劉 威

（營口市老邊區(qū)疾病預(yù)防控制中心 微生物檢驗科，遼寧 營口 115005）

結(jié)核病是因為受到結(jié)核分枝桿菌感染所致的常見的傳染病之一。人類對于結(jié)核病的認(rèn)識可以追溯到50萬年前，雖然該病歷史悠久，但是人類尚沒有完全克服它，至今為止結(jié)核病仍居于引起人類死亡的傳染病的第二位。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，世界范圍內(nèi)活動性肺結(jié)核的患者約有2000萬，據(jù)該組織統(tǒng)計21世紀(jì)10年，世界范圍內(nèi)新發(fā)的肺結(jié)核患者超過了500萬，我國是人口大國，同時也是遭受結(jié)核分枝桿菌影響的大國，據(jù)我國資料顯示我國居民的結(jié)核分枝桿菌的感染率超過30%[1]。因結(jié)核分枝桿菌常有變異耐藥發(fā)生，因此對于耐藥性的結(jié)核分枝桿菌的檢測的準(zhǔn)確性可以指導(dǎo)臨床用藥，避免了病情的延誤，減輕了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，我疾控中心應(yīng)用不同的基因檢測技術(shù)檢測耐藥結(jié)核分枝桿菌，旨在找出簡便易行、檢測率高的檢測方法，指導(dǎo)臨床治療和疾病的防控，報道如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料：選取自2015年4月至2016年4月于營口市疾控中心痰涂片結(jié)核分枝桿菌陽性的痰標(biāo)本150例（每人痰樣本為3例，共450例），采用信封法隨機(jī)分為試驗組和對照組，試驗組150例，其中男性75例，女性75例，年齡19～70歲，平均（41.9±7.9）歲，對照組150例，其中男性75例，女性75例，年齡19～74歲，平均（41.3±8.6）歲，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析兩組患者年齡和性別均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），可以進(jìn)行比較。

1.2 痰標(biāo)本的收集方法：囑患者均應(yīng)在每日行口腔清潔連續(xù)3 d，每天留取痰樣本3次，取得痰樣本后應(yīng)將樣本放于4 ℃的環(huán)境中暫存，患者痰樣本的實驗室培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)參照中國防癆協(xié)會《結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》中的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[2]。

1.3 實驗室藥敏技術(shù)：應(yīng)用BASCO公司的培養(yǎng)基對痰標(biāo)本進(jìn)行一般培養(yǎng)，并對結(jié)核分枝桿菌應(yīng)用異煙肼和利福平的藥敏定性和定量檢測，所有的實驗室藥敏培養(yǎng)技術(shù)均參照世界衛(wèi)生組織的IUATLD標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。計算并統(tǒng)計耐藥的標(biāo)本數(shù)量。

1.4 傳統(tǒng)基因擴(kuò)增檢測技術(shù)：將患者的痰標(biāo)本進(jìn)行必要的去污及相關(guān)處理后應(yīng)用傳統(tǒng)基因擴(kuò)增技術(shù)對痰液標(biāo)本進(jìn)行測定和分析[3]。

1.5 線性探針基因檢測：應(yīng)用GenotypeR MTBDR plus試劑盒，將痰標(biāo)本經(jīng)過去污處理后制成混懸液，進(jìn)過離心、水浴和再次離心后取上清液5 μL加入PCR擴(kuò)增體系中，經(jīng)過多次不同的條件擴(kuò)增后將標(biāo)本與線性探針進(jìn)行雜交根據(jù)比色條判斷藥物的耐藥性。

1.6 觀察指標(biāo)：觀察試驗組、對照組和實驗室藥敏培養(yǎng)的耐藥率。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析：采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用（±s）表示，兩組間率比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

試驗組耐藥率為7.3%，對照組耐壓率為3.3%，實驗室藥敏培養(yǎng)耐藥率8.6%。試驗組和對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），試驗組和實驗室藥敏培養(yǎng)的耐藥率比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），見表1。

表1 兩組實驗結(jié)果

3 討 論

結(jié)核分枝桿菌是一類形態(tài)呈桿狀，不易被染色可以抗鹽酸，可以被乙醇脫色的抗酸桿菌，具有較強(qiáng)的抗干燥能力在干燥的痰液內(nèi)可以頑強(qiáng)生存7個月。不僅如此結(jié)核分枝桿菌具有一定的變異性，容易發(fā)生耐藥，目前研究認(rèn)為該耐藥性是因為結(jié)核分枝桿菌內(nèi)本身發(fā)生的某些基因突變或者是因為藥物的刺激而發(fā)生了基因的突變產(chǎn)生耐藥性[4]。

本文研究了觀察傳統(tǒng)的基因擴(kuò)增檢測技術(shù)和線性探針基因檢測技術(shù)對耐藥結(jié)核分枝桿菌檢測的準(zhǔn)確性，結(jié)果表明線性探針基因檢測技術(shù)較基因擴(kuò)增檢測技術(shù)對于耐藥的結(jié)核分枝桿菌檢測較為敏感與對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），線性探針基因檢測技術(shù)對耐藥結(jié)核分枝桿菌的檢測率優(yōu)于較傳統(tǒng)的基因擴(kuò)增檢測技術(shù)。

[1]陸偉,周揚(yáng),陳誠,等.江蘇省社區(qū)人群結(jié)核桿菌耐藥狀況及影響因素研究[J].中華疾病控制雜志,2013,17(7):560-563.

[2]梁建琴,李洪敏,高華方,等.應(yīng)用 PCR-熒光探針法快速檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌基因型[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2013,23(21):5140-5142.

[3]朱麗,霍貴成.環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法快速檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌[J].食品科學(xué),2011,32(16):213-218.

[4]時金艷,李鐵成,夏榮榮,等.線性探針技術(shù)用于快速篩查耐多藥結(jié)核病的研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2012,30(4):330-333.