賈曉順,張穎穎

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟南 250355； 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,山東 濟南 250355)

鵝不食草[Cenpiteda minima(L.)A.Br.et Aschers.]，又名食胡荽，地胡椒，為菊科(Compositae)石胡荽屬植物，全草入藥，具有發(fā)散風(fēng)寒，通鼻竅，止咳的功效，用于風(fēng)寒頭痛，咳嗽痰多，鼻塞不通，鼻淵流涕[1]。鵝不食草在我國主要分布于東北，華北，華中，華東，華南，西南地區(qū)，在日本，朝鮮，老撾，緬甸，印度等國家也有分布。鵝不食草成分復(fù)雜，主要有多糖、黃酮、揮發(fā)油類等成分，其中揮發(fā)油包括萜類，含氧衍生物，脂肪族化合物等?！侗静菥V目》記載“其氣辛味重不堪食，鵝也不食之”，鵝不食草以其“辛”味得其名，其辛味主要與其成分揮發(fā)油有關(guān)。鵝不食草在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中有悠久的應(yīng)用歷史，臨床上廣泛用于治療過敏性鼻炎，百日咳，頭痛等疾病。國內(nèi)常用治療過敏性鼻炎、流行性感冒等 ，國外臨床用于抗菌、抗病毒、抗原蟲等，課題組長期以鵝不食草為研究對象，對鵝不食草多糖、黃酮及其揮發(fā)油進行了部分研究，現(xiàn)就國內(nèi)外鵝不食草揮發(fā)油的藥理研究進展進行初步總結(jié)，以為今后的科學(xué)研究以及新藥開發(fā)提供參考。

1 鵝不食草揮發(fā)油的成分研究

國內(nèi)對鵝不食草最早的研究開始于利用其揮發(fā)油成分制備合劑來治療鼻炎。楊艷芳[2]等人采用水蒸氣蒸餾以及超臨界二氧化碳萃取技術(shù)提取鵝不食草揮發(fā)油，進而通過GC-MS對兩種方法得到的化合物進行比較研究，發(fā)現(xiàn)其中含有倍半萜類，甾醇類，脂肪酸類等化合物。其中，超臨界二氧化碳提取物共鑒定了21種化合物，主要含有分子量大的，沸點高的成分，且以8,11-二烯-愈創(chuàng)木內(nèi)酯-3-酮(13.70%)，20(29)-雙鍵-(3b)-羽扇豆醇-3-醋酸酯(13.69%)和棕櫚酸 (7.99%)含量相對較高。水蒸氣蒸餾提取物共鑒定了26種化合物,主要含有分子量較小,沸點較低的成分,以反式乙酸菊烯酯(39.76%)和棕櫚酸(5.77%)含量相對較高。

隨后，吳林芬[3]等人以同時蒸餾得到鵝不食草總揮發(fā)油，并采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法定性各成分的色譜峰，分析結(jié)果顯示，其總揮發(fā)油中含量最高的成分是反式乙酸菊烯酯(41.361%)，其次為10-acetoxy-8,9-epoxythymolisobutyrate(5.422%)、百里酚(3．389%)、3-異丙基-4-甲基-3-戊烯-1-炔(2.644% )、(1S)-6,6-二甲基二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-2-基甲醇乙酸酯(2.613%)、(-)-環(huán)氧石竹烯(2.509%)、(S)-順式-馬鞭草烯醇(2.224%)、長葉烯(2.098%)等。

劉杰[4]等人用GC-MS分析鵝不食草揮發(fā)油的成分，將分離的44個色譜峰進行初步鑒定，發(fā)現(xiàn)以反式乙酸菊烯酯(59.06%)含量最高，其次還有石竹烯(5.19%)，6,6-二甲基-2-亞甲基雙環(huán)[3，3，1]庚烷(4.41%)，香芹酚(4.22%)等。

對于鵝不食草揮發(fā)油的提取方法，傳統(tǒng)方法多采用蒸餾法，超臨界二氧化碳萃取法，劉運美[5]等人考慮到是否浸泡，粉末大小，萃取劑的選擇，重復(fù)性等因素確定最佳實驗方案，采用揮發(fā)曲線法提取鵝不食草揮發(fā)油，簡便快捷，效率高。

2 鵝不食草揮發(fā)油的藥理作用

2.1 抗炎

覃仁安[6]等人通過研究鵝不食草揮發(fā)油對急、慢性炎癥兩方面的對抗來探究其抗炎機制。該研究組建立小鼠棉球芽腫和蛋清致大鼠足腫脹模型并分別作為慢、急性炎癥的研究對象，用熒光分光光度計的熒光強度作為標(biāo)準(zhǔn)來測定大鼠組織中組胺和5-羥色胺的含量，將小鼠肉芽腫的重量統(tǒng)計數(shù)據(jù)和大鼠足腫脹組織中組胺和5-羥色胺的含量統(tǒng)計結(jié)合分析，發(fā)現(xiàn)鵝不食草揮發(fā)油對急、慢性炎癥均有一定的對抗作用，且抗炎作用與組胺和5-羥色胺的釋放有關(guān)，這為臨床上利用鵝不食草來對抗炎癥提供了依據(jù)。

劉志剛[7]等以豚草花粉誘導(dǎo)豚鼠建立過敏性鼻炎動物模型, 用鵝不食草揮發(fā)油進行治療，發(fā)現(xiàn)治療后局部鼻粘膜病變有顯著改善, 說明鵝不食草揮發(fā)油對過敏性鼻炎中的炎癥有較好的抗炎效果。

張煌[8]等人利用吸附色譜法對鵝不食草揮發(fā)油進行成分分離，得到72種分離組分，將其分為4組并按流出順序編號為VOCM1，VOCM2，VOCM3，VOCM4，建立SD大鼠足趾腫脹及小鼠耳腫脹的模型，將上述4種組分，鵝不食草揮發(fā)油以及生理鹽水制成注射劑，并分別給上述兩個模型腹腔注射，以大鼠足趾和小鼠耳的抑制率和腫脹率作為統(tǒng)計指標(biāo)來探究鵝不食草揮發(fā)油及其分離組分對炎癥的影響，結(jié)合統(tǒng)計數(shù)據(jù)以及熱板實驗測得的痛閾值，發(fā)現(xiàn)VOCM2和VOCM3的抗炎作用明顯，此研究成果為抗炎有效成分的分離純化提供了理論基礎(chǔ)。

2.2 抑菌

鵝不食草揮發(fā)油的抑菌活性研究相對較少，以往研究主要集中于其醇提物。李吉華[9]等人利用紙片擴散法研究鵝不食草醇提物的抗菌活性，結(jié)果表明，其對金黃色葡萄球菌等菌株的抑制作用顯著。梁恒興[10]等從鵝不食草全草醇提取物中得到3個烏蘇烷型三萜，其中taraxasterol acetate和taraxasterol顯示出較強抗菌活性。國外學(xué)者[11]從尼泊爾鵝不食草全草中分離出三種倍半萜，研究發(fā)現(xiàn)對枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌具有較強的生物活性，其中，6-O-isbutyroylplenolin(6-O-異丁酰二氫堆心菊靈)抑菌作用最為明顯。

2.3 抗腫瘤

腫瘤是危害危類健康的最重要的問題之一，我國每年新發(fā)現(xiàn)腫瘤病例300多萬，平均每分鐘有6人被診斷為癌癥。從天然藥物中發(fā)現(xiàn)有效抗腫瘤成分，是當(dāng)前抗腫瘤研究的重要方向。

國外學(xué)者[12]從鵝不食草中分離出一種倍半萜成分6-O-Angeloylenolin，對于抑制肺癌細胞H1299和A549的發(fā)育和聚集效果明顯。近期，又有學(xué)者[13]研究鵝不食草揮發(fā)油對斑馬魚胚胎的抗血管生成作用，研究結(jié)果表明，揮發(fā)油中的6-O-Angeloylenolin具有最有效的抑制作用，抗血管生成對于抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移具有良好的效果。由此可見，鵝不食草揮發(fā)油中的6-O-Angeloylenolin成分對于腫瘤細胞的抑制作用有待更深的研究。

吳林芬[14]等人利用GC-MS對鵝不食草揮發(fā)油的主要成分進行研究，初步發(fā)現(xiàn)了棕櫚酸。隨后，楊艷芳[15]等人對鵝不食草正丁醇部位化學(xué)成分進行研究，先后發(fā)現(xiàn)了十五烷酸(1)、棕櫚酸(2)、十八烷酸(3)、β-胡蘿卜苷(4)、尿嘧啶(5)和山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)6種成分。該研究組根據(jù)小毛茛中發(fā)現(xiàn)的棕櫚酸為其唯一抗腫瘤成分推斷鵝不食草中的棕櫚酸為鵝不食草抗腫瘤的活性成分。

吳凌莉[15]等人利用硅膠柱色譜，凝膠柱色譜等方法將鵝不食草化學(xué)成分進行分離純化，先后得到偽蒲公英甾醇乙酸酯(1)、棕櫚酸(2)、木栓酮(3)、短葉老鸛草素(4)、青蒿酸(5)、β-谷甾醇(6)、苯甲酸(7)、胡蘿卜苷(8)、貓眼草酚D(9)、3-甲氧基槲皮素(10)，其中短葉老鸛草素為偽愈創(chuàng)木內(nèi)酯骨架的倍半萜, 該類型的化合物具有抗腫瘤和細胞毒作用。蒲首丞[16]利用柱色譜，反相HPLC對鵝不食草進行分離純化，得到5種成分，隨后利用NMR等方法鑒定該5種成分結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)都為愈創(chuàng)木內(nèi)酯，將該5種成分進行MTT抗腫瘤實驗法，結(jié)果顯示，該5種成分在高濃度時腫瘤生長抑制率達50%以上。短葉老鸛草素和愈創(chuàng)木內(nèi)酯都為倍半萜類成分，而揮發(fā)油的主要成分為萜類，該研究結(jié)果表明，鵝不食草揮發(fā)油成分有明顯的抗腫瘤作用。

劉宇[17]等人在鵝不食草超臨界二氧化碳萃取物中發(fā)現(xiàn)，含量最高的愈創(chuàng)木內(nèi)酯型倍半萜8,11-二烯-愈創(chuàng)木內(nèi)酯-3-酮和含量較高的桉葉內(nèi)酯型倍半萜1,4-二烯-桉葉內(nèi)酯-2-酮具有抗腫瘤活性，而水蒸氣蒸餾法分析出的成分抗腫瘤活性不明顯。

2.4 平喘

目前，哮喘的治療方法，西醫(yī)主要為吸入氣管擴張劑，糖皮質(zhì)激素，抗組胺類藥物等方法，療效較長且易反復(fù)發(fā)作。覃仁安[18]等人研究了鵝不食草揮發(fā)油對急性肺損傷大鼠支氣管上皮細胞CD54表達的影響。研究組分別用對照組，VOCM低劑量組和VOCM高劑量組給大鼠灌胃，然后通過油酸合并脂多糖"兩次打擊"大鼠來構(gòu)建大鼠急性肺損傷模型。結(jié)果顯示，VOCM高劑量組和低劑量組均能抑制大鼠支氣管上皮細胞CD45的表達。

陳強[19]等人采用藥物噴霧引喘豚鼠并記錄哮喘發(fā)病潛伏期，用鵝不食草揮發(fā)油灌胃后再次引喘，對照給藥前后抽搐次數(shù)以及潛伏期，發(fā)現(xiàn)鵝不食草揮發(fā)油對哮喘潛伏期具有延長作用。為進一步探究鵝不食草揮發(fā)油的平喘效果,該研究組將豚鼠離體的氣管平滑肌螺旋條，連接麥?zhǔn)显〔酆图埩D(zhuǎn)換器，通過記錄儀記錄并描述曲線，對比給藥前后數(shù)據(jù)并計算解痙百分率，發(fā)現(xiàn)鵝不食草揮發(fā)油對組胺引起的氣管平滑肌收縮具有抑制作用。以上結(jié)果證明了鵝不食草揮發(fā)油的平喘作用良好。

2.5 抗超敏反應(yīng)

超敏反應(yīng)發(fā)病率較高，且病程長，易反復(fù)，嚴重影響患者的日常生活。當(dāng)前國內(nèi)外主要針對鵝不食草揮發(fā)油抗過敏性鼻炎進行了各種研究。覃仁安[20]等人構(gòu)建了胸膜炎大鼠模型，以血清中CGRP和炎癥預(yù)積因子的含量作指標(biāo)進行研究。結(jié)果表明，鵝不食草揮發(fā)油對CGRP的升高，TNF-α的分泌合成以及促炎癥因子NO的產(chǎn)生均有對抗作用，這為臨床上治療過敏性鼻炎提供了依據(jù)。余洪猛[21]等人利用豚鼠花粉作為致敏原，來構(gòu)建過敏性鼻炎豚鼠模型，通過對照鼻分泌物及鼻黏膜組織中的各成分，發(fā)現(xiàn)鵝不食草揮發(fā)油對過敏性鼻炎具有確切的療效。劉志剛[7]等人的研究也證實，鵝不食草揮發(fā)油確有抗超敏反應(yīng)之功效。

鵝不食草揮發(fā)油的抗過敏活性在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，易軍[22]等人用羥丙基-β-環(huán)糊精將鵝不食草揮發(fā)油包含后制成鼻腔噴霧劑，一方面提高了揮發(fā)油的水溶性，方便噴霧的制備，另一方面掩蓋其辛味，提高病人的接受度，為過敏性鼻炎患者帶來福音。

此外，蔡莊粧[23]等人用OVA過敏原鼻滴液建立豚鼠過敏性鼻炎的模型，用鵝不食草乙醇提液，水提液，石油醚提取物對其治療。結(jié)果表明，治療后的豚鼠與對照組相比，鼻粘膜組織構(gòu)造較完整，血清中OVA-slgE濃度降低，抓鼻和打噴嚏的次數(shù)明顯較少。說明三者均有抑制過敏性鼻炎的作用，研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，抑制效果以乙醇提取物的作用最明顯。

3 展望

鵝不食草含多糖、黃酮、揮發(fā)油等各種成分，其中揮發(fā)油含量較高，是其藥理作用的主要有效物質(zhì)。綜合國內(nèi)外研究可見，鵝不食草揮發(fā)油具有多種藥理作用，在抗炎、抗腫瘤、抗超敏反應(yīng)、平喘等方面都有較好活性，尤以抗腫瘤和抗超敏反應(yīng)活性最為突出。其臨床應(yīng)用中，亦以抗超敏反應(yīng)為主。目前，對鵝不食草揮發(fā)油的研究主要集中于成分分析、總揮發(fā)油藥效研究方面，其具體有效成分及作用機制并未得到充分闡釋。故此，今后在鵝不食草揮發(fā)油的研究中，應(yīng)對其有效成分進行進一步深入研究，并以體外細胞實驗及動物模型對其作用機制進行詳細研究，進而闡明其具體作用的靶點及相關(guān)信號通路，為探明鵝不食草揮發(fā)油的作用機制提供理論基礎(chǔ)，進而推動其臨床應(yīng)用研究，開發(fā)新型藥物。