邢　鑫，張自森，郭彥偉，王利娟，張紅巧，鄭曉珂，張　劍，王亞楠

鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 鄭州 450052

胃癌患者早期癥狀和體征不明顯，早期檢出率比較低，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已是中晚期。胃癌的早期診斷和治療對(duì)延長(zhǎng)胃癌患者的生存時(shí)間和提高其治愈率具有重要意義[1]。胃鏡和鋇餐檢查難以在體檢人群中廣泛推廣，因此腫瘤標(biāo)志物在胃癌早期診斷中具有重要意義[2-3]。目前腫瘤標(biāo)志物可用于胃癌的診斷和病情監(jiān)測(cè)，但特異性和準(zhǔn)確性仍不能令人滿意。尋找靈敏度和特異性比較高的胃癌腫瘤標(biāo)志物成為目前研究的熱點(diǎn)。癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，在胃腸癌、乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤患者的血清中均有升高，因此不能作為診斷某種惡性腫瘤的特異性指標(biāo)，但在腫瘤的良惡性鑒別診斷、病情監(jiān)測(cè)、療效評(píng)價(jià)等方面仍有重要臨床價(jià)值。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是具有多種功能的分泌型蛋白，在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移、新生血管生成和凋亡抑制方面發(fā)揮一定作用，有可能成為胃癌的診斷、治療和預(yù)后監(jiān)測(cè)的新指標(biāo)[4-6]。細(xì)胞角蛋白18(cytokeratin18,CK18)是細(xì)胞角蛋白家族中的一種，是胃上皮性細(xì)胞惡變的標(biāo)志之一[7-8]。本研究通過測(cè)定胃癌患者血清中OPN、CEA和CK18的表達(dá)情況，探討3者單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌的診斷和病情監(jiān)測(cè)的應(yīng)用價(jià)值。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選擇2015年1月至2016年12月鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科收治的胃癌患者(80例)作為胃癌組，體檢中心健康體檢的健康者(80例)作為對(duì)照組，胃癌組患者年齡46～77(62.4±11.2)歲，男59例，女21例；對(duì)照組年齡45～75(61.8±10.4)歲，男52例，女28例，2組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有其他系統(tǒng)惡性腫瘤者，患有嚴(yán)重心肝腎等重要臟器疾病者，曾接受過手術(shù)或者放化療治療者，患有胃部其他疾病者，資料不完整者，拒絕參與試驗(yàn)者。納入標(biāo)準(zhǔn)：胃癌組經(jīng)病理證實(shí)為胃癌患者，對(duì)照組各項(xiàng)體檢指標(biāo)均正常。研究對(duì)象均資料完整，簽署知情同意書。

1.2主要觀察指標(biāo)和檢測(cè)方法檢測(cè)兩組血清OPN、CEA和CK18含量，血清OPN、CEA和CK18診斷胃癌的靈敏度、特異度及ROC曲線下面積，血清OPN、CEA和CK18含量及其與胃癌患者病理特征的關(guān)系。健康體檢者體檢當(dāng)天清晨空腹抽血，胃癌患者入院后第2天清晨空腹抽血。均抽取外周靜脈血4 mL，離心后分離血清保存?zhèn)溆谩Ｑ錙PN含量采用ELISA法測(cè)定，血清CEA含量采用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定，血清CK18含量采用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定。OPN、CEA及CK18鑒別胃惡性腫瘤的臨床檢驗(yàn)診斷界點(diǎn)分別為：40 μg/L、4.3 μg/L和5.0 U/L。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 20.0進(jìn)行分析，繪制ROC曲線，計(jì)算各指標(biāo)診斷胃癌的靈敏度、特異度和ROC曲線下面積，應(yīng)用t檢驗(yàn)比較兩組血清OPN、CEA和CK18含量的差異，應(yīng)用t檢驗(yàn)和單因素方差分析比較不同病理特征胃癌患者血清OPN、CEA和CK18水平的差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2　結(jié)果

2.1兩組血清OPN、CEA和CK18含量比較見表1。

表1　兩組血清OPN、CEA和CK18含量比較

2.2血清OPN、CEA和CK18診斷胃癌的靈敏度、特異度及ROC曲線下面積比較見表2。由表2可知,兩兩聯(lián)合指標(biāo)診斷胃癌的ROC曲線下面積大于單獨(dú)指標(biāo)，三者聯(lián)合診斷胃癌的ROC曲線下面積最大。隨著聯(lián)合指標(biāo)的增多，診斷胃癌的靈敏度升高。

表2　血清OPN、CEA和CK18診斷胃癌的靈敏度、特異度及ROC曲線下面積比較

2.3血清OPN、CEA和CK18含量與胃癌病理特征的關(guān)系見表3。

表3　血清OPN、CEA和CK18含量和胃癌病理特征的關(guān)系

由表3可知，血清OPN、CEA和CK18含量與胃癌的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，其中Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者血清OPN、CEA和CK18含量明顯高于Ⅰ+Ⅱ期胃癌患者(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者血清OPN、CEA和CK18含量高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者(P<0.05)。表明血清OPN、CEA和CK18含量與胃癌的嚴(yán)重程度和轉(zhuǎn)移有關(guān)。

3　討論

胃癌的發(fā)展一般經(jīng)歷5個(gè)階段：正常胃黏膜階段、淺表性胃炎階段、萎縮性胃炎階段、不典型增生階段和胃癌階段，在發(fā)展到胃癌階段后相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)胃癌的轉(zhuǎn)移速度比較慢，呈局限性發(fā)展。因此，胃癌的早期診斷和治療對(duì)延長(zhǎng)胃癌患者的生存時(shí)間和提高治愈率具有非常重要的意義[9]。血清腫瘤標(biāo)志物的檢查方法簡(jiǎn)單快捷，容易被患者接受，成為胃癌早期診斷的常用方法[10]。診斷胃癌比較常用的腫瘤標(biāo)志物有CEA、CA19-9、CA72-4等[11-13]。但是，這些廣譜腫瘤標(biāo)志物不能作為診斷胃癌的特異性指標(biāo)，探索和尋找診斷胃癌靈敏度高、特異性強(qiáng)的腫瘤標(biāo)記物是胃癌研究的熱點(diǎn)問題。

CEA是1965年由Gold和Freedman首先從結(jié)腸癌和胚胎組織中提取的一種腫瘤相關(guān)抗原，由存在于內(nèi)胚層的細(xì)胞分化而來的癌癥細(xì)胞表面抗原，是細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)蛋白，其在多種惡性腫瘤的血清中均有升高。OPN是一種蛋白質(zhì)，從骨基質(zhì)中分離，廣泛分布于多種組織和細(xì)胞中，OPN含有的RGD能夠抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞黏附和遷移，OPN還參與免疫調(diào)節(jié)、新生血管生成和鈣代謝等。OPN和惡性腫瘤的關(guān)系也比較密切，與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)[14-15]：OPN水平下調(diào)，腫瘤細(xì)胞的凋亡增加、侵襲力下降；OPN水平越高，患者的預(yù)后越差。OPN在胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)量明顯增加，在有轉(zhuǎn)移的患者中表達(dá)升高，抑制OPN的表達(dá)能夠抑制惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移[16-17]。CK18 在胃 癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中作用的研究越來越多[18]。CK18主要反映上皮細(xì)胞的裂解和凋亡情況。化療藥導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞死亡主要由凋亡介導(dǎo)，因此檢測(cè)與凋亡相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物CK18可能反映化療藥物的有效率，其有望成為更有臨床價(jià)值的胃癌相關(guān)血清學(xué)標(biāo)志物[19]。

本研究通過對(duì)胃癌患者血清中OPN、CEA及CK18的表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定，探討三者聯(lián)合檢測(cè)在胃癌診斷中的意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：胃癌組患者血清OPN、CEA和CK18含量均高于對(duì)照組。Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者血清OPN、CEA和CK18含量高于Ⅰ+Ⅱ期胃癌患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者血清OPN、CEA和CK18含量高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者。ROC曲線下面積可以定量反應(yīng)診斷方法的準(zhǔn)確性，ROC曲線下面積越大診斷準(zhǔn)確性越高。本研究發(fā)現(xiàn)OPN對(duì)胃癌的診斷準(zhǔn)確性較CEA和CK18高，可以作為胃癌檢測(cè)的指標(biāo)，OPN和其他指標(biāo)兩兩聯(lián)合的診斷準(zhǔn)確度高于單獨(dú)OPN的診斷準(zhǔn)確度，OPN和其他指標(biāo)三聯(lián)合的診斷準(zhǔn)確度高于兩兩聯(lián)合，表明OPN和其他指標(biāo)聯(lián)合能夠提高胃癌的診斷準(zhǔn)確度。

OPN與CEA、CK18均可作為胃癌診斷、治療及預(yù)后判定的相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物，但機(jī)制不同。OPN在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移、新生血管生成和凋亡抑制方面發(fā)揮一定作用，CK18與上皮細(xì)胞惡變?cè)鲋?、?xì)胞降解死亡緊密相關(guān)，而 CEA的升高則與其編碼基因在細(xì)胞癌變時(shí)失去抑制作用有關(guān)，三者的聯(lián)合檢測(cè)可能起到一定的互補(bǔ)作用，具體的相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。多腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)有利于提高對(duì)胃癌診斷和病情監(jiān)測(cè)的敏感性，有重要的臨床價(jià)值。

[1] JIA S,CAI J.Update on biomarkers in development of anti-angiogenic drugs in gastric cancer[J].Anticancer Res,2016,36(3):1111

[2] DEGIULI M, DE MANZONI G, DI LEO A,et al.Gastric cancer:current status of lymph node dissection[J].World J Gastroenterol,2016,22(10):2875

[3] KUCERA R,SMID D,TOPOLCAN O,et al.Searching for new biomarkers and the use of multivariate analysis in gastric cancer diagnostics[J].Anticancer Res,2016,36(4):1967

[4] 趙治國(guó),周明鍇,秦勝利,等.胃癌組織中骨橋蛋白與尿激酶型纖溶酶原激活物的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,42(5): 906

[5] CHEN T,SUN L,HE C,et al.Serum OPN expression for identification of gastric cancer and atrophic gastritis and its influencing factors[J].PLoS One,2014,9(12):e114005

[6] DI BARTOLOMEO M,PIETRANTONIO F,PELLEGRINE-LLI A,et al.Osteopontin, E-cadherin, and beta-catenin expression as prognostic biomarkers in patients with radically resected gastric cancer[J].Gastric Cancer,2016,19(2):412

[7] 楊士軍,陸衛(wèi)平,鮑艷梅,等.血清CK18及CA72-4水平在胃癌診治中的臨床價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(13):1593

[8] 裴鋒,朱毅.細(xì)胞角蛋白18片段檢測(cè)在胃癌診斷中的臨床意義[J].腫瘤防治研究,2012,39(4):439

[9] TANI T, SONODA H, TANI M. Sentinel lymph node navigation surgery for gastric cancer:does it really benefit the patient? [J].World J Gastroenterol,2016,22(10):2894

[10]ZHOU YC,ZHAO HJ,SHEN LZ.Preoperative serum CEA and CA19-9 in gastric cancer:a single tertiary hospital study of 1 075 cases[J].Asian Pac J Cancer Prev,2015,16(7):2685

[11]張志棟,李勇,檀碧波,等.胃癌患者癌組織膜聯(lián)蛋白A2的表達(dá)與血清膜聯(lián)蛋白A2及癌胚抗原水平測(cè)定[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2016,51(1):76

[12]LEE EC,YANG JY,LEE KG,et al.The value of postoperative serum carcinoembryonic antigen and carbohydrate antigen 19-9 levels for the early detection of gastric cancer recurrence after curative resection[J].J Gastric Cancer,2014,14(4):221

[13]TIAN SB,YU JC,KANG WM,et al.Combined detection of CEA,CA19-9,CA242 and CA50 in the diagnosis and prognosis of resectable gastric cancer[J].Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(15):6295

[14]QIU Y,HU Y,ZHANG ZY,et al.Genetic association of osteopontin (OPN) and its receptor CD44 genes with susceptibility to Chinese gastric cancer patients[J].J Cancer Res Clin Oncol,2014,140(12):2143

[15]LIU J,LIU Q,WAN Y,et al.Osteopontin promotes the progression of gastric cancer through the NF-κB pathway regulated by the MAPK and PI3K[J].Int J Oncol,2014,45(1):282

[16]CAO DX,LI ZJ,JIANG XO,et al.Osteopontin as potential biomarker and therapeutic target in gastric and liver cancers[J].World J Gastroenterol,2012,18(30),3923

[17]LIU H,LI P,LI B,et al.RKIP inhibits gastric cancer cell survival and invasion by regulating the expression of HMGA2 and OPN[J].Tumour Biol,2014,35(12):11949

[18]OYAMA K,FUSHIDA S,KINOSHITA J,et al.Serum cytokeratin 18 as a biomarker for gastric cancer[J].Clin Exp Med,2013,13(4):289

[19] 鄧薇，張小田，高靜,等.人再生基因蛋白Ⅳ和細(xì)胞角蛋白18在胃癌患者血清中的表達(dá)及臨床意義[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2012,37(12):1142