王躍峰 牛思琪 笪舫芳 王 劍 朱 華*

1.成都中醫(yī)藥大學(xué),四川 成都 610075; 2.廣西民族大學(xué),廣西 南寧 530006;3.廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西 南寧 530200

中藥材是人們用以防病、治病的特殊商品，因其具有療效獨(dú)特、資源豐富、不良反應(yīng)少等優(yōu)勢(shì)[1]，在國(guó)內(nèi)外掀起了綠色消費(fèi)熱潮。為滿足日益增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求，中藥材開(kāi)始像水稻、蔬菜等農(nóng)作物一樣，進(jìn)行農(nóng)業(yè)化人工種植[2]。大面積種植中藥材易造成病蟲(chóng)害相互傳染，且栽培過(guò)程中藥農(nóng)嚴(yán)重依賴具有高效、速效、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)的化學(xué)農(nóng)藥，而過(guò)量施用農(nóng)藥或施用農(nóng)藥不當(dāng)致使中藥材農(nóng)藥殘留量超標(biāo)，不僅影響藥材療效，甚至?xí)苯游：θ梭w健康。隨著中藥被檢出重金屬和農(nóng)殘等安全限量超標(biāo)的報(bào)道頻頻出現(xiàn)，中藥材及其制劑的質(zhì)量安全受到質(zhì)疑，嚴(yán)重制約了中藥材及其產(chǎn)品走向國(guó)際舞臺(tái)[3-5]。

為進(jìn)一步加強(qiáng)中藥材的質(zhì)量控制，增加中藥的安全性指標(biāo)，在2015年版《中國(guó)藥典》的基礎(chǔ)上，經(jīng)國(guó)家藥典委員會(huì)組織有關(guān)單位和專(zhuān)家對(duì)黃曲霉毒素、重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留量等有害物質(zhì)的控制方法、限度值以及重點(diǎn)品種進(jìn)行了試驗(yàn)研究[6-8]?！吨袊?guó)藥典》收載的人參、西洋參藥材及其飲片品種項(xiàng)下增加“農(nóng)藥殘留量”部分檢查項(xiàng)目，限度為“含總六六六( δ-BHC、γ-BHC、β-BHC、α-BHC 之和)不得過(guò)0.2 mg /kg；總滴滴涕(op′-DDT、 pp′-DDE、pp′-DDT、pp′-DDD之和)不得過(guò)0.2 mg /kg；五氯硝基苯不得過(guò)0.1 mg /kg”。

廣西產(chǎn)拳卷地錢(qián)來(lái)源為地錢(qián)科地錢(qián)屬植物拳卷地錢(qián)(MarchantiaconvolutaGao et Chang)，為廣西民間常用中草藥之一。其始載于《西藏苔蘚植物志》，廣泛分布在西藏、廣西、貴州等高寒山區(qū)[9]，是苔蘚植物中常見(jiàn)的中草藥之一，常用其外治燙傷骨折、體癬、瘡病不斂，內(nèi)治黃疸性肝炎，獲得了較好的療效[10-11]。近年來(lái)，我國(guó)對(duì)中藥中農(nóng)殘的研究報(bào)道屢見(jiàn)不鮮，農(nóng)殘檢測(cè)主要采用氣相(GC)、高效液相(HPLC)、氣相-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)等檢測(cè)方法[12-15]。筆者就拳卷地錢(qián)中總六六六( δ-BHC、γ-BHC、β-BHC、α-BHC 之和)、總滴滴涕(op′-DDT、 pp′-DDE、pp′-DDT、pp′-DDD之和)和五氯硝基苯9種有機(jī)氯農(nóng)殘進(jìn)行測(cè)定，為控制拳卷地錢(qián)安全限量提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以期為開(kāi)發(fā)利用拳卷地錢(qián)藥材資源提供安全性保障。

1 儀器與材料

1.1 藥材來(lái)源 拳卷地錢(qián)采集于廣西南寧市高峰林場(chǎng)，經(jīng)生藥學(xué)專(zhuān)家韋松基教授教授鑒定為地錢(qián)科地錢(qián)屬植物拳卷地錢(qián)(MarchantiaconvolutaGao et Chang)。

1.2 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品 α-六六六標(biāo)準(zhǔn)品、β-六六六標(biāo)準(zhǔn)品、γ-六六六標(biāo)準(zhǔn)品、δ-六六六標(biāo)準(zhǔn)品、P-P’-滴滴涕標(biāo)準(zhǔn)品、P-P’-滴滴滴標(biāo)準(zhǔn)品、P-P’-滴滴伊標(biāo)準(zhǔn)品、O-P’-滴滴涕標(biāo)準(zhǔn)品、純度≥99.99%；

1.3 試劑 石油醚、苯、丙酮、乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉、正己烷等試劑均為分析純；40g/L氯化鈉水溶液；弗羅里硅土：層析用，于620℃灼燒4 h后備用，用前140℃烘2 h，趁熱加5%水滅活。

1.4 儀器 氣相色譜儀(ECD檢測(cè)器)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；電動(dòng)振蕩器；高速離心機(jī)；200 g小型粉碎機(jī)；組織搗碎機(jī)；10 μL微量注射器：髙速分散器；硅鎂吸附劑預(yù)處理小柱。

2 方法與結(jié)果

2.1 有機(jī)氯農(nóng)藥多種殘留量的測(cè)定

2.1.1 試樣制備 取所采集的干燥拳卷地錢(qián)經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過(guò)20目篩制成試樣。

2.1.2 提取 稱(chēng)取10 g試樣(精確到0.00 lg)，加入100 mL三角瓶，加入20 mL石油醚，于振蕩器上振搖0.5 h。凈化：①層析柱的制備:玻璃層析柱中先加入1 cm高無(wú)水硫酸鈉，再加入5 g 5%水脫活弗羅里硅土，最后加入1 cm高無(wú)水硫酸鈉，輕輕敲實(shí)，用20 mL石油醚淋洗凈化柱。②凈化與濃縮：吸取試樣2 mL，用100 mL石油醚-乙酸乙酯(95∶5)洗脫，收集洗脫液于蒸餾瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，石油醚少量多次溶解殘?jiān)?，定容?.0 mL，供氣相色譜分析。

2.1.3 測(cè)定

2.1.3.1 氣相色譜參考條件 色譜柱：石英彈性毛細(xì)管柱，0.25 mm(內(nèi)徑)×15 m；氣體流速：氮?dú)?0 mL/min，尾吹氣60 mL/min，分流比1∶50；溫度：180℃升至230℃，30 min；檢測(cè)器、進(jìn)樣口溫度250℃。

2.1.3.2 色譜分析 吸取1 μL試樣液注入氣相色譜儀，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰高。再吸取1μL混合標(biāo)準(zhǔn)使用液進(jìn)樣，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰高。根據(jù)組分在色譜上的出峰時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)組分比較定性；用外標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)組分比較定量。

2.2 五氯硝基苯殘留量的測(cè)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品制備 五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)貯備液和中間液:準(zhǔn)確稱(chēng)取五氯硝基苯0.0100 g，用正己烷溶解，100 mL容量瓶定容，濃度為100 μg/mL；供試液，稀釋100倍，標(biāo)準(zhǔn)中間液濃度：1 μg/mL。五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)使用液:取中間液配制成：0.005、0.010、0.050、0.100、0.150 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)使用液。載體：Chromsorb W AW 80～100目。固定液:OV-17 和 QF-1。

2.2.2 提取 稱(chēng)取經(jīng)粉碎過(guò)40目篩的試樣5.0 g置于50 mL離心管中，加20 mL正己烷，高速分散器 (10000 r/min)分散4 min，離心(2000 r/min)5 min，將提取液移入25mL容最瓶中，向離心管中加5 mL正己炫，按上法再提取一遍，將提取液合并，定容至25.0 mL。

2.2.3 凈化預(yù)處理 柱的凈化：1 mL丙酮-正己烷(1+9)分兩次淋洗，再用1 mL正己烷淋洗。將提取液5 mL過(guò)柱，K-D濃縮器集于液體收，丙酮-正己烷(1+9)3mL淋洗，淋洗液并入上述K-D濃縮器，吹氮?dú)鉂饪s至1mL，備用。2.2.4 氣相色譜參考條件 進(jìn)樣口溫度：23℃；檢測(cè)器溫度：230℃；柱箱溫度：190℃；載氣(N2)流速：50 mL/min；色譜柱：內(nèi)徑3 mm，柱長(zhǎng)1.5 m，玻璃柱，內(nèi)裝涂以1.5%OV-17+2%QF-l固定液，載體為80～100目Chromsorb W AW。

2.2.5 測(cè)定 五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)使用液、試樣各1 μL注入氣相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算五氯硝基苯的含量。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 廣西產(chǎn)拳卷地錢(qián)中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果

3 討論

由于農(nóng)藥品種繁多，性質(zhì)各異，近幾年其檢測(cè)技術(shù)主要是色譜法，其中以氣相色譜應(yīng)用最為廣泛。該法檢測(cè)靈敏度高、簡(jiǎn)便快捷、分離效果好，可作為拳卷地錢(qián)農(nóng)殘安全限量監(jiān)測(cè)及質(zhì)量控制的有效手段。筆者采用氣相色譜法對(duì)9種有機(jī)氯進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果為總六六六( α-BHC、β-BHC、γ-BHC、 δ-BHC之和)未檢出；總滴滴涕( pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT 之和)未檢出；五氯硝基苯未檢出。參考《中國(guó)藥典》收載的人參、西洋參藥材及其飲片品種項(xiàng)下“農(nóng)藥殘留量”“檢查限度”含總六六六( α-BHC、β-BHC、γ-BHC、 δ-BHC之和)不得過(guò)0.2 mg /kg；總滴滴涕( pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT 之和)不得過(guò)0.2 mg /kg；五氯硝基苯不得過(guò)0.1 mg /kg，可見(jiàn)9種有機(jī)氯農(nóng)殘檢出結(jié)果均合格。

拳卷地錢(qián)采于廣西南寧高峰林場(chǎng)，為南寧市近郊，但其為野生藥材，與農(nóng)作物交集較少，生長(zhǎng)在較天然環(huán)境下，故農(nóng)殘含量結(jié)果未檢出說(shuō)明其生長(zhǎng)環(huán)境農(nóng)藥污染不明顯。

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