王 君

（山東省高密市畜牧局，山東 濰坊 261500）

豬瘟是由豬瘟病毒引發(fā)的一種高傳染性、高致死率的急性傳染病，我國(guó)每年因豬瘟的直接經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)億美元。傳統(tǒng)的預(yù)防和控制豬瘟的技術(shù)主要以疫苗接種的防治手段為主，但是與豬瘟感染豬和免疫豬難以區(qū)分，C株弱毒可引發(fā)垂直感染，繼而導(dǎo)致免疫失敗。因此，需要研制新型、安全、高效和具有區(qū)分感染豬和免疫豬的疫苗。分子生物學(xué)技術(shù)與基因重組技術(shù)的發(fā)展，基因工程疫苗的研究得到深入發(fā)展?；蚬こ桃呙绲膽?yīng)用對(duì)豬瘟的防控具有重要意義。

1 基因工程亞單位疫苗

通過基因重組技術(shù)，將豬瘟病毒保護(hù)性抗原基因在受體細(xì)菌或特定細(xì)胞中進(jìn)行高效表達(dá)，大量獲得保護(hù)性抗原蛋白，并與相關(guān)佐劑聯(lián)合制成的疫苗即為基因工程亞單位疫苗。E2蛋白是豬瘟病毒主要保護(hù)性抗原，注射病豬以后，產(chǎn)生中和抗體，對(duì)豬瘟病毒進(jìn)行免疫清除。研究發(fā)現(xiàn)，20μg重組E2蛋白即可誘導(dǎo)豬應(yīng)對(duì)100×LD50豬瘟病毒的進(jìn)攻。E2蛋白的表達(dá)受體細(xì)菌或細(xì)胞包括：用桿狀病毒、昆蟲細(xì)胞、亞麻芥種子。除此以外，亞單位疫苗佐劑的研究亦取得了較大成果。如E2蛋白與黃芪多糖聯(lián)合使用的亞單位疫苗，能通過提升血清免疫球蛋白的表達(dá)，而促進(jìn)豬瘟抗體的生成，最終增強(qiáng)仔豬免疫力。肽胸腺肽(α-1)與E2重組表達(dá)形成的亞單位疫苗可以顯著增強(qiáng)豬免疫反應(yīng)和特異性淋巴細(xì)胞功能。

2 核酸疫苗

核酸疫苗可以分為兩類，即DNA疫苗和甲病毒復(fù)制子載體DNA疫苗。DNA疫苗是一類將含有病原微生物特定抗原基因的重組載體直接導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行超表達(dá)，然后使機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫響應(yīng)的疫苗，其免疫原性和安全性較傳弱毒統(tǒng)疫苗更高。能表達(dá)豬瘟病毒關(guān)鍵保護(hù)性抗原E2蛋白的重組質(zhì)粒即為豬瘟DNA免疫疫苗。研究表明，將含有E2基因全長(zhǎng)cDNA序列的真核表達(dá)質(zhì)粒pCI-gp55免疫豬，單次免疫量為200μg可以使豬機(jī)體對(duì)致死性豬瘟病毒產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，免遭其攻擊。甲病毒復(fù)制子載體DNA疫苗是一種基于RNA復(fù)制子的新型疫苗，目前常用的病毒載體有SemLiki Forest virus(SFV)和Sindbis virus(SINV)衍生的DNA/RNA載體。研究發(fā)現(xiàn)pSFV1CS-E2疫苗，100μg的劑量免疫兩次(間隔3周)，即可抵抗豬瘟強(qiáng)毒的致死性攻擊。但該類DNA載體可導(dǎo)致轉(zhuǎn)染的細(xì)胞發(fā)生局部和瞬時(shí)凋亡，有潛在的安全問題，需要對(duì)該類疫苗進(jìn)一步安全評(píng)估。

3 活載體重組疫苗

豬瘟活載體重組疫苗是利用重組DNA技術(shù)將豬瘟病毒的抗原基因克隆到能活的載體病毒中，使外源性病毒蛋白得以表達(dá)，并制備獲得活載體重組疫苗。目前常用的病毒活載體包括痘病毒、豬偽狂犬病毒、腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒等。當(dāng)前開發(fā)的豬瘟活載體重組疫苗有：rSPV-E2雞痘病毒活載體重組疫苗、rPRVTJ-delgE/gI-E2豬偽狂犬病毒疫苗、rPRVTJ-delgE/TK-E2二價(jià)疫苗、rAdV-E2重組腺病毒活載體疫苗，CP7-E2alf牛腹瀉病毒活載體疫苗已被歐盟官方授權(quán)批準(zhǔn)上市，可有效防控規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)豬瘟的流行。

4 基因缺失弱毒疫苗

通過基因敲除技術(shù)缺失或突變病毒基因組中與病毒毒力相關(guān)，而與病毒復(fù)制無關(guān)的基因，得到的病毒毒力減弱的基因工程疫苗即為基因缺失弱病毒疫苗。目前已研制成功的基因缺失疫苗有 Npro、E0、E2、Erns、NS3 基因缺失弱病毒疫苗，并通過試驗(yàn)證明該類疫苗安全有效。

5 全長(zhǎng)感染性cDNA標(biāo)記疫苗

利用反轉(zhuǎn)錄技術(shù)將標(biāo)記基因替換或克隆到弱病毒全長(zhǎng)cDNA中獲得重組病毒，即為全長(zhǎng)感染性cDNA標(biāo)記疫苗，該疫苗可顯著區(qū)分感染和疫苗免疫的豬群。RT-PCR技術(shù)克隆抗原基因的cDNA片段是該疫苗的核心。如研究表明，通過RT-PCR克隆得到弱豬瘟病毒株LOM基因組的8個(gè)cDNA片段，并構(gòu)建存在8個(gè)堿基突變的全長(zhǎng)cDNA克隆Flc-LOM，然后將Flc-LOM進(jìn)行肌內(nèi)免疫14d后，檢測(cè)到豬瘟病毒特異性中和抗體，并使免疫豬免受強(qiáng)毒豬瘟病毒株SW03的致死性攻擊。

6 合成肽疫苗

利用重組DNA技術(shù)，根據(jù)病毒基因組序列逆向編碼的病原蛋白質(zhì)氨基酸序列，然后進(jìn)行人工合成，并與相關(guān)佐劑偶聯(lián)而制得的一類疫苗，稱為合成肽疫苗。研究發(fā)現(xiàn)，根據(jù)相應(yīng)的氨基酸序列，合成的E2糖蛋白的兩個(gè)B細(xì)胞線性表位RE2-A和RE2-B，進(jìn)行偶聯(lián)，獲得了多表位疫苗RE2-BA。兩次免疫動(dòng)物均產(chǎn)生中和抗體，并免受強(qiáng)毒豬瘟病毒的攻擊。合成肽疫苗是一類新型基因工程疫苗，雖然起步晚，但是由于安全性高、免疫效果好，應(yīng)用前景廣泛。

目前，防控和凈化豬瘟的主要方式仍以接種傳統(tǒng)疫苗為主，但是，傳統(tǒng)疫苗不能有效區(qū)分免疫和非免疫豬，而新型基因工程豬瘟疫苗既能提升免疫原性，增強(qiáng)疫苗安全性和穩(wěn)定性，更能顯著區(qū)分野毒感染和疫苗免疫，對(duì)特定病毒的防控更具有特異性，且低廉的工藝和生產(chǎn)成本，使新型基因工程疫苗在豬瘟的防控方面發(fā)揮巨大作用。