林昆

摘要 本文對(duì)嘧菌酯與烯酰嗎啉的復(fù)配殺菌劑對(duì)水生生物的毒性及安全性展開研究。根據(jù)國(guó)家《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》中農(nóng)藥對(duì)水生生物的毒性等級(jí)，分別測(cè)定其對(duì)斑馬魚、大型溞、小球藻的急性毒性，對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)魚類屬于中毒藥劑，對(duì)溞類有高毒性作用，對(duì)藻類低毒。因此，田間使用時(shí)仍應(yīng)注意控制使用劑量和劑型選擇等，盡量減小其對(duì)環(huán)境的危害。

關(guān)鍵詞 50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑；水生生物；毒性；安全性評(píng)估

中圖分類號(hào) S481+.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）02-0186-02

Evaluation of Toxicity and Safety of 50% Dimethomorph·Azoxystrobin WP to 3 Kinds of Aquatic Organisms

LIN Kun

（College of Plant Protection，Hunan Agricultural University，Changsha Hunan 410128）

Abstract In this paper，the toxicity and safety of the compound bactericide of dimethomorph and azoxystrobin on aquatic organisms were studied. According to the toxicity grade of pesticides on aquatic organisms in "Test guidelines on environment safety assessment for chemical pesticides"，the acute toxicity were measured on zebrafish，daphnia and chlorella，the safety was evaluated. The results showed that 50% dimethomorph·azoxystrobin WP was a kind of medium toxic agent for fish，which was high toxicity for daphnia，and low toxicity for chlorella. Therefore，dosage and dosage form selection should be controlled in the field，so as to minimize the harm to the environment.

Key words 50% dimethomorph·azoxystrobin WP；aquatic organism；toxicity；safety evaluation

甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑是目前全球市場(chǎng)銷量最大的一類殺菌劑，隨著使用年限的增加，使用單一成分殺菌效果越來(lái)越差，隨之越來(lái)越多與之進(jìn)行復(fù)配的殺菌產(chǎn)品逐漸取代單一成分的使用。

嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯類的主流應(yīng)用成分之一，與之復(fù)配產(chǎn)生的殺菌劑產(chǎn)品層出不窮，其中與烯酰嗎啉的復(fù)配制劑在黃瓜霜霉病的防治上得到廣泛應(yīng)用，且使用量逐年增加，隨之產(chǎn)生的殘留成分進(jìn)入水體，可能會(huì)對(duì)水環(huán)境造成污染，并可能對(duì)生物造成不可預(yù)估的危害[1-2]。

為了評(píng)估嘧菌酯與烯酰嗎啉的復(fù)配類殺菌劑對(duì)水生生物的毒性及安全性，選用50%烯酰嗎啉·嘧菌酯（30∶20）可濕性粉劑，根據(jù)國(guó)家《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》中農(nóng)藥對(duì)水生生物的毒性等級(jí)，分別測(cè)定其對(duì)斑馬魚、大型溞、小球藻的急性毒性，并對(duì)其進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，以期為正確評(píng)價(jià)其對(duì)水生系統(tǒng)可能造成的危害提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試生物。斑馬魚（Brachydonto rerlo H-B.），體長(zhǎng)（3.0±0.5）cm、體重（0.3±0.1）g，由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所提供。試驗(yàn)前在室內(nèi)馴養(yǎng)1周，馴養(yǎng)期間斑馬魚生長(zhǎng)正常，死亡率<2%，試驗(yàn)用魚健康無(wú)病、大小一致。試驗(yàn)前24 h停止喂食，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程不進(jìn)行喂食。

大型溞（Daphnia magna Straus），由實(shí)驗(yàn)室保存的種溞經(jīng)馴養(yǎng)后用于試驗(yàn)。在玻璃缸內(nèi)放入預(yù)先曝氣24 h以上的自來(lái)水，再放入數(shù)十個(gè)大型溞，然后以實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的小球藻、斜生柵藻混合液喂養(yǎng)大型溞。于（20±2）℃條件下培養(yǎng)，避免陽(yáng)光直射。每隔幾天換一次水，每天注意觀察大型溞生長(zhǎng)狀況并及時(shí)添加藻類，一旦發(fā)現(xiàn)有懷卵母溞即將其移至另外的缸內(nèi)培養(yǎng)[1]。每天定時(shí)將小溞移出。毒性試驗(yàn)用的溞為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的孤雌生殖三代以后的幼溞，溞齡為出生6～24 h以內(nèi)，幼溞健康活潑。

小球藻（Chlorella vulgarts Beij.），藻類購(gòu)自中科院水生生物研究所淡水藻種庫(kù)。培養(yǎng)方法為將藻種接入盛有SE培養(yǎng)液的三角瓶，置于光照搖床中培養(yǎng)，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期即可用于毒性試驗(yàn)[2]。

1.1.2 供試藥劑。50%烯酰嗎啉·嘧菌酯（30∶20）可濕性粉劑，由湖南農(nóng)大海特農(nóng)化有限公司制備提供。

1.1.3 主要儀器設(shè)備。天平、溶解氧測(cè)定儀、溫度計(jì)、pH計(jì)、魚缸、量筒、天平、移液器、顯微鏡、高壓蒸汽滅菌鍋、光照搖床、血球計(jì)數(shù)板、玻璃器皿等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 魚類急性毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)用水為經(jīng)活性炭過(guò)濾的自來(lái)水，試驗(yàn)容器為15 L玻璃缸，試驗(yàn)玻璃缸全部放入大水浴槽內(nèi)。每個(gè)試驗(yàn)缸中配置10 L不同濃度的藥液，并投入斑馬魚10條，調(diào)節(jié)水浴溫度使水溫保持在（23±2）℃。endprint

試驗(yàn)前按正式試驗(yàn)條件預(yù)試，求出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)斑馬魚全部致死的最低濃度和全部存活的最高濃度。正式試驗(yàn)在此濃度范圍內(nèi)，按級(jí)差設(shè)置5組不同濃度（2.00、2.40、2.88、3.46、4.15 mg/L）的藥液，另設(shè)一組空白對(duì)照（CK）。試驗(yàn)采用每隔24 h更換一次藥液的半靜態(tài)法，定時(shí)測(cè)定各缸中試液的溶解氧pH值。試驗(yàn)歷時(shí)96 h，連續(xù)觀察記錄24、48、72、96 h斑馬魚的中毒癥狀和死亡數(shù)，及時(shí)清除死魚。用概率統(tǒng)計(jì)法求出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)斑馬魚的半致死濃度LC50值[3-4]。

1.2.2 溞類急性活動(dòng)抑制試驗(yàn)。預(yù)試驗(yàn)：以較大的濃度間距設(shè)3個(gè)濃度組，每個(gè)濃度放5只幼溞，于48 h時(shí)觀察溞類的運(yùn)動(dòng)情況，得出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)溞類100%活動(dòng)受抑制的最低濃度和全不抑制的最高濃度，以確定正式試驗(yàn)的濃度范圍。

正式試驗(yàn)：在預(yù)試驗(yàn)所確定的濃度范圍內(nèi)，按一定時(shí)間確定5個(gè)試驗(yàn)濃度（0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L），同時(shí)設(shè)不加藥劑的空白對(duì)照組。試驗(yàn)時(shí)在100 mL燒杯中裝入50 mL不同濃度的50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑藥液，每只燒杯放入5只幼溞，幼溞溞齡6～24 h，每個(gè)濃度設(shè)4次重復(fù)，于24、48 h觀察記錄活動(dòng)受抑制的幼溞數(shù)。試驗(yàn)期間不投餌料[5]。

參比物質(zhì)試驗(yàn)：參比物質(zhì)為分析純重鉻酸鉀。按上述試驗(yàn)步驟測(cè)定重鉻酸鉀對(duì)大型溞的24 h的EC50值。

1.2.3 藻類生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)。預(yù)試驗(yàn)：以較大的間距設(shè)5個(gè)濃度，以確定50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)于藻類毒性范圍。在250 mL三角瓶中加入100 mL含不同濃度50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑藥液的SE培養(yǎng)液，再接種小球藻。置于光照搖床中培養(yǎng)，于0～72 h取樣，在顯微鏡下以血球計(jì)數(shù)板測(cè)定50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)藻類的毒性影響范圍[6]。

正式試驗(yàn)：在預(yù)試驗(yàn)確定的濃度范圍內(nèi)以一定的間距設(shè)5個(gè)濃度組（2、4、8、16、32 mg/L），并設(shè)空白對(duì)照組（CK），每組3次重復(fù)。按同樣的方法將50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑加入培養(yǎng)液，然后接種藻細(xì)胞，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每隔24 h測(cè)定各處理的藻細(xì)胞數(shù)（以血球計(jì)數(shù)板測(cè)定各處理組的藻密度值，每個(gè)培養(yǎng)液至少計(jì)數(shù)2次，求出平均值。如果2次計(jì)數(shù)結(jié)果相差較大，則應(yīng)重復(fù)計(jì)數(shù)[3]），并計(jì)算各處理濃度下藻類生長(zhǎng)抑制率，并據(jù)此計(jì)算72h的EC50值。測(cè)定試驗(yàn)開始及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的pH值。

2 結(jié)果與分析

2.1 50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)斑馬魚的毒性

試驗(yàn)過(guò)程中，試液溶解氧保持在（8.3±0.3）mg/L，pH值保持在7.5±0.2，空白對(duì)照組（CK）的斑馬魚全部生長(zhǎng)正常，無(wú)一死亡。試驗(yàn)斑馬魚接觸50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑試液以后，低濃度組的斑馬魚中毒癥狀不明顯；高濃度組的斑馬魚身體側(cè)倒，鰓充血，呼吸急促，全身抽搐，身體扭曲變形，尾部痙攣，在水中上下翻滾，呈難受狀態(tài)，身體失去平衡，腹部朝上，5 h后出現(xiàn)死亡。根據(jù)試驗(yàn)藥液濃度和各組斑馬魚的死亡率得出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)斑馬魚的LC50（96 h）為3.10 mg/L（表1）。

2.2 50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)大型溞的毒性

試驗(yàn)過(guò)程中，試液溶解氧保持在8.0 mg/L以上，pH值在7.5左右?？瞻讓?duì)照組（CK）的大型溞全部生長(zhǎng)正常，無(wú)一死亡。大型溞接觸50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑藥液后，各濃度組受試溞活動(dòng)受到不同程度抑制，抑制溞個(gè)體脹大、體色發(fā)白、沉于水底。根據(jù)各處理組的藥液濃度及大型溞的死亡數(shù)，計(jì)算得出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)大型溞的EC50（48 h）為0.45 mg/L（表2）。

2.3 50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)小球的藻毒性

由表3可知，試驗(yàn)期間各處理pH值變化<1.5，滿足試驗(yàn)要求。

根據(jù)各處理濃度及小球藻的生長(zhǎng)抑制率（表4），計(jì)算得出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對(duì)小球藻的EC50（72 h）為6.56 mg/L。

2.4 毒性等級(jí)劃分

根據(jù)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》，農(nóng)藥對(duì)魚類的毒性分為4個(gè)等級(jí)，即LC50（96 h）>10.0 mg/L、1.0

農(nóng)藥對(duì)溞類的毒性分為4個(gè)等級(jí)，EC50（45 h）>10.0 mg/L、1.0

農(nóng)藥對(duì)藻類的毒性分為3個(gè)等級(jí)，EC50（72 h）>3.0 mg/L為低毒，0.3

于低毒。

3 討論

本試驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室條件下開展，未考慮田間實(shí)際施藥情況，如田間實(shí)際用藥量、施藥次數(shù)、多次累積效果、成分降解速率等，也未進(jìn)行烯酰嗎啉和嘧菌酯對(duì)水生生物可能存在的慢性或長(zhǎng)期毒性效應(yīng)的研究。因此，田間使用時(shí)仍應(yīng)注意控制使用劑量和劑型選擇等，盡量減小其對(duì)環(huán)境的危害。

4 參考文獻(xiàn)

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