譚 詩，李春莉，陳 霞，易四維△

(重慶市婦幼保健院：1.檢驗科；2.遺傳與生殖研究所 401147)

珠蛋白生成障礙性貧血是由于珠蛋白基因突變，使α鏈與非α鏈的合成不平衡，導(dǎo)致血紅蛋白(Hb)成分發(fā)生改變而引起的一類小細(xì)胞低色素性貧血[1]。廣東、廣西等地均為高發(fā)區(qū)，以α-、β-珠蛋白生成障礙性貧血最常見，而重慶地區(qū)由于地域遷徙的原因，其檢出率也較高，被相關(guān)部門定為高發(fā)省份[2-3]。眾所周知，重型珠蛋白生成障礙性貧血治療較困難，費用昂貴，盡管骨髓移植可治愈，但風(fēng)險大且難以廣泛開展，給家庭及社會帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。因珠蛋白生成障礙性貧血雖難治但可防，故提倡育齡夫婦把珠蛋白生成障礙性貧血作為孕前或產(chǎn)前常規(guī)檢測，確定高風(fēng)險對象，擴大優(yōu)生優(yōu)育，降低該疾病患兒的出生率，提高出生人口素質(zhì)。目前的篩查診斷方法主要有血常規(guī)、Hb電泳、基因檢測等，基因檢測費用昂貴、要求條件高。作為公共衛(wèi)生項目，應(yīng)綜合考慮經(jīng)濟水平、成本、效能、可操作性等，以選擇最適宜的產(chǎn)前篩查方案。因此，現(xiàn)探討血常規(guī)及Hb電泳聯(lián)合檢測，提高珠蛋白生成障礙性貧血產(chǎn)前篩查的檢出率。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年1月至2017年1月該院婦保、產(chǎn)科、遺傳生殖門診就診的育齡期夫婦，經(jīng)基因檢測確診珠蛋白生成障礙性貧血患者922例，年齡20～40歲，平均年齡(31.0±4.3)歲。

1.2方法

1.2.1血細(xì)胞分析 采用日本Sysmex XN全自動血細(xì)胞分析儀，檢測紅細(xì)胞平均體積(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白(MCH)、Hb、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)等參數(shù)，嚴(yán)格按照儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行標(biāo)本與質(zhì)控檢測，保證每批檢測質(zhì)控均在控，質(zhì)控物由四川邁克公司提供。MCV正常參考區(qū)間為82～100 fL；MCH為27～34 pg；Hb為男性：130～175 g/L、女性：115～150 g/L；RDW<14.6%。

1.2.2Hb電泳 儀器為法國Sebia公司的Capillarys 2全自動電泳儀，質(zhì)控物為Sebia公司原裝配套。診斷截斷值為HbA2<2.5%或>3.5%，HbF>2.0%或者存在異常Hb條帶(HbCS、HbH、HbBart′s)等。

1.2.3基因診斷 提取抗凝全血DNA進(jìn)行基因檢測。采用深圳亞能公司的試劑盒進(jìn)行α-和β-珠蛋白基因分析；使用跨越裂口聚合酶鏈反應(yīng)(Gap-PCR)檢測α-珠蛋白基因--SEA、-α3.7和-α4.23種常見缺失；應(yīng)用PCR結(jié)合反向斑點雜交法(RDB)檢測β-珠蛋白基因17個常見突變位點和α-珠蛋白基因αCS、αQS、αWS3種點突變類型。按照試劑盒說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

2 結(jié) 果

2.1基因檢測結(jié)果 922例患者α-珠蛋白生成障礙性貧血541例(58.7%)，β-珠蛋白生成障礙性貧血363例(39.4%)，α-和β-復(fù)合珠蛋白生成障礙性貧血18例(1.9%)。α-珠蛋白生成障礙性貧血患者標(biāo)準(zhǔn)型(--SEA) 221例，靜止型(-α3.7、-α4.2)278例，HbH 4例。β-珠蛋白生成障礙性貧血患者CD17(111/363)和CD41-42(99/363)2種基因突變最常見。見表1。

2.2血常規(guī)指標(biāo)的篩查結(jié)果 β-珠蛋白生成障礙性貧血患者M(jìn)CV、MCH、Hb最低，RDW最高。α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型患者M(jìn)CV為(84.49±4.85)fL，MCH為(27.22±1.83)pg，Hb為(132.64±17.89)g/L，RDW為(13.58±1.19)%，均在正常參考值范圍。見表2。

表1 α-珠蛋白生成障礙性貧血與β-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型

表2 血常規(guī)指標(biāo)的篩查結(jié)果

表3 Hb電泳的檢測結(jié)果

表4 各指標(biāo)單獨檢測的漏檢率結(jié)果

2.3Hb電泳的檢測結(jié)果 α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型患者HbA2為(2.51±0.24)%，屬于正常參考范圍；α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型患者HbA2為(2.31±0.22)%，僅稍低于正常參考范圍；β-珠蛋白生成障礙性貧血患者的Hb電泳結(jié)果顯示，HbA2達(dá)到(5.21±0.74)%，顯著高于α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型及輕型(P=0.000)。見表3。

2.4各指標(biāo)單獨檢測的漏檢率結(jié)果 MCV、MCH、Hb電泳單獨檢測對α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型患者的漏檢率較高，分別為66.55%、44.24%、61.87%，而對β-珠蛋白生成障礙性貧血患者的漏檢率為15.70%、16.25%、2.48%。見表4。

2.5各指標(biāo)聯(lián)合檢測的漏檢率結(jié)果 各指標(biāo)聯(lián)合檢測為任何1種出現(xiàn)陽性結(jié)果即判為陽性，MCH與Hb電泳聯(lián)合檢測對各型珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率最低，對α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型為27.34%、α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型為13.78%、β-珠蛋白生成障礙性貧血為0.28%。見表5。

表5 各指標(biāo)聯(lián)合檢測的漏檢率結(jié)果

3 討 論

珠蛋白生成障礙性貧血是全球最常見的單基因隱性遺傳病，已成為我國南方地區(qū)一個重大的公共衛(wèi)生問題，其中α-珠蛋白生成障礙性貧血是導(dǎo)致圍產(chǎn)兒病死和產(chǎn)科并發(fā)癥的原因之一[4-5]。目前在南方10省開展珠蛋白生成障礙性貧血產(chǎn)前預(yù)防控制項目，重慶則于2015年正式啟動該項目，重型珠蛋白生成障礙性貧血的產(chǎn)前篩查和早期干預(yù)是其主要內(nèi)容之一。

本研究結(jié)果表明，α-珠蛋白生成障礙性貧血占58.7%，β-珠蛋白生成障礙性貧血占39.4%，α-和β-復(fù)合珠蛋白生成障礙性貧血占1.9%。α-珠蛋白生成障礙性貧血的標(biāo)準(zhǔn)型(--SEA、-α3.7、-α4.2)所占比例依次處于前3位；β-珠蛋白生成障礙性貧血的(CD17、CD41-42)2種基因突變最多(見表1)，與杜偉等[3]研究的重慶9區(qū)12縣珠蛋白生成障礙性貧血基因分布基本一致。臨床分型顯示，α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型(-α3.7、-α4.2)所占比例最大，其次是輕型(包括--SEA、-α3.7/-α3.7、-α3.7/-α4.2)。

本研究結(jié)果顯示，α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型患者血常規(guī)各參數(shù)及Hb電泳結(jié)果均在正常參考值范圍，因此各指標(biāo)單獨檢測對該類患者的漏檢率較高。有研究建議，以血常規(guī)MCV、MCH作為珠蛋白生成障礙性貧血尤其是靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血的篩查手段時應(yīng)以一種平行實驗作為初篩，即2項指標(biāo)中任一項陽性則視為篩查陽性，該方法能提高篩查的靈敏度，降低漏檢率[6]。本研究結(jié)果也證實，靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血患者M(jìn)CV單獨檢測的漏檢率為66.55%，MCH為44.24%，而兩者聯(lián)合檢測的漏檢率降至39.21%。

本研究聯(lián)合檢測結(jié)果表明，血常規(guī)與Hb電泳聯(lián)合檢測后可不同程度地降低各型珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率。與單獨檢測比較，MCV與MCH聯(lián)合檢測除了能降低靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率外(P<0.05)，對其他型珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率并不顯著(P>0.05)。與MCV單獨檢測比較，MCV與HbA2聯(lián)合檢測后可降低α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型、β-珠蛋白生成障礙性貧血、α-和β-復(fù)合珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率；MCH與HbA2聯(lián)合檢測的漏檢率最低，對α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型為27.34%、α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型為13.78%，α-和β-復(fù)合珠蛋白生成障礙性貧血為5.56%、而β-珠蛋白生成障礙性貧血僅為0.28%，HbA2是β-珠蛋白生成障礙性貧血的良好檢出指標(biāo)[7]。因此，MCH與Hb電泳聯(lián)合檢測可用于珠蛋白生成障礙性貧血的產(chǎn)前篩查。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，MCH與Hb電泳聯(lián)合檢測盡管能顯著降低α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型及β-珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率，但對α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型的漏檢率并不明顯。根據(jù)遺傳規(guī)律，如果夫妻雙方均為α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型患者，則子代有1/4的概率為重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒。因此，提高α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型的檢出率至關(guān)重要，后續(xù)工作中還有待深入研究。

綜上所述，目前治療重型珠蛋白生成障礙性貧血費用昂貴且療效有限，預(yù)防和控制重癥珠蛋白生成障礙性貧血患兒出生顯得尤其重要。在高發(fā)地區(qū)加強育齡人群的知識普及與宣教，建立高效的篩查機制及完善的孕前咨詢、產(chǎn)前診斷是減少重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒出生最有效的措施。除了對珠蛋白生成障礙性貧血漏檢率的分析外，還需要進(jìn)一步探討各指標(biāo)聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度，尋找合適的篩查截斷值，提高產(chǎn)前篩查效率。

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