乜照燕 張 娜 甄秀麗 趙素英 張 軼 吳海峰

1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院(石家莊，050011)；2.河北省胸科醫(yī)院

染色體多態(tài)性存在于不同人群個(gè)體之間，主要包括1、9、16 號(hào)染色體次縊痕增加或缺失，D/G組染色體隨體區(qū)變異，9號(hào)染色體臂間倒位以及Y染色體長(zhǎng)臂長(zhǎng)度等變異[1]。一般認(rèn)為染色體多態(tài)性不會(huì)引起個(gè)體臨床表型變化，但近年研究表明染色體多態(tài)性可能導(dǎo)致某些臨床效應(yīng)，如不孕不育、習(xí)慣性流產(chǎn)[2-3]等。在體外受精(IVF)過(guò)程中，不同類(lèi)型的男性染色體多態(tài)性的臨床結(jié)局存在爭(zhēng)議。本文旨在探討男性染色體多態(tài)性與輔助生育結(jié)局的關(guān)系，為輔助生殖咨詢(xún)提供相關(guān)臨床依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象

經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者知情同意選擇 2014年6月-2016年6月在本院接受常規(guī)IVF治療的夫婦198對(duì)，為排除女性年齡和不孕因素對(duì)卵子質(zhì)量、受精、著床等因素的影響，女性配偶以年齡<35歲、單純輸卵管因素不孕、基礎(chǔ)卵泡生成素( FSH)水平≤8 U/L、基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)≥8個(gè)、染色體正常、首次行新鮮周期胚胎移植、黃體期長(zhǎng)方案為入組條件。根據(jù)男方染色體多態(tài)性分為4組，D/G隨體增加為A組21例，次溢痕增加( 包括1號(hào)、9 號(hào)、16號(hào)染色體)為B組20例，9號(hào)染色體臂間倒位者為C組17例，Y染色體變異( 包括大Y和小Y)為D組20例，男性染色體正常者120例作為對(duì)照組。

1.2 研究方法

1.2.1外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析于IVF-ET術(shù)前, 所有對(duì)象進(jìn)行常規(guī)外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，染色體制備主要采用G顯帶技術(shù)進(jìn)行染色，對(duì)至少30個(gè)分裂中期細(xì)胞進(jìn)行分析，配對(duì)3個(gè)核型，顯帶分辨率在400～550條帶，按人類(lèi)細(xì)胞學(xué)國(guó)際命名體制(ISCN2016)進(jìn)行染色體核型分析。

1.2.2精液常規(guī)檢查取卵當(dāng)日男方收集精液，精液液化后按照參考文獻(xiàn)[4]行精液常規(guī)檢查。精子形態(tài)學(xué)分析采用Diff-Quick快速染色方法染色，采用Kruger精子形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，頭、頸、中段和尾部均正常的精子認(rèn)定為正常，所有形態(tài)學(xué)處于臨界狀態(tài)的精子均列為異常。計(jì)數(shù)精子200條計(jì)算正常精子形態(tài)百分率(≥4%為正常)。精子存活率采用伊紅-苯胺黑染色(深圳華康生物醫(yī)學(xué)工程有限公司)，計(jì)算著色和不著色精子的比例。

1.2.3體外受精及妊娠結(jié)局采用黃體期長(zhǎng)方案控制性促排卵，女方取卵同時(shí)男方收集精液，精液充分液化后，用Spermgrad 梯度離心處理精液，調(diào)整精子濃度為10×106/ml，取卵后3～4 h加入精子，16～20h觀(guān)察受精情況。72 h觀(guān)察胚胎發(fā)育情況，并評(píng)定胚胎質(zhì)量，移植胚胎。優(yōu)質(zhì)胚胎標(biāo)準(zhǔn)：第3天胚胎細(xì)胞總數(shù)≥7個(gè)，碎片≤20%。取卵日開(kāi)始每日肌注黃體酮60 mg支持黃體。胚胎移植后14d尿妊娠試驗(yàn)或血β-hCG確定生化妊娠，移植后35d B超見(jiàn)孕囊診斷臨床妊娠，≤12周妊娠終止為早期流產(chǎn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，多樣本率兩兩比較的χ2分割法，計(jì)量資料采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基本情況

男方年齡23～45歲，女方年齡27～34歲；不孕年限1～8年。5組對(duì)象在女方年齡、體質(zhì)量指數(shù)、基礎(chǔ)性激素水平和卵泡數(shù)等比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.2 女方促排卵情況

5組對(duì)象女方促性腺激素(Gn)用量、Gn天數(shù)、人絨毛膜促性腺激素(hCG)日E2、hCG日內(nèi)膜厚度、獲卵數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0. 05)。

2.3 男方精液基本情況

5組精液量、精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、精子存活率以及精子正常形態(tài)相比無(wú)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組對(duì)象精液基本情況比較±s)

2.4 男方IVF結(jié)局情況

5組對(duì)象間正常受精率、總受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、植入率、妊娠率、流產(chǎn)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組對(duì)象體外受精情況比較[%(例)]

3 討論

傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為染色體多態(tài)性多是無(wú)意義重復(fù)序列，不引起臨床表型異常。但隨著分子細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展和對(duì)非編碼基因研究的深入，越來(lái)越多的研究認(rèn)為染色體的多態(tài)部分可能會(huì)在細(xì)胞分裂過(guò)程中造成同源染色體配對(duì)困難，導(dǎo)致染色體不分離，形成異常配子，胚胎發(fā)生染色體非整倍性改變引發(fā)流產(chǎn)、不育不孕及其它臨床效應(yīng)[5-7]。此外，異染色質(zhì)在著絲粒功能方面起著重要的作用，它是姐妹染色單體結(jié)合和分離所必需的[7]，染色體主縊痕區(qū)著絲粒-動(dòng)粒復(fù)合體(CKC)是染色體運(yùn)動(dòng)和均等分離的結(jié)構(gòu)和功能基礎(chǔ)。CKC形態(tài)發(fā)生變化，可能會(huì)干擾染色體正常運(yùn)動(dòng)和分離[8]。有研究認(rèn)為染色體多態(tài)性可降低妊娠率增加流產(chǎn)率[9-12]。也有學(xué)者認(rèn)為染色體多態(tài)性與生殖異常沒(méi)有直接關(guān)系，不影響生育[13-14]。染色體多態(tài)性對(duì)生殖功能的影響一直存在爭(zhēng)議。大部分關(guān)于多態(tài)性的研究都是針對(duì)所有多態(tài)性對(duì)結(jié)局的影響，對(duì)于不同類(lèi)別多態(tài)性對(duì)助孕結(jié)局影響尚需進(jìn)一步研究。

戴小凡等[15]研究發(fā)現(xiàn)染色體多態(tài)性與精液質(zhì)量無(wú)明顯的相關(guān)性。本文資料顯示，不同類(lèi)型的染色體多態(tài)性男性精液質(zhì)量與對(duì)照組相比未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。有研究稱(chēng)在Y染色體上有一些與男性生殖相關(guān)的基因，Y染色體的結(jié)構(gòu)多態(tài)性變異，可能會(huì)對(duì)這些功能區(qū)域產(chǎn)生影響，導(dǎo)致精子質(zhì)量下降。由于本研究數(shù)量有限，且所選病例接受常規(guī)IVF助孕，一般都是精液正?；蛘呔嘿|(zhì)量稍差男性，故在本研究中未發(fā)現(xiàn)男性染色體多態(tài)對(duì)精液質(zhì)量影響。

Bhasin等[16]對(duì)1978對(duì)行IVF不孕不育夫婦進(jìn)行染色體多態(tài)性研究，認(rèn)為染色體多態(tài)性對(duì)于IVF-ET的臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率及活產(chǎn)率無(wú)明顯影響。高輝[17]報(bào)道染色體多態(tài)性對(duì)于IVF/ICSI-ET治療患者的胚胎種植率、臨床妊娠率和早期流產(chǎn)率均無(wú)明顯影響。而郭威等[18]研究認(rèn)為男性染色體多態(tài)性可能導(dǎo)致ICSI-ET中多原核受精率上升，但對(duì)IVF/ICSI-ET結(jié)局均無(wú)明顯影響。本研究對(duì)象為常規(guī)IVF受精，未發(fā)現(xiàn)染色體多態(tài)性患者受精率有異常；不同類(lèi)型多態(tài)性組與正常組相比，受精率、卵裂率、優(yōu)胚率、胚胎種植率、臨床妊娠率及早期流產(chǎn)率均無(wú)差異；在染色體多態(tài)性組，流產(chǎn)率有增高趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能與病例數(shù)較少有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，男性染色體多態(tài)并不影響IVF助孕治療的結(jié)局。未來(lái)可能需要通過(guò)分子遺傳學(xué)技術(shù)對(duì)特定的多態(tài)區(qū)域的關(guān)鍵基因進(jìn)行檢測(cè)確診，以為臨床和遺傳咨詢(xún)提供更詳細(xì)的指導(dǎo)。