練青平，張任馳，宓國(guó)強(qiáng)，姚子亮，劉士力，黃富有，陸 君，吳燕琴

(1.農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,浙江省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,

浙江省淡水水產(chǎn)研究所,浙江湖州 313001;2.浙江省麗水市水產(chǎn)技術(shù)推廣站,浙江麗水 323000)

馬口魚(yú)Opsariichthys bidens,俗稱馬口,隸屬鯉形目,鯉科, 鯸亞科,馬口魚(yú)屬[1],在我國(guó)除青藏高原、新疆和臺(tái)灣等地外,南自海南島、北至黑龍江的東部江河中均有分布,其中浙江省內(nèi)各水系中上游大小支流都有分布[2-3]。馬口魚(yú)不僅繁殖力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快,而且其肉味鮮美,深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài),但由于近年來(lái)捕撈強(qiáng)度過(guò)大和生態(tài)環(huán)境改變,甌江流域的馬口魚(yú)野生資源已十分稀缺。為了盡早恢復(fù)甌江馬口魚(yú)資源,發(fā)展馬口魚(yú)養(yǎng)殖業(yè),本課題組于2016年起在浙江麗水進(jìn)行了馬口魚(yú)規(guī)?；斯し敝吃囼?yàn),實(shí)現(xiàn)了馬口魚(yú)苗種的規(guī)模化生產(chǎn)。迄今為止,國(guó)內(nèi)學(xué)者已在馬口魚(yú)的生物學(xué)特性、養(yǎng)殖技術(shù)等方面進(jìn)行了廣泛研究[4-15],但尚未見(jiàn)有關(guān)馬口魚(yú)規(guī)?；斯し敝臣夹g(shù)的報(bào)道。本研究旨在通過(guò)突破馬口魚(yú)的規(guī)?；斯し敝?為該魚(yú)的人工養(yǎng)殖和人工增殖放流提供優(yōu)良苗種,也為其它溪流性魚(yú)類規(guī)模化人工繁殖技術(shù)的突破提供借鑒。

1 材料和方法

1.1 親魚(yú)

馬口魚(yú)親魚(yú)培育在浙江省麗水市蓮都區(qū)某養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行,前期在池塘養(yǎng)殖,試驗(yàn)前一年冬季將親魚(yú)放入室內(nèi)水泥池(長(zhǎng)×寬×高=6 m×3 m×1.2 m)強(qiáng)化培育。養(yǎng)殖水為地下水,水源水溫18～20℃,養(yǎng)殖池水溫15～25℃,水深1m,養(yǎng)殖密度控制在5 kg/m3以內(nèi),培育期間以投喂粗蛋白為45%左右的人工配合飼料為主,適當(dāng)投喂小蝦等動(dòng)物性餌料。持續(xù)曝氣增氧,定期沖水。馬口魚(yú)1齡性成熟,試驗(yàn)用親魚(yú)為1齡和2齡魚(yú),1齡親魚(yú)雌雄個(gè)體規(guī)格分別為11.8～22.4 g和15.1～45.5 g,2齡親魚(yú)雌雄個(gè)體規(guī)格分別為22～65 g和35～75.2 g。試驗(yàn)時(shí)直接從養(yǎng)殖水泥池中挑選親魚(yú)。挑選親魚(yú)要求魚(yú)體無(wú)傷、無(wú)殘、活力強(qiáng)健。雌性個(gè)體腹部膨大柔軟,有明顯的卵巢輪廓,生殖孔發(fā)紅。雄魚(yú)輕壓腹部能有乳白色精液流出,且乳白色精液能在水中快速分散。挑選適合雌、雄親魚(yú)比按4：1挑選。

1.2 人工繁殖與孵化

當(dāng)水溫穩(wěn)定在16℃以上時(shí),可進(jìn)行馬口魚(yú)人工繁殖。催產(chǎn)劑選用寧波第一激素制品廠生產(chǎn)的地歐酮(DOM)、促黃體素釋放激素類似物(LHRH-A2)和絨毛膜促性腺激素(HCG)。每千克雌魚(yú)劑量為2.5 mg DOM+5 μg LHRH-A2+1 000 IU HCG,雄魚(yú)減半。采用1次性腹鰭基部注射,注射后將雌雄魚(yú)親本放在6 m×3 m的長(zhǎng)方形水泥池中,水深0.8 m,用流水剌激。

采用常規(guī)人工干法授精獲得馬口魚(yú)受精卵,受精卵在水泥池中靜水孵化。催產(chǎn)率計(jì)算公式如下：

1.3 受精率、孵化率的計(jì)算及胚胎發(fā)育觀察觀察方法

受精率、孵化率計(jì)算參照練青平等[16]計(jì)算要求進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算公式如下：

利用尼康SMZ745T體視顯微鏡對(duì)馬口魚(yú)胚胎發(fā)育過(guò)程進(jìn)行觀察并攝像。取30粒卵以上用于觀察和記錄胚胎發(fā)育的每個(gè)發(fā)育階段的特征和發(fā)育時(shí)序。后期用Photoshop軟件對(duì)圖片進(jìn)行后期處理。

1.4 魚(yú)苗“開(kāi)口”和培育

魚(yú)苗出膜3 d左右,能平游、腰點(diǎn)(鰾)出齊后,即開(kāi)始“開(kāi)口”?！伴_(kāi)口”在水泥池中進(jìn)行,前2 d投喂熟蛋黃,第3 d開(kāi)始投喂粗蛋白48%的粉狀飼料,連喂4 d。“開(kāi)口”一周后,下塘進(jìn)行夏花魚(yú)種培育,池塘要求和培育方法可參照“四大家魚(yú)”夏花魚(yú)種培育。

2 結(jié)果

2.1 馬口魚(yú)規(guī)?；敝承Ч?/h3>

2016-2017年,我們用水泥池養(yǎng)殖的1齡和2齡馬口魚(yú)進(jìn)行了人工繁殖試驗(yàn),共產(chǎn)卵44萬(wàn)粒,獲得初孵仔魚(yú)29萬(wàn)尾,催產(chǎn)率、受精率和孵化率平均為83.13%,80.23%和80.95%(表1、表2)。

表1 馬口魚(yú)人工繁殖催產(chǎn)情況Tab.1 Artificially induced spawning of O.bidens

表2 馬口魚(yú)人工繁殖過(guò)程中的催產(chǎn)率、受精率和孵化率Tab.2 Induced spawning rate,fertilization rate,hatching rate under artificial propagation condition of O.bidens

2.2 受精卵胚胎發(fā)育和初孵仔魚(yú)特點(diǎn)

馬口魚(yú)的卵為圓形,呈桔黃色或淺黃色,遇水后無(wú)粘性,為沉性卵,卵徑(2.06±0.05)mm。馬口魚(yú)胚胎發(fā)育過(guò)程可以分為卵裂-原腸、器官形成和出苗期。卵裂-原腸期的孵化積溫需要205.88 h·℃,這一時(shí)期卵的原生質(zhì)向動(dòng)物極聚集,形成胚盤(pán),隨后胚盤(pán)開(kāi)始分裂,并逐漸形成多細(xì)胞體和囊胚,然后胚層繼續(xù)向下包裹,形成胚環(huán)、胚盾等。在孵化水溫(23±1)℃條件下,受精后17 h,進(jìn)入器官形成期,器官形成期的孵化積溫需要564.75 h·℃,這一時(shí)期有肌節(jié)、腦、眼器官、耳囊、尾芽等器官形成,胚體先間隙性擺動(dòng),然后扭動(dòng)頻率逐漸增高,心臟出現(xiàn),到達(dá)后期,胚體準(zhǔn)備出膜。受精后52.17 h,進(jìn)入出膜期,孵化積溫需要429.28 h·℃,此時(shí)仔魚(yú)出膜,這一時(shí)期為仔魚(yú)開(kāi)始出膜的時(shí)期(表3)。

初孵仔魚(yú)全身透明且無(wú)黑色素;卵黃囊整體呈棒狀,前部分大,后部分小,大小占整個(gè)魚(yú)體的3/4;全長(zhǎng)為6.0～6.8 mm,肌節(jié)為38～43對(duì)。耳囊中可見(jiàn)左右各有耳石1個(gè),未見(jiàn)黑色眼色素,眼囊中晶體明顯(圖1)。初孵仔魚(yú)活動(dòng)能力較弱,需側(cè)臥在水底或者貼壁休息。

圖1 馬口魚(yú)初孵仔魚(yú)Fig.1 Newly hatched larvae of O.bidens

2.3 夏花魚(yú)苗培育結(jié)果

2017年4月25日在1.5畝池塘中開(kāi)始培育的20萬(wàn)尾馬口魚(yú)魚(yú)苗,至2017年5月26日,平均體長(zhǎng)(4.4±0.7)cm,共捕獲夏花魚(yú)種13.2萬(wàn)尾,培育成活率為66.0%。

表3 馬口魚(yú)胚胎發(fā)育（2017）Tab.3 Embryo development of O.bidens（2017）

3 討論

3.1 馬口魚(yú)性成熟時(shí)間

本研究認(rèn)為,浙江地區(qū)進(jìn)行馬口魚(yú)人工繁殖的適宜時(shí)間為4月中旬至7月底,2齡魚(yú)的性成熟時(shí)間較1齡魚(yú)早,2齡魚(yú)在5月前催產(chǎn)較為適宜,而1齡魚(yú)最好在6月后進(jìn)行。陳乘等[13]認(rèn)為馬口魚(yú)繁殖期為每年的6-8月。姜景田[8]在2008年6月17日-6月18日對(duì)丹東市寬甸縣水豐水庫(kù)養(yǎng)殖的馬口魚(yú)進(jìn)行了人工繁殖實(shí)驗(yàn),共計(jì)獲得14.9萬(wàn)尾魚(yú)苗。謝建洋[10]對(duì)湖南省安化縣東坪鎮(zhèn)紅巖水庫(kù)的馬口魚(yú)人工繁殖時(shí)間也是在6月9日-6月25日。本研究能在4月份進(jìn)行馬口魚(yú)人工繁殖并獲成功,可能與親魚(yú)在水泥池中培育,冬季水溫保持在15℃以上有關(guān),因養(yǎng)殖水溫提高,使其性腺提早發(fā)育成熟。亦表明,馬口魚(yú)與其它魚(yú)類一樣,性成熟時(shí)間與培育期的積溫有關(guān)。

浙江地區(qū)的馬口魚(yú)人工繁殖時(shí)間如果排除強(qiáng)化培育的因素,與全國(guó)各地區(qū)馬口魚(yú)人工繁殖時(shí)間相近都為6-8月,這個(gè)時(shí)間繁殖的魚(yú)類都屬于比較晚繁殖的魚(yú)類,基本與光唇魚(yú)Acrossocheilus fasciatus[17]和翹嘴紅鲌Erythroculter ilishaeformis[18-19]相近,但是比同是溪流性魚(yú)類的唇 Hemibarbus labeo[20]稍晚。

3.2 馬口魚(yú)胚胎發(fā)育的特點(diǎn)

本研究認(rèn)為在孵化水溫(23±1)℃條件下,馬口魚(yú)胚胎發(fā)育需要52.17 h,孵化積溫需要1 199.91 h·℃,馬口魚(yú)胚胎發(fā)育可以分為卵裂-原腸、器官形成和出苗期。陳乘等[13]研究認(rèn)為湖南安化地區(qū)馬口魚(yú)胚胎在水溫20～23.5℃條件下,從受精卵發(fā)育開(kāi)始至胚胎孵化出膜為止,需要39 h 45 min。姜景田[7]在孵化水溫23～25℃條件下,需要經(jīng)過(guò)80 h的孵化才能出膜。通過(guò)以上比較可以發(fā)現(xiàn),丹東市寬甸縣水豐水庫(kù)養(yǎng)殖的馬口魚(yú)孵化需要消耗的時(shí)間較長(zhǎng),比浙江地區(qū)要長(zhǎng)27.83 h,比湖南地區(qū)的馬口魚(yú)要長(zhǎng)40.25 h,這有可能是不同地理種群所產(chǎn)生的變化。本研究基本和徐偉等[21-22]研究的烏蘇里江唇 和哲羅魚(yú)Hucho taimen的胚胎發(fā)育發(fā)育過(guò)程相近,都可以分為卵裂-原腸、器官形成和出苗期,只是具體各個(gè)階段的孵化積溫有所不同。

3.3 不同年齡馬口魚(yú)親魚(yú)的差異

本研究雖然催產(chǎn)1齡和2齡馬口魚(yú)都獲得成功,但我們認(rèn)為不同年齡的馬口魚(yú)的繁殖特性有所差異,一是繁殖時(shí)間和水溫要求不同,2齡親魚(yú)在4月、水溫在16℃以上時(shí)即可進(jìn)行催產(chǎn),而1齡親魚(yú)應(yīng)在6月下旬才能催產(chǎn);二是1齡親魚(yú)的催產(chǎn)率和受精率不如2齡;三是1齡親魚(yú)個(gè)體小,絕對(duì)懷卵量明顯少于2齡魚(yú)。所以,我們認(rèn)為在生產(chǎn)中應(yīng)用2齡馬口魚(yú)作為親魚(yú),這樣可取得較好的效果。另外,有文獻(xiàn)報(bào)道[3],南方馬口魚(yú)性成熟年齡為2齡,本試驗(yàn)中取得繁殖成功的1齡親魚(yú)的冬天培育是在溫室中進(jìn)行的,如在室外池塘培育,1齡親魚(yú)能否性成熟,有待進(jìn)一步研究。

3.4 馬口魚(yú)苗種的“開(kāi)口”方式

本研究中考慮到剛出膜的仔魚(yú)個(gè)體較“四大家魚(yú)”小,沒(méi)有采用將魚(yú)苗直接下塘培育的傳統(tǒng)方式,而是先在水泥池“開(kāi)口”,即在水泥池中用熟蛋黃和粉狀飼料培育一周,待魚(yú)苗長(zhǎng)到1 cm左右后再下塘,按傳統(tǒng)技術(shù)培育夏花魚(yú)種。我們認(rèn)為,先在水泥池小水體中投喂飼料有利于魚(yú)苗“開(kāi)口”,能使魚(yú)苗的體質(zhì)得到加強(qiáng),提高游動(dòng)、攝食能力,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)又會(huì)引起水質(zhì)變壞,影響成活率,所以,控制在一周時(shí)間是合理的。分段培育馬口魚(yú)夏花魚(yú)種應(yīng)是魚(yú)種培育的一個(gè)創(chuàng)新,但該培育方式對(duì)提高苗種培育成活率的作用有待進(jìn)一步探索。

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