周歡

摘要：10uL以下微小容量的檢測和校準需求迫切而且難度較大，本文總結了三種微小容量量值的測量方法：衡量法、分光光度法、雙波長參比法。。

關鍵詞：微小容量、衡量法、分光光度法、雙波長參比法

容量計量分類通常為：大容量、中容量和小容量計量，對超微容量、微小容量計量一般納入到小容量計量研究范疇。一般來說，10uL以下的取液值在容量計量中就可以歸為微小容量計量測量。微小容量計量器具，比如移液器，微量進樣器等在我國醫(yī)藥化工方面、實驗室用分析儀器對樣品定性、定量方面發(fā)揮著越來越重要的作用，其被檢定或校準的需求越來越迫切。目前，國內(nèi)對于微小容量的測量方法研究還處于起步階段，本文將介紹幾種已應用或者正在測試當中的微小容量的計量方法。

目前有以下幾種測量方案。

一、衡量法

衡量法的容積值由被檢裝置排出的蒸餾水質(zhì)量，蒸餾水溫度（對應Kt值）決定。

容積值計算公式為：

式中：V20為標準溫度 20 ℃ 時微量進樣器裝置的實際容量m³;m為被檢移液裝置所排出的蒸餾水表觀質(zhì)量，kg;ρb為砝碼密度，取 8 000 kg /?m³;ρa為檢定時實驗室內(nèi)的空氣密度，取 1.2 kg /?m³;ρw：蒸餾水在 t ℃ 時的密度，kg /?m³。

為了簡便計算過程，將上式轉化為：

其中：

k（t）值可以查表得出。

二、分光光度法

式中 ε 為比例常數(shù)，與入射光波長和環(huán)境溫度等參數(shù)有關。

選取顯色劑作為待測液體，吸收波長為λS，比例常數(shù)為 εS，濃度為 cS，待測體積為未知量VU;稀釋劑的吸收波長為 λD，比例常數(shù)為 εD，濃度為 cD，體積為 VD。將稀釋比為 R 的顯示劑溶液加入樣品池中，在波長 λS和 λD處的吸收度為

這種測量方法不受光程和吸收常數(shù)等因素的影響，測量結果主要取決于標準顯色劑溶液稀釋比 R 和光譜讀數(shù)相對值。這樣測得的微小容量值將會更接近于真值。

小結

以上介紹的三種微小容量測量方案各有優(yōu)缺點。衡量法：優(yōu)點是簡單方便，成本小，缺點是蒸餾水的揮發(fā)會帶來很大的測量誤差;分光光度法：優(yōu)點是減少了人為的讀數(shù)誤差，缺點是標準溶液配制的準確與否直接回影響到后期的計算，而且同樣濃度溶液測量出來光度值每次都會有一些差別;雙波長參比測量方法（DWP）的優(yōu)點是消除了一些其他因素的影響，比如光程差和吸收常熟，缺點是試驗和計算的過程較為復雜，目前還不適合大量廣泛應用此方法進行微小容量量值的測量。

參考文獻

[1]曹美娜.微小容積測定方法的研究[J].計量技術，1984（06）：9-12

[2]王金濤，陳超云，李志昊，佟林，劉子勇，張瓏，羅志東.超微量液體容積雙波長參比測量方法研究[J].計量學報，2015，36（03）：256-259.

[3]JJG646-2006《移液器》檢定規(guī)程

[4] Batista E，Pinto L，F(xiàn)ilipe E，et al. Calibration ?of ?micropipettes：Test methods and uncertainty analysi[s J].Measurement：Journal of the International MeasurementConfederation，2007，40（3）：338 -342.

[5] Aibe V Y. Water mass measurement m parts for volumestandard calibration in tlie key comparison[C]//FLOMEKO，14th International Flow MeasurementConference，Sandton，South Africa，2007：145 -148.

（作者單位：陜西省計量科學研究院）