中緩慢移動為好。

實驗用光源為11 W的LED排燈,其中紅光波長700 nm,藍光波長450 nm,綠光波長550 nm,通過調(diào)整排培養(yǎng)瓶與光源之間的距離,保證照著到培養(yǎng)瓶處的光照強度為60 μmol·m-2·s-1,光照強度使用LI-250 A便攜式光照儀進行測定。培養(yǎng)期間溫度恒定于25℃,光周期12 L：12 D,培養(yǎng)時間為10 d。

1.4 樣品測定

1.4.1 特定生長率(SGR)

實驗結(jié)束后,稱量每組藻體的濕重,運用以下公式計算藻體的特定生長率(SGR)。

式中,Wt為實驗結(jié)束時藻體的濕重(g);Wo為實驗開始時藻體的濕重(g);t為實驗時間(d)。

1.4.2 葉綠素a含量

實驗開始前稱取4份濕重為0.3±0.01 g的藻體置于-80℃冰箱內(nèi)冷凍保存,用于藻體葉綠素a的初始值測定;實驗結(jié)束時,每個培養(yǎng)瓶隨機稱取0.3±0.01 g的藻體,用于測定實驗后藻體的葉綠素a含量[17]。測量方法采用可見光法,公式如下：

式中：OD663為663 nm波長處的渾濁度校正值;OD645為645 nm波長處的渾濁度校正值;OD630為630 nm波長處的渾濁度校正值。

1.4.3 抗氧化酶及丙二醇的測定

實驗開始前隨機取部分藻體于-80℃冰箱內(nèi)冷凍保存,用于抗氧化酶及丙二醇初始值的測定?？偝趸锲缁?SOD)、過氧化氫酶(CAT)和丙二醇(MDA)的測定均采用南京建成生物工程公司生產(chǎn)的總超氧化物岐化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和丙二醇(MDA)試劑盒進行測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 19.0和Excel 2010軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析,采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)檢驗不同光質(zhì)處理對線形硬毛藻各生理生化指標的差異顯著性,將P＜0.05設(shè)為差異顯著水平,P＜0.01設(shè)為差異極顯著水平,圖中數(shù)據(jù)以平均值±標準誤差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 特定生長率及單位長度細胞數(shù)量

培養(yǎng)10 d結(jié)束后,各光質(zhì)處理下線形硬毛藻的特定生長率存在極顯著差異(P＜0.01)(圖1)?？傮w來看,在復(fù)合光質(zhì)下培養(yǎng)的藻體要比在單色光質(zhì)下培養(yǎng)的藻體生長的更快;在復(fù)合光質(zhì)中,隨著藍光比例的增加,藻體的特定生長率在不斷上升,呈現(xiàn)出顯著性差異(P＜0.05)。其中,RGB光質(zhì)組培養(yǎng)下藻體生長最快(6.63%),R3B光質(zhì)組次之(6.44%),而紅光處理下的藻體生長最慢(4.11%)。觀察RB和RGB培養(yǎng)組可發(fā)現(xiàn),綠光的加入對藻體的生長有明顯的促進作用(P＜0.05),RGB光質(zhì)組藻體增重是RB組的1.09倍。

圖1 線形硬毛藻在不同光質(zhì)下的特定生長率Fig.1 The SGR of C.linum under different light qualities

圖2 不同光質(zhì)培養(yǎng)條件下線形硬毛藻的葉綠素a含量Fig.2 The contents of Chl a of C.linum under different light qualities

圖3 不同光質(zhì)條件下線形硬毛藻的SOD活力Fig.3 SOD activity of C.linum under different light qualities

2.2 光合色素葉綠素a含量

不同光質(zhì)處理下線形硬毛藻體內(nèi)葉綠素a含量存在極顯著性差異(P＜0.01)。從圖2可以看出,RB、R3B、RGB光質(zhì)處理組藻體內(nèi)葉綠素a含量大于實驗培養(yǎng)前的初始值,而R、B、3RB光質(zhì)處理組藻體內(nèi)葉綠素a含量小于初始值,RB光質(zhì)組培養(yǎng)下的藻體葉綠素a含量顯著高于其他各處理組(P＜0.05),是初始值的1.44倍,是紅光處理組的2.78倍。加入綠光的RGB光質(zhì)處理組相較于RB光質(zhì)處理組來說,葉綠素a含量略低,說明綠光的加入不利于線形硬毛藻葉綠素a的累積。

2.3 抗氧化酶活力

不同光質(zhì)處理下線形硬毛藻體內(nèi)SOD活力存在極顯著性差異(P＜0.01)。從圖3可看出,各組光質(zhì)處理培養(yǎng)的藻體,其體內(nèi)的SOD活力均高于初始值,其中復(fù)合光質(zhì)組的SOD活力要高于單色光質(zhì)組,但無論在紅、藍單色光質(zhì)中比較,還是在復(fù)合光質(zhì)中按光質(zhì)的比例來看,隨著紅光所占比例的增加,藻體內(nèi)SOD的活力在不斷增強,說明紅光有利于線形硬毛藻體內(nèi)SOD活力的提升。比較RB光質(zhì)組和RGB光質(zhì)組可以看出,綠光的加入不利于藻體SOD活力的提升。

總體來看,藻體內(nèi)CAT活力的變化規(guī)律與SOD活力的變化規(guī)律基本一致,但經(jīng)單因素方差分析檢驗,不同光質(zhì)處理對藻體內(nèi)CAT活力無顯著影響(P＞0.05)。

2.4 丙二醛

不同光質(zhì)處理下線形硬毛藻體內(nèi)MDA含量存在極顯著性差異(P＜0.01)(圖5)。從總體來看,單色光質(zhì)組培養(yǎng)的藻體內(nèi)MDA含量要高于復(fù)合光質(zhì)組培養(yǎng)的藻體,單色光質(zhì)組MDA含量高于初始值,復(fù)合光質(zhì)組MDA含量低于初始值(圖5)。從圖5還可以看出,無論在紅、藍單色光質(zhì)中比較,還是在復(fù)合光質(zhì)中按光質(zhì)的比例來看,隨著藍光所占比例的增加,藻體內(nèi)MDA含量在不斷增強,說明藍光可以促進線形硬毛藻體內(nèi)MDA的累積。比較RB光質(zhì)組和RGB光質(zhì)組可以看出,綠光的加入不利于藻體MDA的累積。

圖4 不同光質(zhì)條件下線形硬毛藻的CAT活力Fig.4 CAT activity of C.linum under different light qualities

圖5 不同光質(zhì)培養(yǎng)條件下線形硬毛藻的MDA含量Fig.5 The contents of MDA of C.linum under different light qualities

3 討論

光作為最重要的生態(tài)因子之一,不僅給植物的光合作用提供了必要的能源,同時也對植物的形態(tài)建成起調(diào)控作用[18]。光質(zhì)作為光的重要屬性,是通過被植物體內(nèi)的光敏色素感知,從而影響植物的生長發(fā)育、光合作用、形態(tài)建成和生理代謝[19]。大量研究證實,光質(zhì)對藻類的生長繁殖、光合色素的含量組成[20-24]以及酶活性[25]均有一定的影響。本研究表明,相較于單色光質(zhì)組(R、B)來說,復(fù)合光質(zhì)組(3RB、RB、R3B、RGB)更有利于線形硬毛藻生物量的積累,這一結(jié)果與中肋骨條藻Skeletonema costatum[26]和草莓[27]的研究結(jié)果一致,說明各種光質(zhì)相互協(xié)調(diào),共同作用更有利于植物的生長發(fā)育。在復(fù)合光質(zhì)組中,藍光比例的增加明顯有利于線形硬毛藻體的生長,這與壇紫菜自由絲狀體[9]、扁滸苔Ulva compressa[14]的研究結(jié)果類似。但也有研究發(fā)現(xiàn),紅光對江蘺Gracilaria fisheri[23]和角叉菜Chondrus ocellatus[28]的促生長作用明顯優(yōu)于藍光,作者認為造成這種差異的原因可能是不同藻體內(nèi)所含光合色素的含量和組成不同,使其對于可見光各個波段的吸收率和利用率不同。

光合色素是藻類進行光合作用的物質(zhì)基礎(chǔ),能夠吸收、傳遞和轉(zhuǎn)換光能,而在光合作用的過程中,葉綠素a直接參與光反應(yīng)階段[9],因此葉綠素a的含量是反應(yīng)植物光合作用能力的重要指標。本研究表明,復(fù)合光質(zhì)組的葉綠素a含量明顯高于紅、藍單色光,說明復(fù)合光更有利于線形硬毛藻光合色素的累積。RB光質(zhì)組葉綠素a含量最高,顯著高于RGB光質(zhì)組(P＜0.05),說明綠光的加入不利于線形硬毛藻光合色素的累積。

SOD和CAT是生物體內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)的重要組成部分,會對植物產(chǎn)生一定程度的保護作用[29],其中SOD能催化超氧化物陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng),將活性氧代謝維持在平衡水平,保護膜結(jié)構(gòu)[30],CAT則可以分解代謝產(chǎn)生的H2O2,從而有效地清除自由基[31]。植物體內(nèi)的光敏色素會對不同的光質(zhì)作出響應(yīng),從而影響植物的抗氧化系統(tǒng)[32]。研究表明,光能吸收與利用的平衡常常會被逆境條件打破,從而導(dǎo)致吸收光能過剩以及氧自由基的產(chǎn)生,而這些活性氧會損害植物的生理功能,破壞SOD、CAT等抗氧化酶的含量、結(jié)構(gòu),影響膜系統(tǒng)的穩(wěn)定性,最終導(dǎo)致膜脂過氧化,破壞膜的結(jié)構(gòu),對植物產(chǎn)生極其嚴重的傷害[29,33]。本研究表明,實驗中經(jīng)過各組光質(zhì)培養(yǎng)的藻體內(nèi)SOD活力均高于初始值,可能是實驗光質(zhì)均對藻體的生長發(fā)育產(chǎn)生了脅迫,抗氧化酶系統(tǒng)發(fā)揮保護作用,使得SOD活力上升。復(fù)合光質(zhì)組SOD活力高于單色光質(zhì)組,結(jié)合藻體在各組光質(zhì)培養(yǎng)下的生長情況,分析認為,雖然各組光質(zhì)均對藻體的生長產(chǎn)生脅迫,但單色光質(zhì)組(R、B)產(chǎn)生的脅迫較強,嚴重影響了藻體內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)的正常水平,使得SOD活力下降。本研究發(fā)現(xiàn),實驗光質(zhì)組對藻體內(nèi)CAT活力的影響不顯著(P＞0.05)。分析認為,SOD可將藻體內(nèi)O2-轉(zhuǎn)化為H2O2,CAT進一步將H2O2轉(zhuǎn)化為無毒性的H2O和O2從而起到保護膜結(jié)構(gòu)的作用,而CAT活力的定義為每mg組織蛋白每秒分解1 μmol的H2O2的量為一個活力單位,但實驗中藻體培養(yǎng)時間較短,不同光質(zhì)照射僅對藻體SOD活力產(chǎn)生影響,未達到對CAT影響的培養(yǎng)時間。

丙二醛(MDA)是膜脂過氧化的重要產(chǎn)物之一,可通過MDA了解膜脂過氧化的程度,以間接測定膜系統(tǒng)受損程度以及植物的抗逆性[34]。MDA的測定常常與SOD的測定相互配合,SOD的活力高低間接反應(yīng)了機體清除氧自由基的能力,而MDA的高低又間接反應(yīng)了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。大量研究證明,植物在受到嚴重脅迫的情況下,其體內(nèi)的MDA含量有明顯的升高。本研究表明,復(fù)合光質(zhì)組的藻體內(nèi)MDA含量均低于初始值,單色光質(zhì)組的藻體內(nèi)MDA含量高于初始值,結(jié)合各組光質(zhì)對藻體SOD和CAT活力的影響,表明紅、藍單色光相比于復(fù)合光對藻體產(chǎn)生了更大的脅迫,SOD、CAT的活力下降導(dǎo)致活性氧的積累,過量的活性氧加劇了膜脂過氧化作用,這與番茄[35]和水稻[36]的研究結(jié)果一致。

[1]曾呈奎.中國黃渤海海藻[M].北京：科學(xué)出版社,2009.

[2]McCOMB A J,HUMPHRIES R.Loss of Nutrients from Catchments and Their Ecological Impacts in the Peel-Harvey Estuarine System,Western Australia[J].Estuaries,1992,15(4)：529-537.

[3]GAO Li,ZHANG Luhua,HOU Jinzhi,et al.Decomposition of macroalgal blooms influences phosphorus release from the sediments and implications for coastal restoration in Swan Lake,Shandong,China[J].Ecological Engineering,2013,60(7)：19-28.

[4]MENéNDEZ M,MARTíNEZ M,COMíN F A.A comparative study of the effect of pH and inorganic carbon resources on the photosynthesis of three floating macroalgae species of a Mediterranean coastal lagoon[J].Journal of Experimental Marine Biology and Ecology,2001,256(1)：123-136.

[5]McGLATHERY K J,PEDERSEN M F,BORUM J.Changes in intracellular nitrogen pools and feedback controls on nitrogen uptake in Chaetomorpha linum(Chlorophyta)[J].Journal of Phycology,1996,32(3)：393-401.

[6]KRAUSE-JENSEN D,McGLATHERY K,RYSGAARD S,et al.Production within densemats of the filamentous macroalga Chaetomorpha linum in relation to light and nutrient availability[J].Marine Ecology Progress Series,1996,134(1)：207-216.

[7]XU Yongjian,LIN Junda.Effect of Temperature,Salinity,and Light Intensity on the Growth of the Green Macroalga,Chaetomorpha linum[J].Journal of the World Aquaculture Society,2008,39(6)：847-851.

[8]韓軍軍,鐘晨輝,何培民,等.不同光質(zhì)LED光源對壇紫菜自由絲狀體生長和生理特性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報,2017,41(2)：230-239.

[9]潔 鄭,胡美君,郭延平.光質(zhì)對植物光合作用的調(diào)控及其機理[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報,2009,19(7)：1 619-1 624.

[10]WANG Wenjun,SUN Xiutao,WANG Feijiu.Effect of blue light on early sporophyte development of Saccharina japonica(Phaeophyta)[J].Marine Biology,2010,157(8)：1 811-1 817.

[11]WANG Wenjun,SUN Xiutao,WANG Guangce,et al.Effect of blue light on indoor seedling culture of Saccharina japonica(Phaeophyta)[J].Journal of Applied Phycology,2010,22(6)：737-744.

[12]TSEKOS I,NIELL F X,AGUILERA J,et al.Ultrastructure of the vegetative gametophytic cells of Porphyra leucosticta(Rhodophyta)grown in red,blue and green light[J].Phycological Research,2002,50(4)：251-264.

[13]KUWANO K,ABE N,NISHI Y,et al.Growth and cell cycle of Ulva compressa(Ulvophyceae)under LED illumination[J].Journal of Phycology,2014,50(4)：744-752.

[14]ZHANG Xu,LI Dapeng,HU Hanhua,et al.Growth Promotion of Vegetative Gametophytes of Undaria pinnatifida by Blue Light[J].Biotechnology Letters,2005,27(19)：1 467-1 475.

[15]MENéNDEZ M,HERRERA J,COM?N F A.Effect of nitrogen and phosphorus supply on growth,chlorophyll content and tissue composition of the macroalga Chaetomorpha linum(O.F.Müll.)Kütz in a Mediterranean coastal lagoon[J].Scientia Marina,2002,66(4)：355-364.

[16]McGLATHERY K J,KRAUSE-JENSEN D,RYSGAARD S,et al.Patterns of ammonium uptake within dense mats of the filamentous macroalga Chaetomorpha linum[J].Aquatic Botany,1997,59(1)：99-115.

[17]張 宇.線形硬毛藻的生理生態(tài)學(xué)特性的初步研究[D].青島：中國海洋大學(xué),2014.

[18]高榮孚,張鴻明.植物光調(diào)控的研究進展[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報,2002,24(5)：236-243.

[19]胡 陽,江 莎,李 潔,等.光強和光質(zhì)對植物生長發(fā)育的影響[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版,2009,30(4)：296-303.

[20]LíPEZ-FIGUEROA F,NIELL F X.Effects of light quality on chlorophyll and biliprotein accumulation in seaweeds[J].Marine Biology,1990,104(2)：321-327.

[21]GODóNEZ-ORTEGA J L,SNOEIJS P,ROBLEDO D,et al.Growth and pigment composition in the red alga Halymenia floresii cultured under different light qualities[J].Journal of Applied Phycology,2008,20(3)：253-260.

[22]JAYASANKAR R,KULANDAIVELU G.Influence of different wavelengths of light on photosy nthesis and pigment constituents and absorption spectra of Gracilaria spp.[J].Journal of Aquaculture,2001,16(4)：359-371.

[23]NGUYEN P T,RUANGCHUAY R,LUEANGTHUWAPRANIT C.Effect of shading colours on growth and pigment content of Gracilaria fisheri(Xia&Abbott)Abbott,Zhang&Xia(Gracilariales,Rhodophyta)[J].Aquaculture Research,2017,48(3)：1 119-1 130.

[24]SáNCHEZ-SAAVEDRA M P,VOLTOLINA D.Effect of photon fluence rates of white and blue-green light on growth efficiency and pigment content of three diatom species in batch cultures[J].Ciencias Marinas,2002,28(3)：273-379.

[25]STEINBRENNER J,LINDEN H.Light induction of carotenoid biosynthesis genes in the green alga Haematococcus pluvialis：regulation by photosynthetic redox control[J].Plant Molecular Biology,2003,52(2)：343-356.

[26]苗洪利,孫麗娜,田慶震,等.LED單色光譜及復(fù)合光譜對赤潮優(yōu)勢種中肋骨條藻生長的作用[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版,2011,41(10)：107-110.

[27]王麗娟,白義奎,王鐵良.不同光質(zhì)處理對草莓生理特性的影響[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2017,51(1)：25-28.

[28]JU Qing,XIAO Hui,WANG You,et al.Effects of UV-B radiation on tetraspores of Chondrus ocellatus Holm(Rhodophyta),and effects of red and blue light on repair of UV-B-induced damage[J].Chinese Journal of Oceanology and Limnology,2015,33(3)：650-663.

[29]曾韶西,王以柔,劉鴻先.低溫光照下與黃瓜子葉葉綠素降低有關(guān)的酶促反應(yīng)[J].植物生理學(xué)報,1991,17(2)：177-182.

[30]秦 健,劉 洋,方升佐,等.光質(zhì)和光強對青錢柳生長和抗氧化酶活性的影響[J].南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版,2017,41(4)：13-18.

[31]楊青珍.獼猴桃果實采后冷害發(fā)生生理機制及調(diào)控作用[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué),2013.

[32]任 錦.光質(zhì)和CO2濃度對紫背天葵生長及其抗氧化成分合成的影響[D].西安：西北工業(yè)大學(xué),2015.

[33]趙天宏,孫加偉,付 宇.逆境脅迫下植物活性氧代謝及外源調(diào)控機理的研究進展[J].作物雜志,2008,3(6)：10-13.

[34]張春平.不同外源物質(zhì)提高鹽脅迫下黃連種子及幼苗抗逆性機理研究[D].重慶：西南大學(xué),2012.

[35]多 林,魏毓棠,王世剛.番茄耐低溫研究進展[J].沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,31(6)：585-589.

[36]聶先舟,劉道宏,徐竹生.水稻旗葉脂質(zhì)過氧化作用與葉齡及Ni2+,Ag+的關(guān)系[J].植物生理學(xué)通訊,1989(2)：32-34.