薛 晶，趙 楊，程 玉，徐樹蕾，嚴(yán) 鵬，申興斌△

（1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院）

研究表明，全球乳腺癌的發(fā)病率正以3%的速度遞增，且患者年齡正趨于年輕化[1-2]。而在中國(guó)女性惡性腫瘤中，乳腺癌發(fā)病率最高[3]。有研究表明，胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）信號(hào)系統(tǒng)在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、增殖、遷移及凋亡等方面發(fā)揮著極為重要的作用[4-5]。作為IGFs家族成員，IGF-1的作用主要是促進(jìn)有絲分裂，調(diào)節(jié)體內(nèi)激素的合成和分泌，并且還能對(duì)細(xì)胞趨化、免疫及遷移產(chǎn)生影響[6]。國(guó)內(nèi)外的研究均表明，IGF-1在多種惡性腫瘤中高表達(dá)。為探討IGF-1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，本研究觀察了不同乳腺組織IGF-1的表達(dá)情況，以期豐富乳腺癌的臨床研究。

1 材料與方法

1.1 材料 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2013年6月至2013年11月手術(shù)治療后經(jīng)病理證實(shí)為乳腺癌的組織標(biāo)本80例，乳腺纖維腺瘤60例，癌旁正常乳腺組織50例，全部患者術(shù)前均未接受放化療及藥物治療。乳腺癌患者年齡26歲-73歲，中位年齡49.5歲，均為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，病理組織學(xué)分型10例Ⅰ級(jí)、56例Ⅱ級(jí)、14例Ⅲ級(jí)，33例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、47例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，原發(fā)灶≤2.5cm的16例、原發(fā)灶＞2.5cm的64例。60例乳腺纖維腺瘤患者，年齡19歲～54歲，中位年齡48歲；50例癌旁正常乳腺組織，年齡30歲～56歲，中位年齡48歲。癌旁正常乳腺組織標(biāo)本為乳腺癌術(shù)后距癌組織邊緣＞10cm以上且外觀正常的腺體組織；所有標(biāo)本的收集避開炎癥部位、壞死組織，且經(jīng)病理醫(yī)師確診。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果評(píng)判：采用免疫組化（MaxVision）法檢測(cè)IGF-1蛋白表達(dá)。兔抗人IGF-1多克隆抗體（1：100）購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒（羊抗鼠/兔）購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。陰性對(duì)照由PBS代替，細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。結(jié)果判定采用Volm雙評(píng)分法[7]。

1.2.2 RT-PCR法檢測(cè)IGF-1mRNA的表達(dá)：采用Trizol一步法提取RNA，用反轉(zhuǎn)錄酶（AMV）將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。IGF-1基因上游引物（5’to3’）：TGG AGT TGG TAG ATT GCT GTT G，下游引物（5’to3’）：TAT GAA GGG AGG TGG TGG GTA T，產(chǎn)物大小233bp；β-actin作為內(nèi)參，上游引物（5’to3’）：AGC GGG AAA TCG TGC GTG AC，下游引物：（5’to3’）ACA TCT GCT GGA AGG TGG AC，產(chǎn)物大小453bp。取擴(kuò)增產(chǎn)物行2%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后，紫外熒光數(shù)字成像儀下攝像，并進(jìn)行吸光度定量分析，以IGF-1與相應(yīng)β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物條帶累積吸光度（IOD）的比值作為IGF-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，等級(jí)數(shù)據(jù)資料采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)量數(shù)據(jù)資料采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)和單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IGF-1蛋白及mRNA的表達(dá)情況 乳腺癌組織IGF-1蛋白及mRNA的表達(dá)均明顯高于乳腺纖維腺瘤和癌旁正常乳腺組織（P＜0.01）。見表1：

表1 不同乳腺組織IGF-1的表達(dá)情況

2.2 IGF-1表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 乳腺癌組織IGF-1蛋白和mRNA的表達(dá)與年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05）；與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P＜0.05）：＞2.5cm明顯高于≤2.5cm，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，隨著乳腺癌組織學(xué)分級(jí)的升高IGF-1蛋白和mRNA的表達(dá)逐漸升高。見表2：

表2 IGF-1表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的身心健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年全國(guó)乳腺癌患者增加120萬(wàn)，而每年因乳腺癌死亡的女性患者約50萬(wàn)[8]。在全球每年新確診的病例中，中國(guó)患者占12.2%[9]。

IGF-1是由肝臟合成，由12號(hào)染色體編碼、70多個(gè)氨基酸組成，具有內(nèi)分泌、自分泌及旁分泌功能的多肽單鏈[10-11]。已有研究表明，在炎癥和腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中IGF-1異常分泌，且在前列腺癌、卵巢上皮性癌及胃癌等多種腫瘤中，IGF-1在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及侵襲方面發(fā)揮重要作用[12-13]。另外，有研究發(fā)現(xiàn)，血漿中IGF-1的水平越高，發(fā)生乳腺癌的危險(xiǎn)性越大[14]；Rollison等[15]在對(duì)美國(guó)184例女性乳腺癌的研究中也證實(shí)，患者血清IGF-1的含量與發(fā)生乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)性呈正相關(guān)。上述研究提示，IGF-1在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。

本研究采用免疫組織化染色法和RT-PCR法檢測(cè)了不同乳腺組織IGF-1蛋白和mRNA的表達(dá)情況，并分析了IGF-1表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織IGF-1的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于乳腺纖維腺瘤和癌旁正常乳腺組織，且蛋白水平和基因水平結(jié)果一致，推測(cè)IGF-1可能通過(guò)某種途徑參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，其差異性表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平就已發(fā)生；同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織IGF-1蛋白和mRNA的表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，與何楊等[16]的研究結(jié)果類似，推測(cè)IGF-1可能與乳腺癌的生長(zhǎng)、惡性程度和轉(zhuǎn)移有關(guān)。

綜上所述，IGF-1可能在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，提示IGF-1可能作為判斷乳腺發(fā)生發(fā)展、惡性程度和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物用于臨床，但尚需進(jìn)一步地深入研究。

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