王芳

【摘要】 目的 對血液篩查病毒核酸檢測的室間質(zhì)量評價進行分析， 評價本實驗室核酸檢測結(jié)果的準確性。方法 10份本年度由衛(wèi)計委臨床檢驗中心第一次發(fā)放的病毒核酸考核樣本， 采用同本室常規(guī)核酸標本相同的檢測方式， 分別進行乙型肝炎病毒的脫氧核糖核酸（HBV-DNA）、丙型肝炎病毒的核糖核酸（HCV-RNA）、人類免疫缺陷性病毒的核糖核酸（HIV-RNA）三個項目的混檢和單檢， 使用本室聚合酶鏈式反應（PCR）檢測系統(tǒng)， 嚴格按標準操作。根據(jù)反饋結(jié)果與本室檢測結(jié)果進行對比， 觀察室間質(zhì)量評價結(jié)果， 分析本實驗室核酸檢測結(jié)果準確性。結(jié)果 10份標本的HBV-DNA、HCV-RNA、

HIV-RNA室間質(zhì)量評價中， 定性結(jié)果與預期一致， 陽性結(jié)果檢測CT值， 與全國同一檢測系統(tǒng)靶值相近。HBV-DNA陽性標本分別為樣本11、樣本13、樣本14、樣本18、樣本19， 混樣檢測CT值結(jié)果分別為37.1、36.6、37.7、37.8、35.5， 而該試劑混檢全國平均CT值分別為35.0、35.4、37.0、37.6、35.3， 單檢CT值分別為33.4、32.6、35.7、37.5、34.0， 全國均值依次為32.5、32.4、34.4、35.2、32.6。HCV-RNA檢測出陽性結(jié)果1個， 為樣本15， 混檢和單檢CT值分別為35.4、31.5；而該樣本同一檢測試劑的混檢和單檢全國平均CT值分別為33.0、30.0。HIV-RNA陽性結(jié)果2個， 分別為樣本11、樣本17， 本室混檢CT值分別為41.8、41.0， 全國均值分別為41.0、41.2， 單檢CT值為37.2、38.0， 全國均值為38.0、38.4。結(jié)論 室間質(zhì)量評價的應用， 可用于實驗室檢測體系的性能驗證， 有利于提高和保證實驗室工作質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 血液篩查病毒；核酸；脫氧核糖核酸；核糖核酸；室間質(zhì)量評價

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.13.118

特異性靶核酸序列通常經(jīng)聚合酶鏈式反應， 進行體外高效擴增， 此技術(shù)作為分子生物學檢測先進方法， 廣泛應用于多種疾病中， 如乙肝、丙肝、艾滋病等， 具有獨特優(yōu)勢， 但由于此技術(shù)發(fā)展時間短， 目前還存在一定應用局限性， 尤其在供血系統(tǒng)， 部分實驗室采用的是多人份混樣檢測模式， 故而， 室間質(zhì)量評價必不可少， 直接關(guān)系著基因擴增檢驗的準確性、有效性， 關(guān)系著血液的質(zhì)量安全[1]。本文旨在分析血液篩查病毒核酸檢測室間質(zhì)量評價結(jié)果的應用?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料

1. 1. 1 檢測系統(tǒng) 上海浩源核酸檢測系統(tǒng)自動化磁珠操作平臺Chitas 1200， ABI 7500 PCR擴增儀， 兩臺設備均經(jīng)校準合格， 校準期內(nèi)運行正常。

1. 1. 2 檢測試劑與耗材 配套使用上海浩源核酸檢測試劑盒， 使用前均經(jīng)進貨確認并在有效期內(nèi)使用， 所用耗材如攪拌棒、PCR反應管、PCR耗材等均由試劑生產(chǎn)商提供， 要求無DNA酶， 無RNA酶。

1. 1. 3 室內(nèi)質(zhì)控血清 使用北京康徹思坦公司提供的商品化的HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA核酸檢測標準血清， 濃度分別為200 IU/ml， 1000 IU/ml， 2000 IU/ml的核酸質(zhì)控品， 是試劑最低檢出限的2～5倍。

1. 1. 4 室間質(zhì)量評價質(zhì)控血清樣本 10支衛(wèi)計委臨床檢驗中心發(fā)放的血液篩查核酸檢測質(zhì)評樣本， 編號分別為11～20。

1. 2 方法 使用上海浩源核酸樣本處理檢測系統(tǒng)Chitas 1200進行PCR模板的制備：挑取70份已經(jīng)經(jīng)本室核酸檢測結(jié)果陰性的常規(guī)核酸標本， 每7份分別與1份室間質(zhì)量評價樣本進行混樣（8人份混合檢測）， 并同當日檢測標本一起隨機排列， 嚴格按儀器和試劑操作說明書進行標本混樣、病毒核酸裂解、提取、純化， 最后制備出擴增反應液置于ABI 7500擴增儀中擴增核酸序列， 依據(jù)熒光信號的變化表示擴增結(jié)果， 病毒核酸濃度達到檢測限時的擴增循環(huán)數(shù)以CT值表示， CT值與病毒含量成反比， 若CT值>45則結(jié)果為陰性。室間質(zhì)量評價于2017年3月進行， 按照質(zhì)控中心要求檢測日期范圍內(nèi)檢測， 截止日期前實行網(wǎng)絡上報。檢測室間質(zhì)量評價樣本數(shù)共10個， 按照PCR實驗室各項檢測標準操作執(zhí)行， 收到反饋后對結(jié)果進行分析。

1. 3 觀察指標 根據(jù)反饋結(jié)果與本室檢測結(jié)果進行對比， 觀察室間質(zhì)量評價結(jié)果， 分析本實驗室核酸檢測結(jié)果準確性。

2 結(jié)果

2. 1 定性檢測值比較 HBV-DNA室間質(zhì)量評價中， 樣品11～20混檢和單檢結(jié)果分別為+、-、+、+、-、-、-、+、+、-， 定性結(jié)果與預期一致， 陽性結(jié)果檢測CT值， 與全國同一檢測系統(tǒng)靶值相近。

HCV-RNA室間質(zhì)量評價中， 樣品11～20混檢和單檢結(jié)果分別為-、-、-、-、+、-、-、-、-、-， 定性結(jié)果與預期一致， 陽性結(jié)果檢測CT值， 與全國同一檢測系統(tǒng)靶值相近。

HIV-RNA室間質(zhì)量評價中， 樣品11～20混檢和單檢結(jié)果分別為+、-、-、-、-、-、+、-、-、-， 定性結(jié)果與預期一致， 陽性結(jié)果檢測CT值， 與全國同一檢測系統(tǒng)靶值相近。

2. 2 定量檢測CT值比較 HBV-DNA陽性標本分別為樣本11、樣本13、樣本14、樣本18、樣本19， 混樣檢測CT值結(jié)果分別為37.1、36.6、37.7、37.8、35.5， 而該試劑混檢全國平均CT值分別為35.0、35.4、37.0、37.6、35.3， 單檢CT值分別為33.4、32.6、35.7、37.5、34.0， 全國均值依次為32.5、32.4、34.4、35.2、32.6。HCV-RNA檢測出陽性結(jié)果1個， 為樣本15， 混檢和單檢CT值分別為35.4、31.5；而該樣本同一檢測試劑的混檢和單檢全國平均CT值分別為33.0、30.0。HIV-RNA陽性結(jié)果2個， 分別為樣本11、樣本17， 本室混檢CT值分別為41.8、41.0， 全國均值分別為41.0、41.2， 單檢CT值為37.2、38.0， 全國均值為38.0、38.4。

3 討論

室間質(zhì)量評價主要是將通過實驗室質(zhì)量考評結(jié)果的比對， 對既定項目檢驗結(jié)果的一致性、準確性進行客觀評價， 了解檢測結(jié)果差異， 提出針對性改進措施[2， 3]， 提高實驗室檢測技術(shù)， 進而促使實驗室工作質(zhì)量趨于一致， 獲得可比性， 具有減少差錯、改進工作、提高工作質(zhì)量等優(yōu)勢[4-6]。也是對檢測實驗室所開展的項目檢測能力的評價與驗證。

本文10份考核樣本中， HBV-DNA共檢測出5個陽性樣本， HCV-RNA共檢出1個陽性樣本， HIV-RNA共檢出2個陽性樣本， 此次結(jié)果中， 定性檢查與衛(wèi)計委臨床檢驗中心反饋的預期結(jié)果完全相符， 定量檢測中上述三個項目本室檢測值與全國同一檢測系統(tǒng)平均值基本相符， 精密度較佳， 而混樣檢測結(jié)果中三個項目的陰性結(jié)果與預期完全符合， 準確性好。在實際工作中， 樣本檢出能力差可能是受標本管選擇、標本留取方式和離心時限、標本質(zhì)量、環(huán)境溫度、濕度等影響， 操作不當極有可能導致在PCR擴增反應液制備前期核酸降解， 進而影響檢查結(jié)果[7-10]。

綜上所述， 室間質(zhì)量評價能夠反映實驗室工作質(zhì)量， 通過對比檢測結(jié)果， 利于減少差錯、改進工作， 進一步規(guī)范實驗操作， 提高質(zhì)評成績。

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[收稿日期：2018-01-08]