崔新霞　郝瑞榮

（1山西省沁水縣畜牧獸醫(yī)局，山西沁水 048200；2山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山西太谷 030801）

隨著集約化養(yǎng)豬的發(fā)展，為了提高生產(chǎn)效率，提高分娩欄舍利用率，減少疾病傳播，降低飼養(yǎng)成本，生產(chǎn)實踐中普遍實行仔豬早期斷奶技術(shù)。然而，早期斷奶在提高經(jīng)濟(jì)效益的同時，也給仔豬生產(chǎn)帶來諸多問題，導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)采食量下降、腸黏膜結(jié)構(gòu)受損、生長受阻、免疫力和抗病力下降等所謂的“斷奶仔豬應(yīng)激綜合征”[1]。在斷奶期間，氧化應(yīng)激可能是斷奶仔豬應(yīng)激綜合征發(fā)生的主要誘因。動物機(jī)體在正常生理活動中，自由基的產(chǎn)生與消亡保持動態(tài)平衡。當(dāng)機(jī)體受到外界刺激時，機(jī)體的動態(tài)平衡遭到破壞，導(dǎo)致自由基增多。斷奶時，仔豬生理、營養(yǎng)和環(huán)境的突然改變，就是引發(fā)斷奶應(yīng)激的外界刺激，導(dǎo)致仔豬抗氧化機(jī)能衰減，機(jī)體自由基增多[2-3]。研究發(fā)現(xiàn)，斷奶可導(dǎo)致仔豬遭受嚴(yán)重的氧化應(yīng)激，引起腸黏膜屏障功能受損，是誘發(fā)斷奶應(yīng)激綜合征的重要原因[4]。目前，各個豬場的斷奶日齡不盡相同，如有超早期斷奶（14日齡）、21日齡、28日齡和35日齡斷奶等等。李留安等[5]研究發(fā)現(xiàn)，斷奶日齡影響仔豬脾臟、胸腺和胰腺抗氧化功能，斷奶越早，組織抗氧化功能受損程度越嚴(yán)重。本研究通過探討斷奶日齡對仔豬抗氧化功能和免疫力的影響，為確定適宜的仔豬斷奶日齡提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　試驗動物及日糧

試驗選用96頭杜×長×大三元雜交仔豬。按照斷奶日齡分為4個組，斷奶日齡分別為14、21、28、35天，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)6頭豬。仔豬采食玉米-豆粕基礎(chǔ)日糧，日糧組成和營養(yǎng)水平見表1，參照NRC（2012）仔豬營養(yǎng)需要配制。試驗期為4周，從42日齡到70日齡。

1.2　血液樣品采集

在試驗開始和結(jié)束時，每個重復(fù)隨機(jī)選2頭豬，空腹，前腔靜脈采血8m L，離心10m in（3 000 r/m in）獲得血漿，-80℃保存待用。

1.3　血漿抗氧化指標(biāo)測定

待測指標(biāo)包括血漿總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）和血漿丙二醛（MDA）。血漿抗氧化指標(biāo)的測定方法參考郝瑞榮等[6]的方法。檢測試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.4　血漿免疫指標(biāo)測定

血漿免疫指標(biāo)包括免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、補(bǔ)體3（C3）、補(bǔ)體4（C4）和白細(xì)胞介素2（IL-2），血漿免疫指標(biāo)用ELISA試劑盒測定，試劑盒購自美國R&D公司。

1.5　統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，首先進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVO），然后進(jìn)行鄧肯（Duncan）多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SEM）表示，＜0.05表示差異顯著。

2　結(jié)果

2.1　斷奶日齡對仔豬抗氧化功能的影響

表2列出了斷奶日齡對仔豬抗氧化功能的影響。

在仔豬42日齡時，斷奶日齡對血漿T-AOC和MDA濃度以及SOD和GSH-Px活性存在顯著影響。血漿T-AOC濃度隨著斷奶日齡的增大而升高，35日齡斷奶仔豬血漿T-AOC濃度顯著高于其他3組（＜0.05）；21日齡和28日齡斷奶仔豬血漿T-AOC濃度顯著高于14日齡斷奶組（＜0.05）。35日齡和28日齡斷奶仔豬血漿SOD和GSH-Px活性均顯著高于21日齡和14日齡斷奶組（＜0.05）。血漿MDA的含量隨著斷奶日齡的增大而降低。

表1　基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平

在仔豬70日齡時，斷奶日齡對仔豬血漿抗氧化能力的影響仍然存在。血漿T-AOC濃度隨著斷奶日齡的增大而升高，35日齡斷奶仔豬血漿T-AOC濃度顯著高于21日齡和14日齡斷奶組（＜0.05），但與28日齡斷奶仔豬無顯著差異（＞0.05）。35日齡和28日齡斷奶仔豬血漿GSH-Px活性顯著高于21日齡和14日齡斷奶組（＜0.05）。血漿MDA的含量隨著斷奶日齡的增大仍然呈現(xiàn)降低趨勢，其中14日齡斷奶組顯著高于其他3組（＜0.05），但較大日齡斷奶的其他3組之間無顯著差異（＞0.05）。

2.2　斷奶日齡對仔豬免疫力的影響

表3列出了斷奶日齡對仔豬免疫力的影響。

在仔豬42日齡時，血漿IgG、IgM和IL-2的濃度依然因斷奶日齡的不同存在差異。14日齡斷奶組血漿IgG和IgM的濃度均顯著低于21、28和35日齡斷奶組（＜0.05）。14日齡和21日齡斷奶組血漿IL-2的濃度顯著低于28日齡和35日齡斷奶組（＜0.05）。

在仔豬70日齡時，14日齡超早期斷奶對血漿IgM和IL-2的影響還存在，14日齡超早期斷奶組血漿IgM和IL-2的濃度均顯著低于28日齡和35日齡斷奶組（＜0.05）。21、28和35日齡斷奶組之間，血漿免疫參數(shù)無顯著差異（＞0.05）。

3　討論

表2　斷奶日齡對仔豬血漿抗氧化活性的影響

表3　斷奶日齡對仔豬免疫力的影響

斷奶時，仔豬正處于生長發(fā)育的關(guān)鍵時期，自身免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善。此時仔豬又面臨心理、營養(yǎng)和環(huán)境等諸多外界刺激，導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)斷奶應(yīng)激綜合征，臨床表現(xiàn)為焦躁、不安、厭食、生長受阻、增重停滯、抗病力下降，這些癥狀在早期斷奶仔豬身上尤為突出[7]。

當(dāng)機(jī)體處于正常生理狀態(tài)時，自由基的產(chǎn)生與消亡保持動態(tài)平衡，斷奶應(yīng)激打破了這一平衡狀態(tài)，致使仔豬組織和血液自由基增多，抗氧化機(jī)能衰減[2-3]。血液中T-AOC的濃度、SOD、GSH-Px、CAT的活性是反映機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)。T-AOC反映機(jī)體的總抗氧化能力，包括機(jī)體的酶和非酶系統(tǒng)總體抗氧化水平；SOD是機(jī)體清除自由基的一種重要酶，通過歧化反應(yīng)催化超氧化物產(chǎn)生O2和H2O2，反映機(jī)體清除自由基的能力；GSH-Px將機(jī)體產(chǎn)生的過氧化物還原為羥基化合物，保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能免遭過氧化物損害；CAT通過催化分解為分子氧和水，以清除體內(nèi)的H2O2，使細(xì)胞免遭H2O2的毒害；MDA則是氧自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化最重要的產(chǎn)物之一，其含量反映了自由基對動物機(jī)體氧化損傷的程度。不同斷奶日齡對機(jī)體的氧化損傷程度不同，機(jī)體的抗氧化能力也存在差異。

在本試驗中，仔豬分別在14、21、28及35日齡斷奶，斷奶日齡越大，仔豬的抗氧化能力越強(qiáng)，差異顯著，其差異隨著仔豬日齡的增長逐步縮??；14和21日齡斷奶對仔豬造成了嚴(yán)重的氧化損傷，14日齡斷奶的仔豬到70日齡保育結(jié)束時血漿T-AOC濃度仍然顯著低于21、28及35日齡斷奶組，血漿MDA顯著高于其他三組，血漿GSH-Px活性顯著低于28和35日齡斷奶仔豬。與本試驗結(jié)果相似，Yin等[8]研究了14日齡斷奶仔豬的血漿抗氧化能力，結(jié)果表明，早期斷奶應(yīng)激破壞了機(jī)體的抗氧化平衡，給仔豬帶來了嚴(yán)重的氧化損傷。針對斷奶日齡對仔豬抗氧化能力的影響，孫景童等[9]的研究表明，在斷奶10、25和35天后，19日齡斷奶組血漿SOD、GSH-Px的活性顯著低于25日齡斷奶組（＜0.05）；血漿MDA的含量顯著高于25日齡斷奶組（＜0.05），說明19日齡斷奶對仔豬造成更為嚴(yán)重的氧化損傷，25日齡斷奶仔豬的抗氧化能力顯著強(qiáng)于19日齡。楊晶晶[7]的研究顯示，14日齡斷奶組仔豬的血漿MDA含量顯著高于21日齡、28日齡和35日齡斷奶組；隨著斷奶日齡的推遲，血漿GSH-Px和T-SOD的活性升高，28日齡和35日齡斷奶組血漿GSH-Px和T-SOD的活性顯著高于14日齡斷奶組。

斷奶時仔豬自身免疫系統(tǒng)還處于發(fā)育過程中，直到5周齡后才逐漸趨于完善。免疫系統(tǒng)的不斷激活會產(chǎn)生大量自由基，自由基的產(chǎn)生會削弱免疫系統(tǒng)的功能[10]。顧憲紅等[11]以腸黏膜免疫組分上皮間淋巴細(xì)胞（IEL）和杯狀細(xì)胞（GC）的數(shù)量作為衡量仔豬腸道的免疫狀況的指標(biāo)，研究了不同斷奶日齡（分別為17、21、28、35日齡斷奶）對仔豬腸道免疫的影響，結(jié)果表明，21日齡斷奶，仔豬免疫功能尚未發(fā)育完全，腸道表現(xiàn)為較低的免疫激活狀態(tài)；到28日齡，仔豬免疫功能進(jìn)一步發(fā)育，腸道表現(xiàn)出較強(qiáng)的免疫激活狀態(tài)，能應(yīng)答斷奶和固體飼料；至35日齡，仔豬免疫功能進(jìn)一步完善，能應(yīng)付各種應(yīng)激源的刺激并保護(hù)腸道的健康。

本試驗檢測了仔豬血漿抗體（IgG、IgM）、補(bǔ)體（C3、C4）和細(xì)胞因子（IL-2），探討了斷奶日齡對仔豬免疫力的影響，試驗表明14日齡超早期斷奶對仔豬免疫力的影響較大，這種影響在仔豬70日齡時還存在；21日齡斷奶對仔豬免疫功能的發(fā)育也存在一定的影響，但是這些影響隨著仔豬日齡的增長在逐步縮小，到70日齡時，21日齡斷奶組仔豬免疫力與28日齡及35日齡斷奶組仔豬的免疫力已無顯著差異。

4　結(jié)論

斷奶日齡越大，仔豬抗氧化功能和免疫力越強(qiáng)；隨著仔豬日齡的增長，斷奶日齡對抗氧化功能和免疫力的影響逐漸降低，但是14日齡超早期斷奶對仔豬造成較強(qiáng)的氧化損傷，致使仔豬的抗氧化功能和免疫力到70日齡時仍低于28日齡和35日齡斷奶仔豬。

[1]BagchiM,M ilnes M,Williams C,et al.Acute and chronic stress-induced oxidative gastrointestinal injury in rats,and the p rotective ability o f a nove l g rape seed p roanthocyanid in extract[J].Nutrition Research,1999,19(8)：1189-1199.

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[3]Burke NC,Scag lia G,Boland HT,et al.Influence of two-stage weaning with subsequent transport on body weight,p lasma lip id peroxidation,p lasma selenium,and on leukocyte g lu-tathione peroxidase and g lutathione reductase activity in beef calves[J].Veterinary Immunology and Imm unopatho logy,2009,127：365-370.

[4]徐健雄.不同斷奶日齡仔豬的氧化應(yīng)激損傷及其機(jī)理研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2014.

[5]李留安,王鳳云,楊晶晶,等.斷奶日齡對仔豬脾臟、胸腺和胰腺抗氧化功能的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2014,26(1)：74-80.

[6]郝瑞榮,高俊杰,王偉偉,等.高粱原花青素對斷奶仔豬生長性能和免疫力及抗氧化功能的影響 [J].中國畜牧雜志,2015,13：66-70.

[7]楊晶晶.斷奶日齡對仔豬抗氧化功能、生長相關(guān)激素及功能基因表達(dá)影響的研究[D].天津：天津農(nóng)學(xué)院,2016.

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[9]孫景童,李命九,史喚,等.斷奶日齡對仔豬血液生化指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)的影響[J].飼料研究,2015,21：1-5.

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[11]顧憲紅,張宏福,佘銳萍,等.斷奶日齡對仔豬腸道黏膜水解酶及其上皮間淋巴細(xì)胞和杯狀細(xì)胞數(shù)的影響 [J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2005,17(1)：35-39.