譚瑾，沈詠梅，劉錦，雍妍，劉彬，胡野，張鑫

桑姜系列產(chǎn)品配方源于中醫(yī)藥傳統(tǒng)理論組方，以桑菊飲為基礎(chǔ)方加減而成。由桑葉、干姜、菊花、連翹、蘇葉、苦杏仁六味中藥材組成，全方溫清并用，不寒不熱，性味平和，為平散表邪、協(xié)調(diào)寒熱之劑，是一種兼治風(fēng)寒風(fēng)熱兩種不同感冒的配方[1]。桑姜系列產(chǎn)品包括：桑姜感冒膠囊（國藥準(zhǔn)字Z20050067）、桑姜感冒片（國藥準(zhǔn)字Z14020935、Z19983141）、桑姜顆粒（食品）共3個產(chǎn)品。原工藝存在的缺陷：(1) 非有效成分不能被最大限度的除去，濃縮率不夠高；(2) 提取液中除有效成分外，往往雜質(zhì)較多，給精制帶來不利；(3) 收膏量較大，不便于下一步制劑的問題。因此為了提高產(chǎn)品質(zhì)量，本公司利用現(xiàn)代技術(shù)對桑姜浸膏的提取分離工藝改進進行立項研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高速離心機（湖南凱達科學(xué)儀器有限公司TG22B型臺式）、管式離心機（遼陽晟峰制藥機械有限公司GQ-105型）、超濾系統(tǒng)（南京凱米科技有限公司KOCH 10T/h）、電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器BSA223S-CW）、電子天平（成都特斯特儀器有限公司BC1001），高效液相色譜儀（安捷倫Agilent 1100）。

1.2 試藥

桑葉、干姜、菊花、紫蘇葉、連翹、苦杏仁6味藥材購于綿陽好醫(yī)生飲片有限公司。連翹苷對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號：110821－200711）、乙晴（色譜純）、水為自制超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 高速離心分離參數(shù)的確定

按原工藝取桑葉150 g，菊花120 g，紫蘇葉160 g、連翹160 g、苦杏仁160 g、干姜100 g凈藥材置于不銹鋼中，加入5倍量純化水煎煮1.5小時，200目篩網(wǎng)過濾；再加5倍量純化水煎煮1小時，200目篩網(wǎng)過濾；再加4倍量純化水煎煮1小時，200目篩網(wǎng)過濾。合并以上過濾后的水煎液，分別取10個1000 mL樣品，編號A－J。精密量取A樣品50 mL，精密稱取其重量；B～J樣品分別采用不同轉(zhuǎn)速進行離心，離心后的樣品分別精密量取50 mL后稱取其重量，重復(fù)五次精密稱量藥液重量。為對比高速離心分離是否對有效成分有影響，采用藥典中桑姜感冒片的標(biāo)識成分連翹苷作對比，按《中國藥典》（2015年版）采用HPLC法測定A～J連翹苷的含量。

表1 離心轉(zhuǎn)速分離效果對比表

根據(jù)以上試驗可以看出，采用高速離心分離確能分理處水煎液中固體雜質(zhì)，且對有效成分無明顯影響，在離心速度達到18000 rad﹒min-1的條件下基本能分離完固體雜質(zhì)。因工業(yè)型管式離心機轉(zhuǎn)速最大為16000 rad﹒min-1，且通過上表可看出該轉(zhuǎn)速條件下分析效率極為接近18000 rad﹒min-1等，實驗最終確定離心轉(zhuǎn)速為16000 rad﹒min-1。

2.2 連翹苷含量測定

按照《中國藥典》2015年版一部桑姜感冒片連翹苷的含量測定方法。

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱AgilentTechnologies ZORBAXExtend-C184.6×250 mm，5 μm。流動相：乙腈-水(25∶75V/V)。檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL﹒min-1；柱溫30 ℃。

2.2.2 溶液制備 對照品溶液的制備，精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12小時以上的連翹苷對照品適量，加甲醇制成0.10 mg﹒mL-1的對照品貯備液；再精密量取對照品貯備液適量，加甲醇制成0.05 mg﹒mL-1的對照品溶液，即得。

供試品溶液的制備，精密量取樣品各1 mL，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用三氯甲烷振搖提取5次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，回收至干。殘渣用50%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，離心，取上清液，或濾過，取續(xù)濾液，即得。

分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上有相同保留時間的色譜峰，按外標(biāo)法計算其含量(n=5)。

2.3 超濾參數(shù)的確定

按處方放大提取，收得約15000 L水煎液，16000 rad﹒min-1離心分離，將離心后的液體精密量取，分成若干份，每份500 L，分別采用1萬、3萬、5萬、10萬、20萬分子量的超濾膜，以超濾后的藥液每10 L中可溶性固形物重量及連翹苷含量作為指標(biāo)成分，優(yōu)選超濾膜。

表2 超濾分子膜參數(shù)的確定（n=5）

與水煎液中連翹苷含量（43.2 μg﹒mL-1）比較在不影響有效成分含量的前提下，優(yōu)選10萬分子量的超濾膜。在此基礎(chǔ)上，優(yōu)選超濾溫度，分別在20℃，30 ℃，40 ℃，50 ℃、60 ℃條件下進行試驗。

表3 超濾溫度參數(shù)的確定（n=5）

采用10萬分子量超濾膜，考察提取液溫度與超濾膜滲透通量的關(guān)系，做3批平行試驗取平均值，結(jié)果見圖1。

圖1 提取液溫度與超濾膜滲透通量的關(guān)系

2.4 驗證實驗

按高速離心轉(zhuǎn)速16000 rad﹒min-1，超濾膜分子量為10萬分子量，超濾溫度為50 ℃，各進行2次驗證試驗，結(jié)果見表4。

由表4結(jié)果可知，優(yōu)選工所得制劑的有效成分含量不變，含水量幾乎無差異，崩解時間縮短，吸濕性降低，制劑穩(wěn)定性好。 因此確定的高速離心參數(shù)為16000 rad﹒min-1、超濾膜分子量為10萬分子量，超濾溫度為50 ℃。

表4 驗證試驗結(jié)果（n=2）

3 討論

桑姜系列浸膏的提取分離工藝主要為提取和分離兩部分。經(jīng)文獻查詢適用于中藥浸膏制備的提取方法/技術(shù)有3種，分離方法/技術(shù)有5種[2]。通過對8種提取和分離精制方法/技術(shù)在中藥制劑中做了應(yīng)用調(diào)研[3～5]和基礎(chǔ)性試驗篩選，同時又保證藥用浸膏符合相關(guān)政策（《已上市中藥變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則》），確定聯(lián)用高速離心技術(shù)和超濾技術(shù)來優(yōu)化浸膏工藝。

選取對影響高速離心和超濾技術(shù)影響較大的離心轉(zhuǎn)速、超濾膜分子量、超濾溫度為考察因素，以藥液重量、連翹苷含量和制劑穩(wěn)定性為評價指標(biāo)，由于工業(yè)生產(chǎn)泵壓有安全性和普適性要求，本研究采用常用壓力0.05 MPa。首先對離心轉(zhuǎn)速參數(shù)進行試驗確定，再用離心后的藥液確定超濾分子量和溫度的參數(shù)。

高速離心技術(shù)能最大限度地保留有效成分，除去懸浮雜質(zhì)，且無熱處理過程，生產(chǎn)周期短。超濾法具有分離效率高，分離過程中無相變化，能耗低，可在常溫下操作等特點，尤其適合熱敏性物質(zhì)的分離。采用高速離心法與超濾法結(jié)合，僅影響成型工藝，不屬于重大變更。本研究主要是為了提高桑姜系列產(chǎn)品的質(zhì)量，改善桑姜浸膏提取分離的制備工藝，最大限度的去除雜質(zhì)，降低收膏量。工藝優(yōu)化后，桑姜浸膏收膏量降低。制得的桑姜感冒制劑（膠囊/片）的崩解時間大幅縮短、產(chǎn)品吸濕性降低，大大優(yōu)于原有工藝，不僅提高了藥物吸收速度和生物利用度，也更有利于保證制劑的穩(wěn)定。

[1]樊志文.桑姜感冒片治療感冒312例.中國民間療法.2005,13(6): 26.

[2]陳秦娥,梁金龍.中藥提取、分離與純化新技術(shù)進展.醫(yī)藥工程設(shè)計[J].2012, 33(4): 65.

[3]楊霞,范圣此.中藥提取方法研究進展.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥[J].2012, 8(8): 194.

[4]焦士龍.微波提取中藥有效成分實驗研究.天津大學(xué)[D].2006.

[5]董立麗.中藥提取分離新技術(shù)的進展.海峽藥學(xué)[J].2009,12(21): 107.