◎ 呂海鵬，王亞飛，許貝貝

（中檢集團(tuán)中原農(nóng)食產(chǎn)品檢測（河南）有限公司，河南 鄭州 450000）

隨著近年來環(huán)境污染的加劇，人們對于飲用水的要求不斷提高，包裝飲用水產(chǎn)業(yè)取得飛速發(fā)展[1]。但與此同時(shí)，國內(nèi)外關(guān)于包裝飲用水中檢出大腸菌群和銅綠假單胞菌的報(bào)道也逐漸增多，引起了諸多學(xué)者和消費(fèi)者的普遍關(guān)注。大腸菌群為一群在37 ℃條件下培養(yǎng)24 h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，且需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無芽孢桿菌的統(tǒng)稱，多存在于溫血動物糞便中，人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因[2]。因此，大腸菌群被國際上公認(rèn)為檢測各種水質(zhì)、醫(yī)藥及食品在衛(wèi)生學(xué)上安全性的指示菌[3]。銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是一類生長條件要求低、耐不良環(huán)境能力強(qiáng)、氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌，在空氣、土壤、水、人體皮膚、呼吸道和腸道等環(huán)境中有廣泛的分布，是一種常見的條件致病菌[4]。其具有易定植、易變異、耐藥機(jī)制復(fù)雜等特征，導(dǎo)致桶裝飲用水污染事件逐漸增多，甚至引起食物中毒[5]，國際食品法典委員會（Codex Alimentarius Commission，CAC）、國際食品微生物標(biāo)準(zhǔn)委員會（ICMSF）及我國國家標(biāo)準(zhǔn)均有對銅綠假單胞菌指標(biāo)的檢測[6]。

為了檢測某市市售包裝飲用水中微生物的污染情況，根據(jù)GB 19298-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 包裝飲用水》中微生物限量要求，對所有樣品進(jìn)行了大腸菌群和銅綠假單胞菌檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

BSC-1300ⅡA2型生物安全柜（蘇凈安泰）、DNP-9272 型恒溫生化培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、高壓蒸汽滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）、MFS-3A-250K 不銹鋼過濾系統(tǒng)（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）、臺式多功能紫外分析儀。

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂、煌綠乳糖膽鹽肉湯、無菌生理鹽水、假單胞菌瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基、乙酰胺肉湯、納氏試劑、金氏B培養(yǎng)基、綠膿菌素測定用培養(yǎng)基、氧化酶試紙、無菌微孔濾膜（直徑47 mm，孔徑0.45μm）（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

陽性對照菌銅綠假單胞菌（ATCC27853，ATCC）、大腸埃希氏菌（ATCC25922、廣東省食品微生物安全工程技術(shù)研究研發(fā)中心）。

1.2 樣品來源

檢測45份樣品全部來自該市在售的包裝飲用水，產(chǎn)品包裝規(guī)格為300 mL～1.5 L的瓶裝水樣品38批次，4.5 L～19 L的桶裝純凈水19批次，所有樣品均在保質(zhì)期內(nèi)。

1.3 檢測方法與依據(jù)

根據(jù)GB 19298-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 包裝飲用水》[7]中微生物限量要求，采用GB 4789.3-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》[8]第二法平板計(jì)數(shù)法和GB 8538-2016《飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》[9]分別對樣品進(jìn)行大腸菌群和銅綠假單胞菌的檢測，最后采用陽性菌株做質(zhì)控，參照GB 19298-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 包裝飲用水》進(jìn)行合格性評價(jià)，同時(shí)采用Excel數(shù)據(jù)處理軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，不合格率的顯著性比較用x2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不合格率

采用GB 4789.3-2016[8]平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行大腸菌群檢測，57批次樣品中有3批次樣品至少有1份樣品檢出大腸菌群，36 ℃條件下在結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板培養(yǎng)24 h后，出現(xiàn)紫紅色菌落且周圍有紅色膽鹽沉淀環(huán)，接種煌綠乳糖膽鹽肉湯48 h后產(chǎn)氣，判定為3批次為大腸菌群陽性。大腸菌群不合格率為5.26%。檢測結(jié)果如圖1所示。

采用GB 8538-2016[9]中銅綠假單胞菌檢測方法進(jìn)行檢測，57批次樣品中有12批次樣品至少有1份樣品中檢出銅綠假單胞菌，依據(jù)GB 8538-2016[9]對可疑菌落進(jìn)行生化鑒定，結(jié)合陽性菌株作為對照，判定為12批次樣品為銅綠假單胞菌陽性。銅綠假單胞菌不合格率為21.05%。檢測結(jié)果如圖1所示。

圖1 57批次包裝飲用水中微生物項(xiàng)目不合格率統(tǒng)計(jì)圖

2.2 不合格率分析

本實(shí)驗(yàn)所抽取的水樣有瓶裝飲用水和桶裝飲用水兩類，對兩類樣品的不合格率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，其中桶裝飲用水中銅綠假單胞菌的不合格率為52.63%，大腸菌群不合格率為15.79%；瓶裝飲用水銅綠假單胞菌不合格率為5.26%，大腸菌群檢出率為0，同時(shí)檢測出大腸菌群的3批次樣品中也檢出了銅綠假單胞菌，而瓶裝飲用水中未發(fā)現(xiàn)大腸菌群污染，檢測結(jié)果如圖2所示。同時(shí)對大腸菌群的不合格率進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明，不同包裝間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=6.35，P=0.012，P＜0.05）；對銅綠假單胞菌的檢出率進(jìn)行相關(guān)性分析結(jié)果表明，不同包裝間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=9.07，P=0.003，P＜0.05）。

圖2 桶裝飲用水和瓶裝飲用水微生物項(xiàng)目不合格率統(tǒng)計(jì)圖

3 結(jié)論

根據(jù)GB 19298-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 包裝飲用水》[7]中微生物限量要求，每批次樣品的5份平行樣品中，均不得檢出銅綠假單胞菌。本次抽檢的市售包裝飲用水樣品中合格率為78.95%，銅綠假單單胞菌檢出導(dǎo)致的不合格率達(dá)21.05%，這與前人報(bào)道結(jié)果接近[10]，說明目前該市包裝飲用水還存在致病菌污染的問題。目前，有報(bào)道稱銅綠假單胞菌屬于食源性和水源性致病菌，且銅綠假單胞菌的生長會對產(chǎn)品亞硝酸鹽含量等理化性狀造成影響，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失得以發(fā)生[11]。在國內(nèi)外許多國家和地區(qū)已經(jīng)將大腸菌群作為判斷食品中是否有糞便污染的重要指示菌，本研究中檢測出大腸菌群的3批次樣品中也檢出了銅綠假單胞菌，說明桶裝飲用水在生產(chǎn)過程中存在微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)；且3批次樣品均為都是小型生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的桶裝飲用水，可能是這些生產(chǎn)企業(yè)對生產(chǎn)過程中衛(wèi)生狀況未引起足夠的重視，導(dǎo)致出現(xiàn)了微生物污染狀況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析銅綠假單胞菌與大腸菌群檢驗(yàn)結(jié)果無顯著相關(guān)性，這與報(bào)道的研究結(jié)果過一致[12]，駱業(yè)巧研究結(jié)果表明飲用水中指示菌的檢出已相對獨(dú)立，與其他微生物是否檢出已無必然聯(lián)系，兩種微生物的引起污染的方式不同[10]，但該市在同一批次樣品中同時(shí)檢出兩種微生物，說明這些企業(yè)的生產(chǎn)過程中的消毒衛(wèi)生狀況堪憂。

桶裝飲用水的銅綠假單胞菌不合格率高于瓶裝飲用水，說明桶裝飲用水在生產(chǎn)過程中存在更高微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，瓶裝飲用水由于清洗消毒相對比較簡單，污染往往發(fā)生在灌裝環(huán)節(jié)[13]，然而從結(jié)果來看，該市生產(chǎn)企業(yè)已引起足夠重視。而小型的桶裝包裝飲用水生產(chǎn)企業(yè)往往消毒處理設(shè)施比較簡單，而且環(huán)境潮濕，對于微生物的繁殖十分有利，這就導(dǎo)致無法控制銅綠假單孢菌的繁殖生長。大桶清洗難度相對較大，多數(shù)生產(chǎn)企業(yè)采用未經(jīng)處理的水清洗車間和桶，這直接導(dǎo)致沖洗過程也可能造成微生物二次污染，引起更多包裝飲用水桶的污染[13-15]，這就導(dǎo)致檢測過程中同一批次中5份樣品均檢出銅綠假單胞菌。

本研究結(jié)果表明，該市市售包裝飲用水存在微生物污染安全隱患，尤其是銅綠假單胞菌。因此，生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中應(yīng)該嚴(yán)格把控質(zhì)量，應(yīng)提高安全衛(wèi)生意識，同時(shí)食品監(jiān)管部門應(yīng)在生產(chǎn)加工過程中加強(qiáng)監(jiān)督和衛(wèi)生培訓(xùn)工作，切實(shí)保障消費(fèi)者的身體健康。

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