張清雯，陳 超，陳建國，劉 玲，趙亭亭，張慶文

( 1.上海海洋大學 水產(chǎn)與生命學院，上海 201306；2.中國水產(chǎn)科學研究院 黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點實驗室，山東 青島266071；3.中國水產(chǎn)科學研究院 黃海水產(chǎn)研究所，海洋漁業(yè)科學研究中心，山東 青島 266071 )

稀土元素為化學元素周期表中第Ⅲ族副族元素鈧、釔及原子序數(shù)從57到71的15種鑭系元素的合稱?？蓪㈣|到釔稱為輕稀土，釓到镥稱為重稀土。鑭是金屬性最活潑的稀土元素[1]。自20世紀70年代揭示了稀土元素的作用效果后，鑭等多種輕稀土元素就被廣泛應用于農(nóng)、畜牧及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。在農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄(2008)》中將稀土(鈰和鑭) 殼糖胺螯合鹽作為礦物元素用于畜禽、魚和蝦的飼料[2]。飼料里添加稀土元素,能促進畜、禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的生長, 提高飼料利用率等[3-4]。稀土屬低毒物質(zhì)，適量給動物添加稀土，有利于提高動物的身體素質(zhì)，增強免疫力[5]。但隨著稀土元素的廣泛應用, 必定導致大量的可溶性稀土進入水生態(tài)環(huán)境。因此研究稀土對水體的影響, 特別是對水生動植物的長期影響十分必要。目前稀土元素對哺乳類過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、脂質(zhì)過氧化物、丙二醛等多種抗氧化酶活性和相關物質(zhì)含量的影響研究較多，而對魚類的抗氧化酶及Na+/K+-ATP酶活性的研究卻罕見報道。

1 材料與方法

1.1 材料

氯化鑭(LaCl3分析純)購于國藥集團化學試劑有限公司，考馬斯亮蘭、超氧化物歧化酶、丙二醛、過氧化氫酶、Na+/K+-ATP酶測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

電子分析天平，臺式高速冷凍離心機，酶標儀，高速勻漿機等。

1.2 方法

試驗于2016年8—10月在中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所海洋漁業(yè)科學研究中心體積為200 L的塑料箱中進行，采用靜態(tài)水體接觸暴露法。根據(jù)文獻[7-8]并結合預試驗確定試驗質(zhì)量濃度分別為 0、0.1、2、5、10、20 mg/L和30 mg/L，每個質(zhì)量濃度設3個平行，每個平行放魚15尾。每日更換試驗用水50%，以使試驗期間鑭質(zhì)量濃度基本一致。試驗水溫17～26 ℃，充氣泵連續(xù)充氣，每日定時按體質(zhì)量的3%投喂，根據(jù)水溫、攝食情況適當調(diào)整，自然光照。在90 d的試驗期間，每5 d徹底換水、清洗一次。

試驗結束時，用100 mg/L的丁香酚輕微麻醉試驗魚，測量全長體質(zhì)量。分別從每個質(zhì)量濃度平行樣本中隨機抽取試驗魚各3 尾，擦干表面后取出肝、腎、鰓，用冰生理鹽水(0.86%) 清洗血液，濾紙吸干，迅速稱取適量放入液氮中速凍，-80 ℃暫存。將樣品置于-20 ℃、4 ℃逐漸解凍，稱取適量置于試管中，加入冰生理鹽水，使質(zhì)量體積比為1∶10 (mg/L)，用高速勻漿器勻漿，按照試劑盒說明制備上清液，在冰水浴條件下測定指標。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用平均值和標準差表示，使用SPSS 22.0 軟件進行單因素方差分析，用LSD法進行多重比較組間差異(P<0.05)，用Excel 2016作圖。

平均體質(zhì)量增長率/%=(m2-m1)/m1×100%

平均全長增長率/%=(L2-L1)/L1×100%

特定生長率/%·d-1=(lnm2-lnm1)/(t2-t1)×100%

式中，m1為初始體質(zhì)量；m2為終末體質(zhì)量；L1為試驗初始體長;L2為試驗終末體長；t為養(yǎng)殖天數(shù)。

2 結果與分析

2.1 不同質(zhì)量濃度鑭對幼魚生長的影響

2.2 鑭對條紋鋸肝抗氧化酶和Na+/K+-ATP酶活性的影響

表1 不同濃度鑭處理組條紋鋸幼魚的生長

注:右上角標不同英文字母的數(shù)據(jù)表示有顯著性差異(P<0.05).

圖1 不同質(zhì)量濃度鑭暴露90 d后條紋鋸肝抗氧化酶及Na+/K+-ATP酶的活性試驗組與對照組之間的差異顯著性，*：P<0.05，**：P<0.01，下同.

2.3 鑭對條紋鋸腎抗氧化酶和Na+/K+-ATP酶活性的影響

圖2 不同質(zhì)量濃度鑭暴露90 d后條紋鋸腎抗氧化酶及Na+/K+-ATP酶的活性

2.4 鑭對條紋鋸鰓抗氧化酶和Na+/K+-ATP酶活性的影響

鰓超氧化物歧化酶活性隨鑭質(zhì)量濃度的升高先升再降，在10 mg/L達最高值，是對照組的2.06倍，在鑭質(zhì)量濃度為20、30 mg/L時，極顯著降低(P<0.01)。鰓組織丙二醛含量隨鑭質(zhì)量濃度的升高，先升后降，在鑭質(zhì)量濃度為5、10 mg/L時，分別比對照組高42.8%和87.8%，差異極顯著(P<0.01)；在鑭質(zhì)量濃度為20 mg/L時，顯著高于對照組(P<0.05);在鑭質(zhì)量濃度為30 mg/L時，比對照組低34%，差異極顯著(P<0.05)。鰓過氧化氫酶活性隨鑭質(zhì)量濃度的升高而升高，在鑭質(zhì)量濃度為5、10 mg/L時，差異極顯著(P<0.01)，在鑭質(zhì)量濃度為10 mg/L時最高，是對照組的3.02倍。鰓組織中Na+/K+-ATP酶活性隨鑭質(zhì)量濃度的升高，先升后降，在鑭質(zhì)量濃度為0.1、2 mg/L時，分別是對照組的1.94倍和0.98倍，差異極顯著(P<0.01)(圖3)。

圖3 不同質(zhì)量濃度鑭暴露90 d后對條紋鋸鰓抗氧化酶及Na+/K+-ATP酶的活性影響

3 討 論

3.1 鑭對條紋鋸幼魚生長的影響

3.2 鑭對各組織抗氧化酶和Na+/K+-ATP酶活性的影響

魚類是低等脊椎動物，其免疫系統(tǒng)包括先天性非特異性的防御系統(tǒng)，以及獲得性的特異性的防御系統(tǒng)。與哺乳動物不同，魚類主要依靠非特異性免疫系統(tǒng)來抵抗病原的入侵，非特異性免疫機制是其抵抗病原的第一道屏障[13]。超氧化物歧化酶、過氧化氫酶都是組成抗氧化防御系統(tǒng)的重要酶類。是存在生物體內(nèi)非常重要的抗氧化防御性功能酶，均可以保護機體免受其傷害。丙二醛是脂質(zhì)過氧化物酶的降解產(chǎn)物,是反映機體氧化應激損傷的最具有代表性的指標之一。

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