譚光明 唐云姣 林麗娟 黃彩霞

（1.德?？h動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西德保 533700；2.百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西百色 533000）

豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病是近年來危害養(yǎng)豬業(yè)的三大主要?jiǎng)游镆卟?。我國將其都列為一類?dòng)物疫病，并且列入政府重點(diǎn)防控的重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫病種。雖然2017年1月1日起，豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病國家退出強(qiáng)制免疫，但是這兩種疫病及豬口蹄疫的免疫注射依然是豬病防控工作的重點(diǎn)，特別在農(nóng)村條件落后的散養(yǎng)戶免疫注射工作仍然是防控的首要條件，然而豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病這三種疫病的傳統(tǒng)免疫方式每頭豬免疫次數(shù)多，對(duì)基層獸醫(yī)人員的工作量大，免疫工作落實(shí)難。為了進(jìn)一步做好生豬這三種疫病的防控工作，探索合理有效的免疫方式，既減輕工作量，提高工作效率，又能確保免疫效果，尋找適合德?？h農(nóng)村養(yǎng)殖模式的生豬免疫程序，2017年春防期間，我們進(jìn)行了兩種不同免疫方式的對(duì)比試驗(yàn)，第一種是傳統(tǒng)的免疫方式即先同時(shí)經(jīng)雙側(cè)頸部肌肉注射豬口蹄疫和豬瘟疫苗，14d后再經(jīng)頸部肌肉注射高致病性豬藍(lán)耳病疫苗，簡稱“三苗三針兩免”；第二種是新的免疫方式即將豬瘟疫苗和高致病性豬藍(lán)耳病疫苗分別等量稀釋后混合為1針，注射到豬耳后頸部一側(cè)，另一側(cè)同時(shí)注射豬口蹄疫疫苗，簡稱“三苗兩針一免”。本對(duì)比試驗(yàn)采用這兩種不同免疫方試免疫后的豬，通過免疫副反應(yīng)觀察以及兩次抗體檢測效果比較分析，得出“三苗兩針一免”新的免疫方式既省時(shí)省力，又能使免疫抗體水平達(dá)到國家規(guī)定的群體保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)，可在農(nóng)村散養(yǎng)戶推廣應(yīng)用，現(xiàn)將情況報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

在巴頭鄉(xiāng)念印村李某豬場、敬德鎮(zhèn)扶平村黃某豬場、都安鄉(xiāng)凌雷村許某豬場各選擇45～60日齡未免疫過豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗的健康仔豬各20頭，共60頭。

1.2 疫苗

（1）豬口蹄疫O型滅活疫苗，中牧實(shí)業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：1610002；生產(chǎn)日期：20161013；有效期至：20171014。

（2）豬瘟活疫苗，中博生物股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：20160607；生產(chǎn)日期：20160622；有效期至：20180623。

（3）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（TJM-F92株），吉林特研生物技術(shù)股份有限責(zé)任公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：20161004；生產(chǎn)日期：20160405；有效期至：20180404。

1.3 診斷試劑

（1）口蹄疫病毒O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào)20170307101-6；有效期至：20170906。

（2）豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，武漢科前生物股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：160812；有效期至：170621。

（3）豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒，武漢科前生物股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：170302；有效期至：180122。

1.4 試驗(yàn)主要儀器

（1）小型通用離心機(jī)TGL-16GB，上海安亭科學(xué)儀器廠制造。

（2）生化培養(yǎng)箱spx-1508-z型，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

（3）酶標(biāo)分析儀Rt-6100，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司。

（4）單道微量加樣器20～200μl，多道微量加樣器20～200μl，德國公司生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)分組與免疫方案

在巴頭鄉(xiāng)念印村李某豬場選擇20頭分成A組和B組、敬德鎮(zhèn)扶平村黃某豬場選擇20頭分成C組和D組、都安鄉(xiāng)凌雷村許某豬場選擇20頭分成E組和F組，實(shí)驗(yàn)豬每組10頭，總共6個(gè)組。所選擇的豬均為健康狀況良好，飼養(yǎng)條件相當(dāng)，45～60日齡，并且未經(jīng)過豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病免疫仔豬。其中A、C、E組采用“三苗三針兩免”免疫方式，即先同時(shí)經(jīng)雙側(cè)頸部肌肉注射豬口蹄疫和豬瘟疫苗，14d后再經(jīng)頸部肌肉注射高致病性豬藍(lán)耳病疫苗，接種疫苗劑量嚴(yán)格按說明書使用，豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗按每頭份加1ml生理鹽水稀釋，每頭1ml，豬口蹄疫每頭2ml；B、D、F組采用“三苗兩針一免”免疫方式，即將豬瘟疫苗和高致病性豬藍(lán)耳病疫苗分別等量稀釋后混合為1針，注射到豬耳后頸部一側(cè)，另一側(cè)同時(shí)注射豬口蹄疫疫苗。接種疫苗劑量嚴(yán)格按說明書使用，豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗各按每頭份加1ml生理鹽水稀釋后混合，每頭2ml，豬口蹄疫每頭2ml。

2.2 采樣方案

對(duì)6個(gè)實(shí)驗(yàn)組的豬在免疫后28d、35d經(jīng)前腔靜脈各采集血清樣品一次，兩次采集血清樣品共120份，樣品采集由縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心和鄉(xiāng)鎮(zhèn)站技術(shù)員共同完成，縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)對(duì)血清樣品進(jìn)行抗體檢測。

2.3 抗體檢測方法

O型口蹄疫抗體檢測方法為液相阻斷ELISA試驗(yàn)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)：抗體效價(jià)≥1：128判為抗體陽性，抗體效價(jià)<1：64判為抗體陰性；豬瘟抗體檢測方法為阻斷ELISA試驗(yàn)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)為：陰性對(duì)照的平均OD630nm大于0.500，陽性對(duì)照的阻斷率均大于50%，被檢樣品的阻斷率≤30%，該樣品判為抗體陰性，被檢樣品的阻斷率≥40%，該樣品判為抗體陽性；高致病性豬藍(lán)耳抗體檢測方法為血清學(xué)ELISA試驗(yàn)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)為：陽性對(duì)照OD630nm值均≥0.8，陰性對(duì)照OD630nm值均<0.3，KQ≥20判為陽性，KQ<20判為陰性。試驗(yàn)檢測過程和結(jié)果判定嚴(yán)格按照ELISA檢測試劑說明操作。

3 結(jié)果分析

3.1 免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果

各組試驗(yàn)豬經(jīng)疫苗注射后加掛免疫標(biāo)識(shí)，做好登記，并且注射后48h內(nèi)逐頭觀察精神、食欲、呼吸、體溫、口吐白沫、抽搐、休克死亡等免疫副反應(yīng)情況。經(jīng)免疫后觀察統(tǒng)計(jì)，應(yīng)用“三苗三針兩免”免疫方式的有都安鄉(xiāng)凌雷村許某豬場1頭免疫后第1d食欲減退，第3d恢復(fù)正常，其余的實(shí)驗(yàn)豬無異常；應(yīng)用“三苗兩針一免”免疫方式的有巴頭鄉(xiāng)念印村李某豬場1頭免疫后第1d食欲減退，第2d恢復(fù)正常，其余的實(shí)驗(yàn)豬無異常。兩種免疫方式的副反應(yīng)差異不顯著。

3.2 免疫抗體檢測結(jié)果

應(yīng)用“三苗三針兩免”傳統(tǒng)免疫方式與“三苗兩針一免”新的免疫方式免疫后的6個(gè)實(shí)驗(yàn)組的豬進(jìn)行抗體檢測陽性率相比。結(jié)果，豬口蹄抗體檢測陽性率應(yīng)用“三苗兩針一免”的比“三苗三針兩免”一樣，差異不顯著；豬瘟抗體檢測陽性率應(yīng)用“三苗兩針一免”的比“三苗三針兩免”高1.7個(gè)百分點(diǎn)，差異不顯著；高致病性豬藍(lán)耳抗體檢測陽性率應(yīng)用“三苗兩針一免”的比“三苗三針兩免”低1.7個(gè)百分點(diǎn)，差異不顯著。試驗(yàn)結(jié)果兩種免疫方式的豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體群體合格率都高于75%以上（見表1、2）。

4 小結(jié)與討論

（1）本試驗(yàn)免疫后只進(jìn)行兩次抗體監(jiān)測，對(duì)于抗體達(dá)到高峰時(shí)間、消長時(shí)間規(guī)律還要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)和研究。

（2）從本對(duì)比試驗(yàn)看應(yīng)用兩種不同免疫方式免疫后的豬，免疫副反應(yīng)無明顯的差異，免疫抗體水平都達(dá)到國家規(guī)定的群體保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)70%以上。

（3）從本對(duì)比試驗(yàn)看應(yīng)用兩種不同免疫方式免疫后的豬，通過兩次抗體監(jiān)測結(jié)果比較分析表明，兩種免疫方式在免疫28d后免疫抗體水平均達(dá)到國家規(guī)定的群體免疫合格標(biāo)準(zhǔn)，并且免疫抗體陽性數(shù)和陽性率逐漸增高，35d后采樣監(jiān)測抗體都達(dá)到了較高。

（4）從本對(duì)比試驗(yàn)看應(yīng)用兩種不同免疫方式免疫后結(jié)果分析，“三苗三針兩免”免疫方式在同等的情況下高致病性豬藍(lán)耳病還存在一段時(shí)間的抗體空白。并且所用的時(shí)間、人力、財(cái)力都相對(duì)高；“三苗兩針一免” 免疫方式既省時(shí)、省力，可減少基層獸醫(yī)人員防疫工作量，又能確保免疫效果，進(jìn)一步提高了工作效率。相比，新的“三苗兩針一免”免疫方式優(yōu)于傳統(tǒng)的“三苗三針兩免”免疫方式。

表1 豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳三種疫苗應(yīng)用不同免疫程式抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

表2 豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳三種疫苗應(yīng)用不同免疫程式抗體檢測陽性率匯總表

（5）從本試驗(yàn)免疫效果檢測結(jié)果分析，巴頭鄉(xiāng)念印村李某豬場應(yīng)用“三苗兩針一免”免疫方式的B組高致病性豬藍(lán)耳病免疫合格數(shù)和免疫抗體群體合格率低于其他組，可能是因?yàn)槊庖咦⑸?d后畜主自行進(jìn)行閹割造成應(yīng)激反應(yīng)。德?？h的部分動(dòng)物防疫員平時(shí)習(xí)慣在免疫注射疫苗時(shí)同時(shí)進(jìn)行閹割，導(dǎo)致抗體效價(jià)相對(duì)較低，因此，建議免疫注射疫苗不應(yīng)與閹割同時(shí)進(jìn)行。

（6）從本試驗(yàn)看，在防疫人員在進(jìn)行豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗的等量稀釋時(shí)，會(huì)存在一定的差異，可能會(huì)對(duì)免疫效果造成一定的影響。如果能研制出一種豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳二聯(lián)苗，這將對(duì)豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳病的防控有著重要作用。

綜上所述，“三苗兩針一免”免疫方式，既減少免疫次數(shù)，又能確保免疫抗體水平達(dá)到國家規(guī)定的群體保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)，是一項(xiàng)可行的免疫新技術(shù)，可在農(nóng)村散養(yǎng)戶推廣應(yīng)用。

[1]胡杰，張步嫻.不同免疫方式對(duì)仔豬高致病性豬藍(lán)耳病、豬瘟、豬 口蹄疫三種疫苗抗體水平的影響[J].中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2014，22（5）：61-67.

[2]黃崇元，白春蘭.西雙版納州“321”免疫新技術(shù)與傳統(tǒng)免疫抗體水平的比較[J].云南畜牧獸醫(yī)，2015，（4）：41.