吳美杰 王連群 張春峰 張正義

（國藥集團(tuán)貴州血液制品有限公司，貴州黔東南556011）

0 引言

在GMP中，培養(yǎng)基模擬灌裝試驗是無菌藥品生產(chǎn)管理的重要組成內(nèi)容。從國內(nèi)外模擬灌裝試驗的一般法規(guī)到具體的指導(dǎo)原則，都體現(xiàn)出了對培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的高度關(guān)注。尤其需要關(guān)注的是，這些法規(guī)和指導(dǎo)原則都提出，應(yīng)對灌裝生產(chǎn)過程中的各種考察因素和最差條件進(jìn)行試驗考察，以確保模擬灌裝試驗的微生物培養(yǎng)結(jié)果能真正代表無菌藥品灌裝生產(chǎn)的微生物污染水平。

筆者結(jié)合多年的實際操作經(jīng)驗，得出以下基本結(jié)論：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗絕對不是單純對模擬試驗這個生產(chǎn)過程進(jìn)行管理，而是將模擬灌裝試驗所得到的培養(yǎng)基樣品的微生物培養(yǎng)結(jié)果與無菌產(chǎn)品生產(chǎn)的無菌檢查結(jié)果相結(jié)合進(jìn)行互動管理才是有意義的。關(guān)于模擬灌裝過程的考察因素及試驗方案設(shè)計的研究有很多，本文擬對培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的結(jié)果與樣品管理進(jìn)行初步探討。

《GMP指南：無菌藥品》給出了較詳細(xì)的“無菌工藝模擬試驗結(jié)果解讀”，對模擬灌裝試驗的結(jié)果處理及污染調(diào)查提出了指導(dǎo)意見：當(dāng)培養(yǎng)基灌裝結(jié)果出現(xiàn)污染時，不管是否符合標(biāo)準(zhǔn)，都必須進(jìn)行調(diào)查，科學(xué)評估無菌工藝的可靠性以及上市產(chǎn)品可能存在的風(fēng)險。對于超出標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果，應(yīng)當(dāng)在調(diào)查清楚培養(yǎng)結(jié)果超標(biāo)的原因后，再次進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝生產(chǎn)。也就是說，培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的結(jié)果更多地要用于評估生產(chǎn)線的無菌操作工藝的可靠性以及上市產(chǎn)品可能存在的風(fēng)險。因此，有必要強(qiáng)調(diào)建立將模擬灌裝試驗的微生物培養(yǎng)結(jié)果與產(chǎn)品生產(chǎn)的無菌檢查結(jié)果評價相結(jié)合的管理規(guī)程及操作規(guī)程。比如，在模擬灌裝試驗方案和報告中明確要求，將培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的結(jié)果與該生產(chǎn)周期中的所有生產(chǎn)批次產(chǎn)品的灌裝檢查結(jié)果進(jìn)行對比分析，確認(rèn)兩者之間的差異情況，進(jìn)而評估模擬灌裝試驗結(jié)果與產(chǎn)品生產(chǎn)結(jié)果評估的相關(guān)程度和可靠性。

1 培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的培養(yǎng)與結(jié)果觀察

培養(yǎng)基模擬灌裝試驗所要考察的因素應(yīng)當(dāng)包括可能影響產(chǎn)品無菌性能的每一個要素（應(yīng)注意這里是一個數(shù)學(xué)上的全集概念，缺少其中任何一個因素的子集都很可能會被認(rèn)為是無效的），一般灌裝好的培養(yǎng)基樣品在進(jìn)行恒溫培養(yǎng)前需要進(jìn)行反復(fù)（3～5次，每次停留2～3s）倒置與振搖，這樣做的目的是確保所有的產(chǎn)品部件都接觸到了培養(yǎng)基，使可能攜帶的微生物可以很好地進(jìn)入到灌裝好的培養(yǎng)基中，并且得到有效培養(yǎng)并最終表現(xiàn)出來。

此外，需注意的是，在培養(yǎng)基模擬灌裝過程中已經(jīng)發(fā)生異常的培養(yǎng)基樣品的結(jié)果可以不納入培養(yǎng)基試驗結(jié)果中，不用于試驗結(jié)果的評估，但是仍需要按照正常程序進(jìn)行處理，并且按照既定分組觀察其污染情況。對于與密封性無關(guān)的缺陷（如外觀缺陷）樣品也應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)，不得簡單地直接將這部分樣品（或其微生物培養(yǎng)結(jié)果）剔除。有密封性缺陷的樣品可作廢品剔除，但應(yīng)當(dāng)記錄剔除數(shù)量和原因。培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)的任何損壞樣品，也應(yīng)列入培養(yǎng)基灌裝試驗的批記錄數(shù)據(jù)中。如果要將這類已培養(yǎng)的樣品從最后的結(jié)果判定計算中剔除，則必須充分說明理由，并在培養(yǎng)基灌裝試驗報告中做出合理解釋。

通常培養(yǎng)基樣品的培養(yǎng)溫度應(yīng)適宜于一般微生物和環(huán)境分離菌的恢復(fù)生長，藥品生產(chǎn)企業(yè)采用的常規(guī)做法是PIC/S推薦的先在20～25℃下培養(yǎng)7天，然后將培養(yǎng)基樣品倒置，在30～35℃下培養(yǎng)7天，在樣品倒置處理過程中注意觀察樣品培養(yǎng)結(jié)果。當(dāng)培養(yǎng)結(jié)果出現(xiàn)陽性時，需要對樣品進(jìn)行拍照（照片上應(yīng)保存當(dāng)前時間和地點），并將樣品移出培養(yǎng)間直至遠(yuǎn)離生產(chǎn)區(qū)域再作處理。需要注意的是，陽性培養(yǎng)基樣品的進(jìn)一步處理及微生物種屬的鑒定都需要額外處理，必要時，還要評估確保這些處理方法不會對生產(chǎn)車間、產(chǎn)品生產(chǎn)、無菌試驗等產(chǎn)生不良影響。

培養(yǎng)基樣品就是模擬灌裝試驗的產(chǎn)品，經(jīng)過兩個階段的培養(yǎng)，參照常規(guī)產(chǎn)品的結(jié)果檢查事項，對培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行檢查，除了需要關(guān)注污染、長菌的結(jié)果之外，還要關(guān)注產(chǎn)品灌裝的常規(guī)異常，比如加塞異常、軋蓋異常、玻璃瓶裂紋、黑點、纖毛、玻璃碎屑等。對于各種異常，應(yīng)建立賬本進(jìn)行登記，并保存相應(yīng)的樣品或者照片。將培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的結(jié)果與該生產(chǎn)周期中的所有生產(chǎn)批次產(chǎn)品的灌裝檢查結(jié)果進(jìn)行對比分析，以便確認(rèn)兩者之間的差異情況。

在樣品培養(yǎng)檢查過程中發(fā)現(xiàn)的所有被懷疑可能受到污染的樣品，應(yīng)立即交給質(zhì)量檢測試驗室的微生物專業(yè)人員進(jìn)行鑒定處理。假如難以判斷微生物污染是由損壞引起，還是本身就存在，則應(yīng)進(jìn)行調(diào)查，以確定原因。

為評估產(chǎn)品正式灌裝前的污染風(fēng)險，可將用于先期調(diào)試的樣品全部單獨培養(yǎng)以獲得有價值的信息。這些樣品的培養(yǎng)結(jié)果可以不計入最后的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗結(jié)果。培養(yǎng)基灌裝記錄應(yīng)包括對一整批灌裝過程中報廢數(shù)量的詳細(xì)說明。

2 培養(yǎng)基模擬灌裝試驗異常結(jié)果的調(diào)查與樣品管理

培養(yǎng)基培養(yǎng)完成后，目檢培養(yǎng)基是否渾濁，是否有微生物生長。培養(yǎng)基樣品的檢查要由經(jīng)過培訓(xùn)、有資質(zhì)的能夠發(fā)覺微生物生長跡象的人員負(fù)責(zé)。需要注意的是，并不是所有的污染都會明顯表現(xiàn)出來，當(dāng)出現(xiàn)疑似污染時，應(yīng)進(jìn)一步培養(yǎng)觀察，并做增菌試驗。

結(jié)合GMP要求，錢靜杰[1]等總結(jié)出了培養(yǎng)基模擬灌裝試驗失敗調(diào)查的內(nèi)容，包括：生產(chǎn)環(huán)境的監(jiān)控數(shù)據(jù)評估、對培養(yǎng)基污染的評估、替代粉末無菌測試的評估、對氣體取樣結(jié)果的評估、對水的微生物的評估、對培養(yǎng)基的評估、懸浮粒子監(jiān)控評估、清潔和消毒評估、模擬灌裝用無菌消毒劑的配制檢查、人員評估、干預(yù)操作的評估、灌裝生產(chǎn)設(shè)備的評估等。

培養(yǎng)基模擬灌裝試驗檢查結(jié)果合格后，一般都會將培養(yǎng)基樣品進(jìn)行報廢處理，具體程序參照產(chǎn)品報廢程序進(jìn)行。筆者認(rèn)為，即便是培養(yǎng)結(jié)果正常的無污染培養(yǎng)基樣品的報廢，也應(yīng)保存到下一個生產(chǎn)周期之后再進(jìn)行處理比較合適。

對于無微生物污染的其他檢查結(jié)果異常的產(chǎn)品，比如加塞異常、軋蓋異常、玻璃瓶裂紋、黑點、纖毛、玻璃碎屑等，應(yīng)保存樣品且拍照。樣品可以用于對檢查過程的可靠性進(jìn)行重復(fù)考察。對于這些異常樣品，可以按照GMP認(rèn)證周期進(jìn)行管理，保存5年。

對于微生物污染的樣品，拍照后及時清理生產(chǎn)區(qū)，并對培養(yǎng)環(huán)境做必要的清潔消毒。然后送到質(zhì)量檢測試驗室進(jìn)行微生物鑒別考察，以便確定污染來源。鑒別結(jié)果也應(yīng)拍照，所有拍照結(jié)果有必要向模擬灌裝試驗的相關(guān)人員進(jìn)行講解，增強(qiáng)對無菌灌裝生產(chǎn)與培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的微生物污染風(fēng)險的認(rèn)識，以便更好地控制微生物污染。

3 結(jié)語

培養(yǎng)基模擬灌裝試驗用于生產(chǎn)周期內(nèi)產(chǎn)品生產(chǎn)的無菌保障能力的評估，毫無疑問，在模擬灌裝試驗的管理過程中，需要結(jié)合生產(chǎn)線的具體情況，建立培養(yǎng)基樣品的微生物培養(yǎng)檢查結(jié)果與產(chǎn)品生產(chǎn)的無菌檢查灌裝結(jié)果之間的關(guān)聯(lián)性，這樣才能確保這種評估的可靠性和實際的生產(chǎn)管理意義。相反，如果沒有完成這項工作，再多的、生產(chǎn)規(guī)模再大的模擬灌裝試驗只能是徒增企業(yè)管理生產(chǎn)成本，毫無價值可言。

對于培養(yǎng)基樣品的異常結(jié)果，應(yīng)給予與產(chǎn)品異常結(jié)果同等的關(guān)注，不斷探索微生物培養(yǎng)結(jié)果檢查過程和微生物培養(yǎng)結(jié)果判定的可靠性，確認(rèn)培養(yǎng)基試驗的微生物培養(yǎng)結(jié)果與產(chǎn)品灌裝生產(chǎn)的無菌檢查結(jié)果之間的高度關(guān)聯(lián)性，是模擬灌裝試驗的終極目的。同時，在設(shè)計培養(yǎng)基模擬灌裝試驗方案時，考察無菌灌裝生產(chǎn)過程的最差條件、因素同樣重要，可以確保產(chǎn)品生產(chǎn)的無菌保障能力的有效性和可靠性。