文/崔晨光

（河北省石家莊市行唐縣畜牧工作總站）

當(dāng)前，隨著人民生活水平的日益提高，對乳制品的需求量不斷增加，促進(jìn)了奶牛養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模化的快速發(fā)展，生鮮乳及其制品已成為人們生活必不可少的食品之一。在奶牛養(yǎng)殖過程中，對奶牛疾病的治療離不開抗生素的使用，經(jīng)常被用來治療奶牛的各種感染性疾病，而抗生素在代謝過程中可殘留于生鮮乳中，如果人們飲用含抗生素殘留的生鮮乳及其制品，也就相當(dāng)于低劑量地攝入抗生素，從而破壞人體的正常機(jī)能，也易產(chǎn)生耐藥性等問題，不利于人體健康和今后疾病的治療。因此隨著人們生活質(zhì)量的提高和消費者食品安全意識的增強(qiáng)，在生鮮乳收購過程中，應(yīng)加強(qiáng)對生鮮乳中抗生素的檢測，將抗生素奶拒之門外。

河北省石家莊市行唐縣作為奶牛養(yǎng)殖大縣，基層單位在生鮮乳抗生素殘留快速檢測過程中最常用的為戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測試劑盒（Delvotest?），該試劑由荷蘭帝斯曼生產(chǎn)，是國際乳品聯(lián)合會推薦的最適合中國國情用于生鮮乳的唯一的廣譜檢測方法，可檢測到β-內(nèi)酰胺類、磺胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氯霉素等抗生素，其中對青霉素和磺胺類抗生素特別靈敏，是全球抗生素殘留仲裁的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其特點是靈敏度高、使用方便、結(jié)果可靠、經(jīng)濟(jì)有效、廣譜檢測。其原理是利用微生物嗜熱芽胞菌在64 ℃條件下培養(yǎng)2.5～3.0 h后會產(chǎn)酸，引起指示劑BCP（溴甲酚紫）變?yōu)辄S色，若牛生鮮乳中不含抗生素，培養(yǎng)后樣品呈黃色；如有抗生素，嗜熱芽胞菌生長受到抑制而無法產(chǎn)酸，樣品中指示劑將不變色，為藍(lán)紫色。本試驗將戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測試劑運用到生鮮乳抗生素殘留檢測中，以驗證其在青霉素G、磺胺嘧啶兩種抗生素的檢測效果及靈敏度。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測試劑“Delvotest?”：由北京優(yōu)尼賽斯科技有限公司提供。對于青霉素G檢出限為1～2 ppb；對于磺胺類藥物檢出限為25～100 ppb。

三元純牛奶250 mL/盒，奶罐生鮮乳200 mL。

1.2 試驗設(shè)備

K30電熱恒溫孵育器1 臺，20～200 μL微量移液器1 把。

1.3 試驗方法

先用裁紙刀或剪子將鋁箔沿分割線切開，取出所用試劑微孔，但不要破壞剩余試劑的鋁箔，以防培養(yǎng)基變干。用微量移液器將100 μL牛奶樣品注入微孔內(nèi)，每吸取一個奶樣更換一個干凈的吸頭，避免污染。用封口膜將微孔密封，放入已預(yù)熱至64 ℃的恒溫孵育器中培養(yǎng)，3 h后取出觀察顏色變化，也可按照對照組變黃為試驗終止時間，如果底部2/3的固體介質(zhì)是黃色，則為陰性；若底部2/3的固體介質(zhì)是紫色，則為陽性。

2 樣品制備

本試驗主要采用青霉素G、磺胺嘧啶兩種抗生素，將其配制成不同梯度溶液，添加到樣品中進(jìn)行檢測檢測。

2.1 空白對照

三元純牛奶做空白對照，冰箱放置，備用。

2.2 添加抗生素的生鮮乳樣品制備

在奶罐生鮮乳中添加青霉素G的濃度分別為1、2、3、4 ppb。添加磺胺嘧啶的濃度分別為 20、25、50、100、125 ppb。每個濃度做2個平行組，進(jìn)行抗生素檢測，防止結(jié)果出現(xiàn)偏差。

3 檢測結(jié)果

3.1 試劑盒判定檢測結(jié)果

用戴爾沃廣譜抗生素檢測試劑盒判定檢測結(jié)果對照圖（圖1）。若生鮮乳樣品中含有抗生素為陽性，試劑顯示為藍(lán)紫色，紫色越深說明抗生素含量越高。若生鮮乳樣品中不含抗生素為陰性，試劑顯示為黃色。

圖1 戴爾沃廣譜抗生素檢測試劑盒判定檢測結(jié)果對照圖

3.2 試驗檢測結(jié)果

試驗檢測結(jié)果情況見表1。結(jié)果顯示，三元純牛奶作為對照樣品，檢測結(jié)果為陰性，奶罐生鮮乳檢測結(jié)果為陰性，說明隨機(jī)抽取的奶罐生鮮乳是合格的，是陰性樣品，在奶罐生鮮乳添加了不同濃度的青霉素G和磺胺嘧啶后，檢測的結(jié)果均為陽性。

3.3 青霉素G 檢測結(jié)果

青霉素G 檢測結(jié)果如圖2所示。結(jié)果顯示，青霉素G濃度在1 ppb時，戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測試劑盒即可檢出。

3.4 磺胺嘧啶檢測結(jié)果

磺胺嘧啶檢測結(jié)果如圖3所示。結(jié)果顯示，戴爾沃檢測試劑盒對磺胺類藥物十分敏感，在20 ppb時即可檢出。

圖2 青霉素G 檢測結(jié)果

圖3 磺胺嘧啶檢測結(jié)果

4 小結(jié)

用戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測試劑盒測定生鮮乳中抗生素的殘留，優(yōu)點為：（1）該方法靈敏度高，結(jié)果可靠，對于青霉素G檢出限為1 ppb，磺胺類藥物檢出限為20 ppb，完全能夠達(dá)到要求；（2）廣譜抗生素檢測性強(qiáng)，可檢測β-內(nèi)酰胺類、磺胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氯霉素等抗生素；（3）使用方便，只需嚴(yán)格按照規(guī)定的方法進(jìn)行操作，即能獲得理想的效果，同時不要求檢測人員具備較高的專業(yè)知識，無需對樣品進(jìn)行任何處理；（4）樣品需要量少，只需100 μL即可測定，無需太復(fù)雜的檢測設(shè)備；（5）經(jīng)濟(jì)便宜，與市售其它抗生素檢測試劑條相比（市售進(jìn)口β-內(nèi)酰胺類抗生素快速檢測試劑每條檢測一個樣品約20 元，國產(chǎn)約為10 元，磺胺類藥物殘留檢測試劑盒國產(chǎn)約為8元），檢測價格相對合理，易被廣大養(yǎng)殖者所接受；缺點是相對于其它抗生素檢測試劑盒檢測（檢測時間約為8 min），培養(yǎng)時間較長，約需3 h。

5 注意事項

5.1 由于戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測試劑盒對于抗菌物質(zhì)極其敏感（如抗生素、磺胺類藥物以及其它消毒劑、清洗劑等），因此應(yīng)在檢測過程中避免與該類物質(zhì)接觸，在開始檢測前應(yīng)徹底清洗雙手，在干凈的臺面進(jìn)行檢測；否則容易出現(xiàn)假陽性，影響檢測結(jié)果。

5.2 本試劑檢測時使用的是恒溫培養(yǎng)設(shè)備，推薦使用干式恒溫孵育器，該機(jī)器恒溫，相對于其它恒溫設(shè)備，不會出現(xiàn)過多的溫度波動，在無條件的情況下可使用電熱恒溫水浴鍋或電熱恒溫培養(yǎng)箱，但應(yīng)注意在使用電熱恒溫水浴鍋時，在樣品加好后，使用封口膜將微孔密封，最好裝進(jìn)自封口塑料袋中封好口，放進(jìn)水浴鍋中，防止水淹沒試劑，造成無效檢測；電熱恒溫培養(yǎng)箱因為開關(guān)箱門易造成溫度大幅變動，因此可適當(dāng)增加培養(yǎng)時間，不局限于3 h，可按照陰性樣品變成黃色的時間為終止試驗的時間。

5.3 在試驗過程中一定要加陰性和陽性樣品作為對照，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。C