楊章明　常寧濤 　吳先華　甘勇　杜方志

摘要 [目的]明確萬(wàn)壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的防治效果。[方法]在大田試驗(yàn)中設(shè)置3個(gè)處理（單獨(dú)間作萬(wàn)壽菊、單獨(dú)施用厚孢輪枝菌、間作萬(wàn)壽菊同時(shí)施用厚孢輪枝菌），對(duì)萬(wàn)壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合防治煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的協(xié)同增效效應(yīng)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。[結(jié)果]烤煙間作萬(wàn)壽菊同時(shí)施用厚孢輪枝菌，能顯著增加烤煙的株高和葉片寬度，煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的防效高達(dá)68.1%，較單獨(dú)間作萬(wàn)壽菊的防效提高了25.6%，較單獨(dú)使用厚孢輪枝菌的防效提高了20.9%。[結(jié)論]萬(wàn)壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合防治煙草根結(jié)線蟲(chóng)具有顯著的協(xié)同增效效應(yīng)。

關(guān)鍵詞 萬(wàn)壽菊；厚孢輪枝菌；聯(lián)合防治；煙草根結(jié)線蟲(chóng)病

中圖分類(lèi)號(hào) S435.72 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2018）27-0160-03

Integrated Control Effect of Tobacco Rootknot Nematode Disease by Tagetes erecta and Verticillium chlamydosporium

YANG Zhangming ，CHANG Ningtao，WU Xianhua et al

（Panzhihua Branch of Sichuan Tobacco Corporation， Panzhihua，Sichuan 617000）

Abstract [Objective]To identify the integrated effect of Tagetes erecta and Verticillium chlamydosporium against tobacco rootknot nematode disease. [Method]A threetreatments （single intercropping T. erecta ， single using V. chlamydosporium， intercropping T. erecta at the same time using V. chlamydosporium） field experiment was set to make a comprehensive evaluation on integrated T. erecta and V. chlamydosporium against tobacco rootknot nematode disease. [Result]Intercropping T. erecta while using V. chlamydosporium could significantly increase the height and maximum width of tobacco， which gained a high control efficiency of 68.1%， the control efficacies increased by 25.6% and 209% in single intercropping T. erecta and single using V. chlamydosporium. [Conclusion]The synergism of T. erecta and V. chlamydosporium shows obviously increase effects on controlling tobacco rootknot nematode disease.

Key words Tagetes erecta；Verticillium chlamydosporium；Integrated control；Tobacco rootknot nematode disease

作者簡(jiǎn)介 楊章明（1979—），男，四川攀枝花人，助理農(nóng)藝師，從事煙葉生產(chǎn)技術(shù)推廣工作。*通訊作者，農(nóng)藝師，從事煙葉生產(chǎn)技術(shù)推廣工作。

收稿日期 2018-05-26； 修回日期 2018-06-05

全球每年因植物線蟲(chóng)造成的損失高達(dá)數(shù)千億美元[1]，其中以根結(jié)線蟲(chóng)Meloidogyne sp.為害最為嚴(yán)重[2]，已成為我國(guó)經(jīng)濟(jì)作物的重要病原線蟲(chóng)[3]。近年來(lái)，復(fù)種指數(shù)居高不下、連作頻頻，導(dǎo)致全國(guó)煙草根結(jié)線蟲(chóng)病為害面積呈逐年增加趨勢(shì)[4]。目前防治根結(jié)線蟲(chóng)仍以化學(xué)防治為主[5]，其生產(chǎn)成本相對(duì)較高，且毒性相對(duì)較大，長(zhǎng)期使用不僅會(huì)污染環(huán)境，而且對(duì)人畜健康存在巨大的潛在威脅[4]，近年來(lái)，由于煙草上大批化學(xué)殺線蟲(chóng)劑被禁止使用[6]，研究環(huán)境友好型其他防治措施來(lái)替代已迫在眉睫[7]。研究應(yīng)用新的環(huán)境友好型生物防治技術(shù)來(lái)防治煙草根結(jié)線蟲(chóng)病，已成煙草行業(yè)公認(rèn)的有效防治措施[8]。

長(zhǎng)期以來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在利用殺線蟲(chóng)植物防治根結(jié)線蟲(chóng)方面進(jìn)行了大量研究，并取得了顯著成果[9]，近年來(lái)研究較多的殺線蟲(chóng)植物為萬(wàn)壽菊[10-12] 。厚孢輪枝菌（Verticillium chlamydosporium）是一種在許多國(guó)家被廣泛開(kāi)發(fā)應(yīng)用的食線蟲(chóng)生防真菌[11]，其能夠寄生于胞囊線蟲(chóng)及其蟲(chóng)卵內(nèi)，對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)具有良好的防治效果[12-13]，因而被廣泛應(yīng)用于根結(jié)線蟲(chóng)生物防治領(lǐng)域[14-18]，但由于田間生態(tài)環(huán)境復(fù)雜多變，且近年來(lái)氣候條件不斷變化，致使厚孢輪枝菌表現(xiàn)出防效不穩(wěn)定且見(jiàn)效慢的現(xiàn)象[19]。為解決上述問(wèn)題，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)利用植物組織提取物與根結(jié)線蟲(chóng)生防真菌聯(lián)合防治根結(jié)線蟲(chóng)病進(jìn)行了大量研究，但主要集中在植物組織提取物與淡紫擬青霉聯(lián)合應(yīng)用上[8，20-21]，鑒于此，筆者聯(lián)合利用萬(wàn)壽菊與厚孢輪枝菌2種線蟲(chóng)生防因子，探索它們之間的協(xié)同增效機(jī)制，以期為煙葉生產(chǎn)中根結(jié)線蟲(chóng)病防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試植物：萬(wàn)壽菊，由云南綠葉生防科技有限公司提供的萬(wàn)壽菊種子培育。

供試菌劑：2.5億活孢子/g厚孢輪枝菌，由云南陸良酶制劑有限責(zé)任公司提供。

供試作物：烤煙云85，由四川省煙草公司攀枝花市公司提供。

1.2 方法

大田試驗(yàn)安排在攀枝花市仁和區(qū)干壩子植煙區(qū)，海拔1 830 m，試驗(yàn)地屬于根結(jié)線蟲(chóng)病歷年發(fā)病較為嚴(yán)重地塊，各試驗(yàn)小區(qū)的土壤類(lèi)型 、栽培條件及水肥管理?xiàng)l件等均勻一致。煙株于4月27日移栽，株行距1.2 m×0.5 m。試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理，3次重復(fù)，共12個(gè)小區(qū)，每小區(qū)植煙60株，采用完全隨機(jī)區(qū)組排列方式。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目及方法

1.3.1 煙株農(nóng)藝性狀。

于烤煙打頂期在各小區(qū)定株測(cè)量 5 株烤煙的株高、 莖圍、 最大葉長(zhǎng)、 最大葉寬，進(jìn)行農(nóng)藝性狀比較，調(diào)查方法參照文獻(xiàn)[22]，略有改動(dòng)。

1.3.2 根結(jié)線蟲(chóng)病發(fā)病情況。

煙葉采收結(jié)束，采用5點(diǎn)取樣法，在各處理小區(qū)挖取10 株完整的煙株根系，按照 GB /T 23222—2008 標(biāo)準(zhǔn)記載各處理煙株根部煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的發(fā)病情況，計(jì)算各處理小區(qū)的病情指數(shù)及防效。

病情指數(shù) = ∑[（ 病級(jí)數(shù) × 該病級(jí)株數(shù)）/（ 調(diào)查總數(shù) ×最高級(jí)值）] × 100

防治效果 =（ 空白病情指數(shù) - 處理病情指數(shù)）/空白病情指數(shù) × 100%

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用DPS 7.0軟件中Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較并進(jìn)行顯著性差異檢驗(yàn)分析[23]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理煙株農(nóng)藝性狀比較

從表1可以看出，打頂期，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組各處理均能在一定程度上對(duì)烤煙農(nóng)藝性狀有所改善，其中株高促進(jìn)效率以處理TV最高，達(dá)406%；莖圍在處理VC與TV之間差異不顯著，但顯著優(yōu)于空白；烤煙最大葉長(zhǎng)在試驗(yàn)組各處理間差異不顯著，但顯著優(yōu)于對(duì)照；烤煙最大葉寬以處理TV最大，達(dá)43.0 cm，較對(duì)照增加了47.8%。因此，烤煙間作萬(wàn)壽菊同時(shí)施用厚孢輪枝菌處理的烤煙農(nóng)藝性狀綜合表現(xiàn)最好。

2.2 不同處理防治效果比較

從表2可以看出，烤煙采收結(jié)束，處理TV平均防效最高，達(dá)68.1%，較單獨(dú)間作萬(wàn)壽菊平均防效提高25.6%，較單獨(dú)施用厚孢輪枝菌防效提高209%。這說(shuō)明萬(wàn)壽菊與厚孢輪枝菌之間具有顯著的協(xié)同增效作用，兩者聯(lián)合使用，既能改善烤煙的綜合農(nóng)藝性狀，又能提升煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的防治效果。

3 結(jié)論與討論

該研究結(jié)果表明，萬(wàn)壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合使用時(shí)能使厚孢輪枝菌對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的防治效果提高20.9%，且顯著改善烤煙的高度與葉片寬度，這說(shuō)明萬(wàn)壽菊與厚孢輪枝菌之間存在顯著的協(xié)同增效作用，兩者聯(lián)合使用可作為1種具有生防潛質(zhì)的根結(jié)線蟲(chóng)綜合生防因子加以研究與應(yīng)用。

土壤抑菌作用被認(rèn)為是影響生防菌防治效果的重要因素[24]，研究發(fā)現(xiàn)，萬(wàn)壽菊根部提取物對(duì)多種病原菌具有明顯的抑制作用，如枯萎病病菌、青霉、枯草芽孢桿菌等[25-26]。該研究發(fā)現(xiàn)，間作萬(wàn)壽菊同時(shí)施用厚孢輪枝菌能顯著提高煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的防治效果，這可能是萬(wàn)壽菊根系產(chǎn)生了某些具有抑制病原菌的生物堿解除了部分土著病原菌（青霉、枯草芽孢桿菌）對(duì)厚孢輪枝菌的抑制作用，從而提高了厚孢輪枝菌在土壤中的定殖率，更有利于根結(jié)線蟲(chóng)病的防治，但此假設(shè)還需要大量的抑菌試驗(yàn)加以驗(yàn)證。

Kerry等[27]認(rèn)為，衡量1株根結(jié)線蟲(chóng)生防菌生防潛質(zhì)的重要指標(biāo)應(yīng)包括以下3個(gè)方面：①產(chǎn)孢能力；②對(duì)線蟲(chóng)及蟲(chóng)卵的作用活性；③菌株在土壤中的定殖能力。研究表明，萬(wàn)壽菊與淡紫擬青霉在防治根結(jié)線蟲(chóng)之間存在顯著協(xié)同增效機(jī)制[8，21]，這些協(xié)同增效機(jī)制主要包括：萬(wàn)壽菊適合淡紫擬青霉生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和萌發(fā)，能促進(jìn)淡紫擬青霉對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵的抑制，淡紫擬青霉 Paecilomyces lilacinus 和厚孢輪枝菌 V.chlamydosporium 是防治根結(jié)線蟲(chóng)的2種重要生防真菌，它們同屬絲孢綱，具有一定的相似性[28]。該研究發(fā)現(xiàn)，萬(wàn)壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合防治煙草根結(jié)線蟲(chóng)具有顯著的協(xié)同增效機(jī)制，這一協(xié)同增效機(jī)制可能與萬(wàn)壽菊與淡紫擬青霉的協(xié)同增效機(jī)制相似，但這一假設(shè)，還需通過(guò)萬(wàn)壽菊對(duì)厚孢輪枝菌的生長(zhǎng)適應(yīng)性、產(chǎn)能和萌發(fā)，促進(jìn)厚孢輪枝菌對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵的抑制等進(jìn)一步驗(yàn)證。土壤中的 Cu2+和Mg2+是影響厚孢輪枝菌在土壤中定殖和生長(zhǎng)的2種重要金屬離子[29]，該研究萬(wàn)壽菊促進(jìn)了厚孢輪枝菌對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)防治效果可能是萬(wàn)壽菊根系分泌物影響了煙株根系土壤中Cu2+和Mg2+所致，這一假設(shè)還需要進(jìn)一步研究。萬(wàn)壽菊根、莖、葉、花等對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)都具有一定的毒殺作用，不同部位效果不同， 在防治煙草根結(jié)線蟲(chóng)方面建議聯(lián)合厚孢輪枝菌使用，既能增產(chǎn)，又能提高根結(jié)線蟲(chóng)的防治效果，但在兩者之間如何更好地聯(lián)合使用（使用時(shí)間、間作密度、使用根或秸稈或葉或花）還需要進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] ABAD P，GOUZY J，AURY J M，et al.Genome sequence of the metazoan plantparasitic nematode Meloidogyne incognita[J].Nature biotechnology，2008，26（8）：909-915.

[2] OKA Y，KOLTAI H，BAREYAL M，et al.New strategies for the control of plantparasitic nematodes[J].Pest management science，2000，56（11）：983-988.

[3] 王泊理，陳翠錦，趙勇，等.厚孢輪枝菌防治煙草根結(jié)線蟲(chóng)田間試驗(yàn)[J].農(nóng)村經(jīng)濟(jì)與科技，2015（8）：51-52.

[4] 張喆.云南煙草根結(jié)線蟲(chóng)的種類(lèi)鑒定[D].廣州：仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院，2016：3.

[5] 商桑.穿刺巴斯德芽菌Ppqh-3的分離、擴(kuò)繁及其對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的防效研究[D].?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2014.

[6] 閆芳芳，曾慶賓，官宇，等.豬屎豆與淡紫擬青霉聯(lián)合防治煙草根結(jié)線蟲(chóng)病的效果評(píng)價(jià)[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2017，34（9）：136-140.

[7] 金娜，劉倩，簡(jiǎn)恒.植物寄生線蟲(chóng)生物防治研究新進(jìn)展[J].中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2015，31（5）：789-800.

[8] 閆芳芳，曾慶賓，陳壽明，等.孔雀草與淡紫擬青霉協(xié)同作用防治煙草根結(jié)線蟲(chóng)效果[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（30）：87-89.

[9] 徐漢虹.殺蟲(chóng)植物與植物性殺蟲(chóng)劑[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001：333-334.

[10] 許華，宋曉艷，蔣夢(mèng)嬌.萬(wàn)壽菊秸稈的殺線作用及其對(duì)黃瓜植株生長(zhǎng)的影響[J].北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012，48（2）：164-168.

[11] 張鐵耀，李衍素，郭允娜，等.萬(wàn)壽菊間作密度對(duì)黃瓜南方根結(jié)線蟲(chóng)防效和黃瓜生長(zhǎng)與產(chǎn)量的影響[J].中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2014，30（3）：348-354.

[12] 李曉飛，王云民，徐成龍，等.萬(wàn)壽菊對(duì)煙草根結(jié)線蟲(chóng)的殺線活性[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（19）：136-137.

[13] 祝明亮，張克勤，李天飛，等.煙草根際厚孢輪枝菌生態(tài)效應(yīng)研究[J].微生物學(xué)通報(bào)，2002，29（2）：4-8.

[14] 張克勤，劉杏忠，李天飛.食線蟲(chóng)菌物生物學(xué)[M].北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版，2000：162.

[15] 姜培增，李宏園，陳鐵保.淡紫擬青霉防治植物線蟲(chóng)研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2006，8（6）：38-41.

[16] 潘滄桑.淡紫擬青霉菌劑的研究開(kāi)發(fā)[J].精細(xì)與專(zhuān)用化學(xué)品，2003，11（6）：15-17.

[17] 陳淑鴻，高學(xué)彪.淡紫擬青霉MCWA18菌株對(duì)爪哇根結(jié)線蟲(chóng)卵孵化的影響[J].中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2000，16（2）：78-80.

[18] 楊樹(shù)軍，夏振遠(yuǎn)，李天飛，等.兩種生防菌劑對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵孵化的影響[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，23（3）：247-248.

[19] 孔垂旭.芽胞桿菌對(duì)厚垣普可尼亞菌ZK7線蟲(chóng)生防因子的促進(jìn)作用[D].昆明：云南大學(xué)，2014.

[20] 馬學(xué)民，閆保福.一種滅線蟲(chóng)天然植物生物復(fù)合營(yíng)養(yǎng)液及制備方法：CN 104845624 A[P].2015.

[21] 楊秀娟，何玉仙，陳慶河，等.淡紫擬青霉適生性及其與2種植物協(xié)同作用防治根結(jié)線蟲(chóng)[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005，34（3）：290-293.

[22] 宋輝，亞平，楊明文，等.煙草根結(jié)線蟲(chóng)病防治藥劑的田間篩選研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，26（6）：740-748.

[23] 唐啟義，馮明光.實(shí)用統(tǒng)計(jì)分析及其計(jì)算機(jī)處理平臺(tái)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1997：123-129.

[24] 祝明亮，張克勤.淡紫擬青霉IPC土壤抑菌作用影響因子分析[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006，28（6）：533-538.

[25] 劉佳斌，蘇煒，王金勝.萬(wàn)壽菊根部生物堿類(lèi)提取物抑菌活性成分的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（3）：746-747.

[26] 王憲青，劉妍妍，王秋月.萬(wàn)壽菊提取物的抑菌作用研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2008（10）：8-10.

[27] KERRY B R，GRUMP D H.Observation on fungal parasites of females and eggs of the cereal cyst-nematodes，Heterodera avenae，and other cyst nematodes [J].Nematological，2011，23：193-201.

[28] 汪來(lái)發(fā)，楊寶君，關(guān)文剛，等.淡紫擬青霉和厚壁輪枝霉防治南方根結(jié)線蟲(chóng)[J].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，16（2）：231-233.

[29] 王東昌，梁晨，趙洪海，等.Cu、Mg離子對(duì)淡紫擬青霉和厚垣輪枝菌生長(zhǎng)的影響[J].植物保護(hù)，2001，27（4）：30-32.