巴合提古麗·胡那畢亞

摘要：胚胎移植是將具有優(yōu)良遺傳性狀的早期胚胎從供體母牛體內(nèi)取出，移植到另一頭生理狀態(tài)相同的母牛子宮內(nèi)，使其繼續(xù)發(fā)育形成胎兒直到順利分娩的過程。胚胎移植涉及的技術(shù)環(huán)節(jié)較多，每一環(huán)節(jié)的工作都對胚胎移植的成功與否影響極大，需做好各環(huán)節(jié)的工作。

關(guān)鍵詞：肉牛；胚胎移植；受體牛；供體牛；超數(shù)排卵；同期發(fā)情；飼養(yǎng)管理

中圖分類號：S823. 3+6

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）08-0053-01

1 供、受體肉牛的選擇與飼養(yǎng)管理

供體牛選擇品種特征明顯，具有較高生產(chǎn)性能的母牛，其遺傳性狀要求穩(wěn)定，并且要系譜清楚。受體牛一般選擇當(dāng)?shù)氐狞S牛品種，應(yīng)選擇14—15月齡，體重在360 kg以上的育成?；蛘吣挲g在2.5～5歲的1—2胎的成年母牛。供、受體牛都要健康無病，繁殖性能良好，沒有流產(chǎn)史，發(fā)情周期正常，并且性器官的發(fā)育也要求正常。

供、受體母牛都要進(jìn)行科學(xué)的飼養(yǎng)管理，合理的飼喂，提供適宜的營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)是影響母牛繁殖能力的主要因素，所提供的飼料要求多樣且品質(zhì)優(yōu)良，青飼料、粗飼料、精飼料以及各種飼料添加都要搭配合理，以保證肉牛攝入充足的營養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)還要保證母牛攝入充足且清潔的飲水。

2 供體牛的超數(shù)排卵處理

胚胎移植需要對供體母牛進(jìn)行超數(shù)排卵處理，以獲得多枚胚胎，一般要求供體母牛的排卵數(shù)量要在10枚左右，如果排卵數(shù)量過多，會易起卵巢囊腫，并且排卵效果不穩(wěn)定，如果排卵過少則會降低胚胎移植的意義，還會造成胚胎難以采集。超數(shù)排卵主要使用的藥物有促卵泡素（ FSH）、氯前列烯醇（PG）或陰道栓（CIDR）等，超數(shù)排卵過程中在發(fā)情后的第9～13天，連續(xù)4天早晚肌注促卵泡素，中間間隔12 h，在注射后的第3天用氯前列烯醇處理?；蛘呖梢栽诠w牛發(fā)情期到來的前4天，即發(fā)情周期的第16天注射促性腺激素，然后在出現(xiàn)發(fā)情狀況的當(dāng)天注射絨毛膜促性腺激素。

3 受體牛同期發(fā)情技術(shù)

同期發(fā)情技術(shù)是胚胎移植的一個(gè)重要的環(huán)節(jié)，可為超數(shù)排卵的供體牛在同一時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)備足夠的用于移植的受體牛，通過與受體牛同期化處理可以使供、受體牛的生理狀態(tài)保持相同。在同期化處理時(shí)，發(fā)情時(shí)間與供體牛最好提前一天，并且受體牛的處理頭數(shù)一般為供體牛的5倍。常用的同期發(fā)情技術(shù)為前列腺法，可分為一次前列腺法和二次前列腺法，一次法是對處于發(fā)情周期第10天的受體牛一次肌注前列腺素2～4 mL，誘導(dǎo)其發(fā)情，發(fā)情后第7天再進(jìn)行移植。二次法是對在第一次肌注前列腺素后的11天再次肌注前列腺素2—4 mL，在發(fā)情后第7天移植。實(shí)際表明，注射二次法的效果要優(yōu)于注射一次法。

4 胚胎的采集與貯存

胚胎的采集在母牛發(fā)情配種后的第7天進(jìn)行，將發(fā)情當(dāng)天視為0天，實(shí)施沖胚，在沖胚前需要通過直腸法檢查卵巢黃體的個(gè)數(shù)，以判斷可沖出胚胎的個(gè)數(shù)，在沖胚前需要準(zhǔn)備好器械和沖胚液，所有的器械都要嚴(yán)格的消毒，沖胚液則要提前在35～37℃的水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。在操作時(shí)采用直腸把握法將沖卵管插入一側(cè)的子宮角的深部，注入沖卵液后將子宮角抬高，使沖卵液回流，并將其回收。一般一側(cè)的子宮角需要反復(fù)沖7次左右。沖胚結(jié)束后需要直接從沖管向子宮角內(nèi)灌注抗生素和氯前列烯醇。

采集的的胚胎需要進(jìn)行檢查，并對胚胎進(jìn)行鑒定和分級。首先要將胚胎回收，一般使用沉淀法，將回收液靜置20 min后將上清去除，吸到液面還有2—2.5 cm深時(shí)即可。胚胎的鑒定要在顯微鏡下觀察胚胎分裂與否、形態(tài)色調(diào)、均勻度、細(xì)胞的密度等情況，并將胚胎分為A、B、C、D4級。其中A級的胚胎形態(tài)完整、輪廓清晰，為球形，分裂球大小均勻，結(jié)構(gòu)緊湊，透明度適中，無細(xì)胞和液泡附著；B級輪廓清晰，色調(diào)及細(xì)胞密度良好，可見到一些附著的細(xì)胞和液泡；C級輪廓不清，色調(diào)發(fā)暗，結(jié)構(gòu)較松散，游離的細(xì)胞或液體較多，變性的細(xì)胞達(dá)30% - 50%；D級未受精卵、16細(xì)胞以下受精卵、有碎片的退化卵及變性細(xì)胞超過一半的胚胎。其中A、B、C級胚胎為可用胚胎，并且A、B級為可冷凍胚胎，C級胚胎只能用于鮮胚移植，D級胚胎為不可用胚胎。

一般采集的鮮胚需要進(jìn)行冷凍保存，以保持活力，可選擇常規(guī)冷凍法，將胚胎置于防凍液中平衡一段時(shí)間，然后裝管后以每分鐘降低0.3～0.5℃的速度降低至-7℃，植凍后溫度緩慢的降低至 35℃，平衡10 min后迅速置于液氮中保存。

5 胚胎的解凍與移植

胚胎移植可分為鮮胚移植和凍胚移植。凍胚在解凍后可直接移植，先從液氮中取出細(xì)管，置于空氣中10 s，然后再將其置于35℃溫水中10 s，將封口端剪去，裝入移植槍。輸胚采用直腸把握法，在輸胚前要考慮胚胎的發(fā)育情況和受體牛的發(fā)情時(shí)間，一般輸胚前需要確定受體牛處于發(fā)情周期的6～8天，并還要確定卵巢上有明顯的黃體存在，并且輸胚還要在有黃體一側(cè)的子宮角深處，操作的方法與人工授精相同。

胚胎移植后要注意觀察受、供體牛的健康情況以及發(fā)情情況，對于供體牛在下次發(fā)情時(shí)可正常配種，如果受體牛在胚胎移植后仍發(fā)情，則說明移植失敗，如果未表現(xiàn)出發(fā)情，則要觀察3～5個(gè)情期，并做好妊娠的診斷工作。