石偉峰

（遼寧省朝陽市畜牧獸醫(yī)監(jiān)測預警中心，遼寧 朝陽 122000）

動物疫病監(jiān)測包括4個部分：采集、記錄、傳輸數(shù)據(jù)，整理分析數(shù)據(jù)，把通過分析獲得的信息在不同范圍內(nèi)發(fā)送和公布，根據(jù)獲得的信息采取行動控制疫病。因此，監(jiān)測是與疫病預防控制緊密結(jié)合在一起，不可分離。樣品的檢測結(jié)果信息能夠揭示一些深層的東西，能夠提供流行病學調(diào)查需要的關(guān)鍵信息，但是需要謹慎、合理分析檢測結(jié)果，否則很有可能得出錯誤的結(jié)論。

1 單個樣品的檢測結(jié)果分析

1.1 抗體檢測陽性結(jié)果分析

如果某份血清針對某種疫病的抗體檢測為陽性，如豬口蹄疫A型抗體檢測為陽性，通過分析可以得出5種結(jié)果：被檢測豬感染了A型口蹄疫，而且感染時間可能已經(jīng)超過7 d；被檢測豬接種過該型疫苗；體內(nèi)有母源抗體的存在；交叉反應，即被檢測豬感染類似的病原，而且感染時間較長；假陽性，其原因可能是檢測方法不完美（如用于檢測抗體的抗原不純），或者檢測過程中存在失誤的操作。

在檢測過程中不能因為檢測到抗體陽性就判定某個動物感染了某種病原，如假定在某地發(fā)現(xiàn)某只羊小反芻獸疫抗體陽性，由于該地區(qū)的羊都沒有免疫小反芻獸疫疫苗，所以懷疑這只羊感染小反芻獸疫病毒。但是這只能是一種懷疑，不能說是確診，因為這個陽性檢測結(jié)果可能是不正確的，也就是假陽性。這時首先要隔離那只羊所在的羊群，防止可能存在的疫情擴散開來，然后開展緊急流行病學調(diào)查，調(diào)查該地區(qū)的羊，特別是與那只羊同群的羊，是否出現(xiàn)可疑癥狀，是否攜帶小反芻獸疫病原，血清中針對小反芻獸疫的抗體水平如何，流動性如何。如果臨床監(jiān)測沒有發(fā)現(xiàn)這些羊群曾經(jīng)出現(xiàn)過可疑疫情，病原學檢測結(jié)果全為陰性，但是群體的小反芻獸疫抗體有4%的陽性率，基本上可以認定抗體檢測的陽性全部為假陽性。這是因為如果確實存在小反芻獸疫疫情，那么依據(jù)其流行病學特征，其感染率和抗體陽性率都應該＞4%，而且對于從來沒有出現(xiàn)小反芻獸疫的地區(qū)，羊群感染小反芻獸疫應該出現(xiàn)嚴重的臨床癥狀。

1.2 抗體檢測陰性結(jié)果分析

如果某份血清針對某種疫病的抗體檢測為陰性，也同樣存在5 種情況：被檢測畜禽沒有自然感染該病毒；沒有人工接種該型疫苗；被檢測畜禽感染了該病原，但未產(chǎn)生抗體（原因是處于感染的早期，或者先天感染導致免疫耐受，或者是免疫功能低下，或者是因為特殊的遺傳體質(zhì)）或者接種對應的疫苗，但是無刺激機體產(chǎn)生相應的抗體（原因是新接種的，或者疫苗有問題，或者接種方法不對、免疫抑制病、母源抗體等）；痊愈后，經(jīng)過較長時間，抗體水平自然下降到檢測不出或消失；假陰性，其原因可能是檢測方法不完美（如用于檢測抗體的抗原量不足或結(jié)構(gòu)不對，試劑保存條件不正確），或者檢測過程中存在失誤的操作。

因此，也不能因為檢測到抗體陰性就就斷定未感染某種病原或者疫苗免疫無效。舉例說來，假定在某地開展禽流感緊急免疫，免疫后沒有檢出禽流感抗體，不能斷定疫苗免疫失敗；免疫后沒有檢出禽流感抗體的原因可能是疫苗才接種數(shù)日，還沒有刺激機體產(chǎn)生抗體，或者檢測方法不好，靈敏度太低。

1.3 病原檢測陽性結(jié)果分析

如果某份樣品病原學檢測為陽性，如大腸桿菌檢測為陽性，常見情況有3種：被檢測畜禽自然感染了大腸桿菌病原，并且大腸桿菌是主要致病因素；被檢畜禽自然感染了大腸桿菌，但是大腸桿菌不是主要的致病因素，只是混合或繼發(fā)感染的病原；假陽性，通常在PCR 病原學檢測或免疫學檢測中比較常見。

因此不能通過簡單的病原檢測陽性就判定是某個動物發(fā)病的原因。例如從一只咳嗽發(fā)熱的豬體內(nèi)檢測到豬鏈球菌，不能斷定豬鏈球菌引起這只豬咳嗽發(fā)熱。豬鏈球菌所發(fā)揮的作用還需要其他一些信息才能確定。

1.4 病原檢測陰性結(jié)果分析

如果某份樣品病原學檢測為陰性，如口蹄疫病原學檢測為陰性，常見情況有3種：被檢測畜禽個體沒有感染口蹄疫病原；被檢測畜禽已經(jīng)感染過該病原，但已經(jīng)被機體清除；假陽性，常見于病原分離方法檢測。

因此也不能因為病原學檢測陰性就斷定某個畜禽未感染該病原。比如從一只患關(guān)節(jié)炎的豬體內(nèi)沒有檢測到豬鏈球菌，不能排除豬鏈球菌是引起這頭豬患關(guān)節(jié)炎的病原。樣品采集、運輸、檢測等諸多環(huán)節(jié)都存在諸多因素可以導致本來豬鏈球菌病原學陽性的檢測結(jié)果呈陰性。

2 群體樣品的檢測結(jié)果分析

群體樣品的檢測結(jié)果分析時，需要考慮以下4個方面。檢測方法本身的特性，檢測方法具有有效性、準確性、精確性、精密性、可重復性和可復制性，以及檢測方法的靈敏度、特異性、真陽率和真陰率。疫病的頻率，被檢測疫病的頻率，包括發(fā)病率、流行率、感染率、免疫合格率等。陽性結(jié)果的聚集現(xiàn)象，例如，某次流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)陽性樣品都集中在某個地區(qū)，或者累積數(shù)次流行病學調(diào)查的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)某種疫病的陽性樣品都集中在某個季節(jié)，這些聚集現(xiàn)象是分析疫病的分布特征、發(fā)展態(tài)勢和防控措施的重要信息。信息的綜合能夠較為全面的反映現(xiàn)實情況，也有助于反映深層次的規(guī)律。例如，在進行高致病性禽流感病原學調(diào)查時，綜合臨床信息、免疫信息、抗體檢測信息和病原檢測信息，能夠判定疫苗對當前的毒株（可能已發(fā)生變異）是否有效。例如調(diào)查發(fā)現(xiàn)，某地家禽免疫后，高致病性禽流感抗體都很高，但從某些抗體水平較高的家禽中檢測到高致病性禽流感病毒，說明免疫所用的疫苗無法阻擋病毒的感染。

3 疫苗免疫效果監(jiān)測

因商品畜禽和種用畜禽用途不同，而且同用途的代次也有差異，因此所選用的疫苗和免疫程序也會不同。商用畜禽主要考慮成活率，從而保證產(chǎn)肉率，種用畜禽在此基礎上還要考慮到子代均勻的母源抗體。

在疫苗免疫程序和用量相同的情況下，可以根據(jù)免疫保護率高低和整齊度，對是否存在野毒感染產(chǎn)生的抗體進行初判，如果存在抗體水平異常升高且群體免疫水平不均衡時，極有可能有野毒的存在。抗體水平是否均勻有效與以下幾個方面有關(guān)。

畜群整體健康情況。健康的畜群特別是免疫器官良好的情況下，才能產(chǎn)生良好的免疫應答。如果存在免疫抑制性疾病時就會造成免疫失敗，比如雞群存在法氏囊炎、傳貧、呼腸孤病、J-亞型白血病等感染時，或者豬群有豬藍耳病病毒、豬環(huán)狀病毒、豬瘟、豬流感病毒、弓形體病、附紅細胞體病、傳染性胸膜肺炎感染時，都會造成免疫失敗。影響畜禽健康的因素有很多，但最主要還是精細的飼養(yǎng)管理和優(yōu)良的品種。

當?shù)匾卟×餍星闆r。除了國家和省里規(guī)定的強制免疫種類外，要根據(jù)當?shù)匾卟〉牧餍星闆r，有針對性選擇疫苗的種類以及接種次數(shù)。

母源抗體的頡頏情況。當對新生畜禽進行免疫時，母源抗體較高時，會與疫苗發(fā)生頡頏作用，從而降低免疫效果。因此當群體母源抗體水平比較均衡時，抗體值較高，建議推遲首免時間，反之，提前首免時間；如果當母源抗體水平不均衡，高低都存在時，建議進行多次免疫，使所有畜禽都達到抗體保護水平。

多次免疫間隔情況。根據(jù)免疫后抗體的維持時間決定，一般來說，首次進行免疫主要為了激活免疫應答，產(chǎn)生的抗體水平較低并且維持時間較短，因此要縮短與二免的時間間隔；二次加強免疫后，抗體水平不但高而且維持時間也會變長，所以可以適當延長三免的時間。

疫苗間的相互干擾作用。多種疫苗同時進行免疫時，會產(chǎn)生干擾作用，更不能混在一起使用，一般來說最少間隔時間為3 d。

疫苗的活力強弱。一般來說疫苗的活力越強，免疫效果越好，但對畜禽產(chǎn)生的應激也越大。這種疫苗多用于日齡較大或加強免疫的畜禽。

免疫方式和操作。要根據(jù)疫苗的種類選擇適合的免疫方式，從而發(fā)揮免疫的最大效果，常用的免疫方式有滴鼻點眼、皮下注射、肌肉注射、噴霧免疫和飲水等。免疫操作是保障免疫成功的關(guān)鍵，正確和規(guī)范的操作手法才能保證疫苗用量均等和最大限度的減少應急。

4 影響檢測數(shù)據(jù)準確性因素

對樣品檢測結(jié)果分析是否準確，最主要的還要看檢測后所呈現(xiàn)出來的數(shù)據(jù)準確程度，數(shù)據(jù)的準確程度能夠完美的體現(xiàn)出檢測機構(gòu)水平的檢測水準，這一檢測水準直接關(guān)系到該檢驗機構(gòu)的發(fā)展，關(guān)系到為政府和社會提供的檢測數(shù)據(jù)的是否準確可靠，甚至關(guān)系到政府的決策。而影響實驗室檢測結(jié)果的因素多種多樣，主要是由人員、設施條件、儀器設備、檢驗方法、檢測過程、試劑和標準物質(zhì)等諸多因素的影響[1-2]。為確保實驗室檢測結(jié)果真實有效，應從以下幾個方面進行綜合管控。

4.1 專業(yè)技術(shù)人員對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

從事動物疫病檢測的專業(yè)技術(shù)人員是第一責任人，所有開展動物疫病檢測工作都是以實驗室專業(yè)技術(shù)人員為中心，因此檢測數(shù)據(jù)準確性直接取決于專業(yè)技術(shù)人員的專業(yè)水平的高低[3]。動物疫病檢測工作是專業(yè)性非常強的技術(shù)工種，從事該工作的實驗室人員必須具備較強的專業(yè)知識和熟練的操作能力；實驗室為了要保證檢測數(shù)據(jù)的質(zhì)量，專業(yè)技術(shù)人員必須要熟悉各種檢測的操作流程和使用相關(guān)儀器設備的使用能力；專業(yè)技術(shù)人員還應具有一定的從業(yè)經(jīng)驗和綜合判斷能力。為此，從事動物疫病檢測的專業(yè)技術(shù)人員應定期開展綜合業(yè)務培訓，組織開展內(nèi)部比對活動，每年進行能力驗證，并對從業(yè)人員進行定期考核，尤其是對實驗室的儀器設備的實操要進行考核，通過這些途徑來不斷的提高實驗室從業(yè)人員的專業(yè)技術(shù)水平，以便能更好地完成動物疫病檢測工作。同時專業(yè)技術(shù)從業(yè)人員還必須熟練掌握各種動物疫病的常規(guī)檢測方法，操作過程中要嚴格按照國家規(guī)定的實驗操作規(guī)程，按步進行操作，重視檢驗檢測過程中的每一個環(huán)節(jié)，不能隨心所欲，確保檢測過程無錯誤，這樣才能提高檢測數(shù)據(jù)的準確性。

4.2 實驗室硬件條件對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

實驗室的硬件條件的好壞是決定檢測數(shù)據(jù)準確的先決條件，實驗室環(huán)境和設施條件必須滿足相關(guān)國家相關(guān)法律法規(guī)、技術(shù)規(guī)范或標準的要求[4]。實驗室硬件條件達不到檢測的標準，就會造成檢測結(jié)果不準確，甚至造成本次檢測為無效檢測。在建造設計實驗室時要嚴格按照國家相應的標準進行設計，在使用實驗室時每天要對實驗室的溫濕度等相關(guān)情況進行如實記錄，如發(fā)現(xiàn)不利于實驗室檢測的相關(guān)情況要及時進行相應的處理；對于實驗室操作間內(nèi)的物品及用具要定期進行清潔消毒，保證實驗室的環(huán)境和設施條件完全滿足相關(guān)要求，消除由于實驗室硬件條件對檢測數(shù)據(jù)帶來的影響。

4.3 檢測方法對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

檢測方法是對數(shù)據(jù)準確性最直接最主要的影響因素，檢測方法的選擇要嚴格按照相關(guān)的技術(shù)規(guī)范和標準進行選擇，不可具有隨意性，要選擇適宜的檢測方法[5]。在實際檢測工作中，檢測人員要根據(jù)相關(guān)檢測的指標進行選擇適宜的檢測方法，并定期對檢測方法及標準進行更新，避免在檢測中出現(xiàn)選擇已經(jīng)作廢的檢測方法來進行檢測，從而影響實驗數(shù)據(jù)的準確性。

4.4 檢測儀器準確度對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

檢測儀器設備的準確度是對一個實驗檢測的最基本要求，是影響檢測數(shù)據(jù)準確性的直接因素之一，因此，要定期對檢測儀器設備進行定期維護，對檢測儀器要進行定期計量檢定，在使用前要進行校準，在使用過程中要嚴格選擇檢測設備的精度、量程等與檢測項目相適宜，尤其是對于一些對環(huán)境等因素要求比較嚴格的檢測設備，更要做好檢測儀器準確性的檢定工作，確保檢測數(shù)據(jù)真實有效。

4.5 標準物質(zhì)和試劑對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

針對動物疫病檢測來說，檢測試劑及標準物質(zhì)的選擇對檢測數(shù)據(jù)的準確性有著直接影響。獸醫(yī)實驗室在進行動物疫病檢驗中，需采用通過國家GMP 認證的試劑，最好這些試劑與國標方法相同，對于買來的試劑，獸醫(yī)實驗室必須對試劑做確認試驗。不同批次的試劑也要進行比對。

4.6 抽樣和樣品制備對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

抽樣和樣品制備是檢測工作中重要的一步，按照抽樣的相關(guān)要求進行抽取樣品，才能保證樣品具有代表性[6]。在抽取樣品過程中，應根據(jù)不同的檢測內(nèi)容和不同的檢測目的，選擇相應的抽樣標準，確保檢測結(jié)果具有代表性。抽樣的樣品制備同樣也影響檢測數(shù)據(jù)的準確性，抽取的樣品要嚴格按照相應的檢測方法的要求進行處理，不可隨意處理或減少處理的環(huán)節(jié)，使制備的樣品符合檢測標準，提高檢測數(shù)據(jù)的準確性。

4.7 檢測時間對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

動物疫病檢測過程中抽取的一些特定樣品由于其保質(zhì)期較短，所以對檢測時間有一定要求，對于這類樣品一定要按照在規(guī)定時間內(nèi)進行處理，及時檢測，消除時間對檢測結(jié)果的影響。

4.8 質(zhì)量控制對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

實驗室的質(zhì)量控制程序及其相關(guān)計劃是監(jiān)控檢測全過程的有效手段。比對試驗和驗證試驗在本質(zhì)上是對一個實驗室的檢測水平及能力的真實考查，通過這些手段，可以確保檢測結(jié)果的準確性。實驗室應堅持利用人員對比、留樣檢測、盲樣檢測等方法對檢測工作進行驗證，還可通過借助外部力量進行驗證，尤其是實驗室間的比對。如通過上述方法進行驗證，發(fā)現(xiàn)異常，應積極找出原因，并針對原因提出改進的相關(guān)措施，保證檢測數(shù)據(jù)的真實可靠。

4.9 原始記錄對檢測數(shù)據(jù)準確性的影響

原始記錄作為實驗室檢測工作的最終結(jié)果十分重要，是動物疫病檢測結(jié)果的的最終體現(xiàn)，原始記錄的準確性和可靠性，直接關(guān)系到對養(yǎng)殖戶的切身利益，直接影響政府的決策。在實驗室檢測結(jié)束后，專業(yè)技術(shù)人員應按照相關(guān)技術(shù)規(guī)范的要求及程序，出具本次實驗的檢測數(shù)據(jù)，得出本次動物疫病檢測的結(jié)果，原始記錄的數(shù)據(jù)要準確、真實，嚴格按數(shù)據(jù)修約規(guī)則對檢測數(shù)據(jù)進行處理，結(jié)果中的數(shù)據(jù)一定要與標準中規(guī)定保持一致，標記好法定計量單位，最終得出正確客觀的結(jié)果。

5 小 結(jié)

動物疫病檢測結(jié)果的準確性受多種因素影響，定期培訓提高專業(yè)技術(shù)人員的專業(yè)素質(zhì)，不斷提高實驗室設施水平，制定適合本地區(qū)的檢驗標準和方法，及時更新檢測標準，按照規(guī)定檢定計量器具，正確使用標準物質(zhì)，把好抽樣關(guān)，嚴格按照實驗要求進行樣品的制備及檢測，對實驗結(jié)果進行準確記錄和分析，才能最終得到準確性高的動物疫病檢測結(jié)果。只有牢牢抓住這些關(guān)鍵環(huán)節(jié)，才能不斷提升檢測水平，從而確保檢測數(shù)據(jù)的準確性。