單 思，嚴小軍，劉紅寧

（1.江西省中醫(yī)病因生物學重點實驗室 南昌 330004；2.江西中醫(yī)藥大學中醫(yī)基礎理論分化發(fā)展研究中心 南昌 330004）

中醫(yī)防治疾病講求“謹察陰陽所在而調(diào)之，以平為期”，調(diào)整陰陽是臨床防治疾病的根本法則之一，故而辨析陰陽病機在中醫(yī)臨床治療中尤為重要。而陰虛是臨床常見病機之一。近年來，在陰虛的實驗研究和臨床研究方面開展了多層次、多角度、多系統(tǒng)的研究，并取得了一定的進展。

1 陰虛實驗動物模型的建立

目前建立陰虛實驗動物模型的模型的思路分別從模擬陰虛證證候特點、病因病機和臨床高發(fā)病等3個方面造模。

1.1 模擬陰虛證臨床表現(xiàn)造模

模擬陰虛證臨床表現(xiàn)造模主要采取給予甲狀腺素類和腎上腺皮質(zhì)類激素及手術干預激素分泌的方式。楊正標等[1]每日予以SD大鼠0.05 g·mL-1甲狀腺片混懸液1 mL·100 g-1體重灌胃，連續(xù)7天，建立腎陰虛模型。賀玉偉等[2]連續(xù)給予小鼠不同劑量(40 mg·kg-1、80 mg·kg-1、160 mg·kg-1)的甲狀腺片混懸液0.2 mL·10g-1灌胃14天，建立陰虛火旺模型。王水華等[3]予Wistar大鼠氫化可的松50 mg·kg-1灌胃給藥7天，建立腎陰虛證模型。倪莉等[4]以0.35 mg·kg-1地塞米松磷酸鈉肌肉注射雄性SD大鼠造陰虛模型。孫錦秀等[5]每天給予SD雄性大鼠腹腔注射促皮質(zhì)素（ACTH，16 u·kg-1）1次，連續(xù)4天，建立大鼠陰虛火旺證模型。除了給予激素類藥物外，還可通過手術干預激素分泌復制陰虛模型。王旭等[6]耳尖刺血組行雙側(cè)卵巢切除術建立陰虛火旺模型。

1.2 模擬陰虛證的病因病機造模

模擬陰虛證病因病機造模多采用溫燥性中藥造模、形勞傷陰造模、利水傷陰造模、暴怒傷陰造模、特殊氣候造模、飲食偏嗜造模、復合造模等方式[7]。李莉等[8]給予SD大鼠燥熱耗陰中藥草烏水濃縮煎劑0.2 mL·kg-1，連續(xù)灌胃7天造模。馮志毅等[9]將家兔實驗前禁水禁食18 h，耳緣靜脈注射速尿注射液（2.5 mL·kg-1），1 h重復注射，再過1 h后耳緣靜脈注射大腸桿菌300 EU·kg-1，建立陰虛熱盛模型。汪泳濤等[10]予大鼠游泳6周，5天·周-1，1次·天，日游泳時間由10 min逐日增加至第5周末120 min，持續(xù)1周至造模結(jié)束，建立建立陰虛內(nèi)熱模型。金培志等[11]通過激怒大鼠建立肝腎陰虛證模型。凌昌全等[12]將大鼠置于干球40℃，濕球32℃人工氣候室內(nèi)進行熱應激3 h處理，建立“熱損傷陰”模型。宋建平等[13]給予高鹽飼料（含食鹽9%）喂養(yǎng)150天，建立陰虛陽亢大鼠模型。

1.3 模擬臨床陰虛高發(fā)病造模

通過復制肝炎，肝硬化等陰虛證高發(fā)疾病的病理特征、病理表現(xiàn)等，從而誘導陰虛證的發(fā)生。劉文蘭等[14]通過大鼠腹腔注射50%CCl4橄欖油溶液誘導肝纖維化大鼠模型，模型組大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量減輕，舌面變干，舌溫度升高，舌血流速度增高，大便干，小便黃，飲水減少，但飲食沒有明顯變化等類似于陰虛證的癥狀。

2 生理生化指標的檢測

中醫(yī)學將人體具有滋養(yǎng)、濡潤、凝聚、抑制等作用的物質(zhì)及其機能稱為“陰”或“陰氣”[15]。陰虛指機體在疾病過程中由陰不足所導致的陰陽失衡的病理狀態(tài)，簡稱陰虛，多表現(xiàn)為精、血、津液等物質(zhì)匱乏，功能虛性亢奮，熱量相對有余[16]。探析陰虛的物質(zhì)基礎和功能基礎需要多系統(tǒng)、多層次的深入研究。目前關于陰虛的研究主要從水液代謝、血液流變、內(nèi)分泌、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、能量代謝、自由基、微量元素等方面著手，為陰虛的深入研究提供一定的參考依據(jù)。

2.1 陰虛與水液代謝

陰多指體內(nèi)血液、唾液、淚水、精液、內(nèi)分泌及油脂分泌等體液，而水是其中主要成分，是人體維持生命的物質(zhì)基礎。人體水液代謝主要通過脾的升清、肺的宣發(fā)和肅降，腎的蒸騰氣化，以三焦為通道，運送到全身，并化為氣、汗液和尿液排出體外，脾肺腎在調(diào)節(jié)水液代謝過程中占據(jù)重要作用。六味地黃丸干預甲狀腺素混懸液灌胃復制腎陰虛大鼠模型可有效糾正其體質(zhì)量顯著降低，飲水量明顯增多，尿量顯著減少等水液代謝紊亂癥狀；下調(diào)肺、腎組織中與機體水液代謝密切相關的水通道蛋白1（Aquaporin 1，AQP1）mRNA和蛋白表達量[17]。另外有文獻報道，六味地黃丸還可有效改善甲狀腺片制備腎陰虛模型大鼠體溫升高和皮膚含水量等水液代謝相關指標的紊亂，下調(diào)水通道蛋白2（Aquaporin 1，AQP2）[18]。AQP1、AQP2參與調(diào)節(jié)機體水平衡、體液容量、滲透壓等，兩者表達升高皆有利于腎臟對水的重吸收。理脾陰正方可改善脾陰虛大鼠模型水液代謝異常的癥狀，上調(diào)回腸上皮細胞中的水通道蛋白 4（Aquaporin 1，AQP4）mRNA 及蛋白表達[19]。AQP4參與結(jié)腸水的轉(zhuǎn)運，影響其對糞便的脫水作用。

2.2 陰虛與血液流變學研究

劉素蓉等[20]通過臨床研究發(fā)現(xiàn)，陰虛陽虛兩證患者血液粘度增高，紅細胞泳動變慢、時間延長，血小板聚集率增高。陰虛與陽虛患者的血液在血管內(nèi)皆呈失去了“如水之流”的生理狀態(tài)；而陰虛證患者主要是血漿成分增高，血沉增快；陽虛證患者主要是血球成分增高，即細胞壓積增高，血漿成份下降，血漿黏度降低。采用滋陰降火法可明顯改善肝腎陰虛型圍絕經(jīng)期綜合征患者烘熱汗出癥，降低患者的全血粘度，改善微循環(huán)[21]。

2.3 陰虛與內(nèi)分泌系統(tǒng)

臨床實驗和基礎實驗研究發(fā)現(xiàn)，陰虛患者或動物模型出現(xiàn)多種內(nèi)分泌激素分泌功能失調(diào)。陰虛大鼠模型血皮質(zhì)醇、胰島素、睪酮下降，血膽固醇升高，腎上腺重量下降，可見陰虛大鼠內(nèi)分泌功能下降[22]。且腎陰虛證的動物實驗造模多使用甲狀腺素、氫化可的松、醋酸氫化可的松、地塞米松等激素類藥物[23]。

2.4 陰虛與神經(jīng)系統(tǒng)功能

陰虛證候與交感-腎上腺髓質(zhì)功能興奮間的關系備受學者們的重視的原因在于兩者的表現(xiàn)相似[24]。腎陰虛與下丘腦-垂體-靶腺軸的功能紊亂密切關，換言之，腎陰虛具有不同靶腺軸、不同環(huán)節(jié)、不同程度的功能亢進。第二信使cAMP，cGMP是細胞功能的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)，cAMP，cGMP的平衡失調(diào)，會引起細胞功能發(fā)生明顯變化[25]。

2.5 陰虛與免疫系統(tǒng)功能

實驗研究發(fā)現(xiàn)，長期超負荷游泳造“形勞傷陰”的陰虛模型大鼠，其血清IgA、IgG 、IgM、IL-2、IL-6的含量顯著下降（P＜0.01）[26]。經(jīng)甲狀腺素灌胃制造的陰虛SD大鼠模型胸腺重量、甲狀腺素和利血平灌胃制造的陰虛NIH小鼠淋巴細胞增殖程度、自然殺傷細胞殺傷率均下降，表明陰虛小鼠免疫功能失調(diào)[22]。采用氫化可的松腹腔注射造成幼齡大鼠腎陰虛模型，光鏡下可見紅髓染色較淺，白髓、紅髓中淋巴小結(jié)、淋巴細胞數(shù)量明顯減少，巨噬細胞數(shù)量減少，IL-2和IL-6水平顯著下降[27]。有學者提出，免疫分子、T細胞亞群、免疫球蛋白等可納入腎陰虛診斷的標準。

2.6 陰虛與組學

整體觀念貫穿于整個中醫(yī)理論體系，而從整體的角度探析生物體內(nèi)的動態(tài)變化的基因組學、蛋白質(zhì)組學、代謝組學等組學技術，與其不謀而合。謝麗華等[28]對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥腎陰虛證患者進行研究，發(fā)現(xiàn)差異表達基因CLCF1蛋白表達水平明顯低于健康對照組。劉友平等[29]運用蛋白質(zhì)組學技術比較分析慢性乙型肝炎肝腎陰虛證及正常健康對照組的血漿全蛋白發(fā)現(xiàn)載脂蛋白AⅠ（Apo AⅠ）、載脂蛋白AⅡ（Apo AⅡ）、結(jié)合珠蛋白（HPT）、視黃醇結(jié)合蛋白（RBP）等4個差異蛋白，且呈明顯下調(diào)趨勢。王燕等［30］采用超高效液相色譜-四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-QTOF/MS）研究腎陰虛型、肝氣郁結(jié)型及肝腎陰虛型更年期綜合征婦女血漿代謝組學特征發(fā)現(xiàn)，氨基酸、脂肪酸、磷脂、糖類、酯類以及醇類等16個潛在生物標志物在3組中存在明顯差異。運用組學技術為疾病中醫(yī)證型的劃分帶來新的技術與手段。

2.7 陰虛與自由基

機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的基本前提是氧化/抗氧化平衡，其直接影響到細胞的增殖、分化、凋亡、壞死等一系列生理、病理過程。叢培瑋等[31]檢測脾陰虛證大鼠模型自由基損傷發(fā)現(xiàn)，脾陰虛模型大鼠血清和腦皮質(zhì)中超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性、總抗氧化能力（T-AOC）均顯著降低（P＜0.05），丙二醛（MDA）含量明顯增高（P＜0.05）。

2.8 陰虛與微量元素

微量元素是人體生命活動及一些決定性的新陳代謝必不可少的營養(yǎng)成分。陳德珍等[32]測定25例脾陰虛證、20例腎陰虛證患者血清中的Cu、Zn含量發(fā)現(xiàn)，脾陰虛患者血清Zn、Cu含量下降，且Zn/Cu值正常；腎陰虛患者血清Zn含量下降，Cu含量升高，Zn/Cu值下降。脾陰虛證、腎陰虛證形成的病理改變等因素不同，造成血清Cu、Zn含量的測定及Zn/Cu值的改變，可利用此改變進行證型的鑒別診斷。

陰虛相關的各指標之間并非獨立存在的，相互之間顯示出高度關聯(lián)，這些指標可成為陰虛證候診斷及分型的客觀指標。

3 陰虛體質(zhì)的研究

人體體質(zhì)與疾病發(fā)生密切相關，消渴、中風、不寐、缺血性腦卒中、卵巢儲備功能下降、圍絕經(jīng)期綜合征等都與陰虛體質(zhì)有聯(lián)系[33]。陰虛體質(zhì)的辨別不僅可可通過量表評估從體征和癥狀上劃分[34]，還可通過基因表達區(qū)分。武彥伶[35]通過對人體口腔唾液miRNA表達譜數(shù)據(jù)進行分析發(fā)現(xiàn)，陰虛體質(zhì)組與平和體質(zhì)組相比共有98個差異表達miRNA（其中35個上調(diào)、63個下調(diào)），與陽虛體質(zhì)相比共有167個差異表達miRNA（51個上調(diào)、116個下調(diào)）。俞若熙[36]利用全基因組表達譜分析體質(zhì)對應的分子生物學特征發(fā)現(xiàn)，陽虛體質(zhì)與陰虛體質(zhì)的基因表達譜獲得共232條差異表達基因（其中有223個上調(diào)，9個下調(diào)）。李紅等[37]應用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性法檢測發(fā)現(xiàn)了圍絕經(jīng)期婦女陰虛質(zhì)獨立危險因素ERα-rs2234693-CC/TC

4 中醫(yī)藥治療陰虛的研究

陰虛的中醫(yī)藥治療常采用針灸、中藥復方及中藥提取物等方式。通常針對具體病癥辨證論治而遣方用藥。

4.1 針灸

針灸療法在國內(nèi)外都備受認可，通過溫針灸改善患者體質(zhì)狀態(tài)治療陰虛證相關疾病亦收到良好效果。李龍春[38]對陰虛陽亢型高血壓患者采用溫針灸四關穴(即合谷、太沖)，可降低血壓，尤其是以收縮壓升高為主，并能有效地改善患者的臨床癥狀，同時能改善其血脂水平，尤其LDL-C水平。張新普等[39]通過溫針灸足三里、涌泉加痤瘡局部挑刺治療陰虛內(nèi)熱型痤瘡，3次/周，12周后可有效改善患者陰虛體質(zhì)狀態(tài)和痤瘡皮損情況。傅杰英教授采用溫針灸勞宮、涌泉治療陰虛質(zhì)痤瘡亦收獲良好效果[40]。

4.2 中藥復方

臨床上，普遍采用滋陰方藥治療陰虛相關疾病，并結(jié)合具體病機遣方用藥。周瑋莎等[41]通過臨床觀察左歸丸聯(lián)合二至丸加減治療肝腎陰虛型隱匿性腎炎發(fā)現(xiàn)，其能較好的降低24 h尿蛋白定量及尿紅細胞，同時也能明顯降低SCr、BUN，近期療效達83.33%。二至天癸顆粒可減少腎陰虛不孕婦女臨床癥狀，提高臨床受孕率，可能與其提升子宮內(nèi)膜DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1蛋白表達而增強子宮內(nèi)膜感受性有關[42]，其顆粒劑用于治療腎陰虛不孕不育體外受精患者，可提高卵母細胞和胚胎質(zhì)量，提高臨床受孕率[43]。而吳瑞鋒等[44]研究發(fā)現(xiàn)六味地黃丸可能通過骨密度及骨鈣素的合成來改善腎陰虛型骨質(zhì)疏松老年患者的生活質(zhì)量。唐瑾[45]運用大定風珠治療56例肝腎陰虛型PD，治療后自主神經(jīng)癥狀、睡眠狀況、焦慮情況均得到明顯改善。呂本林[46]采用三甲復脈湯治療心陰虛型快速性心律失常，治療組中醫(yī)癥候積分、總有效率高于對照組（P＜0.05）。

4.3 中藥提取物

滋陰中藥提取物研究多采用基礎研究，利用動物模型研究藥物有效成分的作用機制。滋陰安神藥酸棗仁醇提物可改善陰虛小鼠焦慮狀態(tài)，具有明顯的抗焦慮作用，其抗焦慮機制可能與提高小鼠腦內(nèi)GABA含量，增強GABAAR1表達，降低Glu含量和NMDAR1表達有關[47]。高、低劑量的鐵皮石斛花提取物均能顯著降低甲亢型陰虛模型小鼠血清T3水平、顯著升高血清TSH水平（P＜0.05），而且能改善小鼠模型“顴紅、心悸”的陰虛癥狀和甲狀腺軸功能亢進導致的肝功能損傷，可能是鐵皮石斛花通過影響甲狀腺素物質(zhì)代謝，改善微循、減慢心率而產(chǎn)生滋陰護肝作用[48]。烏龜提取物對甲亢型陰虛小鼠有降低體溫、降低活動量、延長耐缺氧時間及提高胸腺指數(shù)、包皮腺指數(shù)、精囊腺指數(shù)的作用[49]。

5 問題與發(fā)展

雖然學者們從動物模型、生理生化指標檢測、基因組學、蛋白組學、代謝組學等不同層次、不同角度、不同手段對陰虛開展了大量研究，但由于陰虛本質(zhì)的極其復雜性，仍未形成統(tǒng)一規(guī)范的診斷分型標準，致使臨床推廣難。而陰虛診斷分型標準的統(tǒng)一規(guī)范的根本在于明確陰虛的物質(zhì)基礎。目前，關于陰虛的基礎研究專注于動物模型的陰虛生理生化指標的變化和藥物的作用機制，而臨床研究關注藥物和針灸的臨床治療效果。兩者之間雖有聯(lián)系，但仍處于分離狀態(tài)。但基礎研究與臨床治療緊密結(jié)合更有利于形成統(tǒng)一規(guī)范的診斷治療標準。當下生命科學界熱點之一——轉(zhuǎn)化醫(yī)學可將二者無縫連接。只有形成統(tǒng)一規(guī)范化的診斷治療標準，才能便于臨床推廣，提高陰虛分型的準確率，為國民健康帶來福利。