黃運(yùn)安，許 龍,2，楊博文，朱秋勁,3,*

（1.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510640；3.貴州省農(nóng)畜產(chǎn)品貯藏與加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025）

α-硫辛酸（α-lipoic acid，ALA）是一種來源于原核和真核細(xì)胞的含硫輔因子[1]，其化學(xué)名稱為1,2-二硫戊環(huán)-3-戊酸，主要來源于動(dòng)物肝臟組織及菠菜等植物，首次于1950年由美國(guó)Reed等[2]從豬肝中分離得到。ALA和其還原態(tài)二氫硫辛酸（dihydrolipoic acid，DHLA）獨(dú)特的抗氧化能力成為了醫(yī)藥、食品領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[3-4]。通常抗氧化物質(zhì)是在其還原態(tài)具有抗氧化特性，而ALA與其還原態(tài)DHLA均具有抗氧化性，根據(jù)Packer等[5]對(duì)抗氧化物質(zhì)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，ALA和DHLA滿足理想抗氧化物質(zhì)的所有條件，因此被稱為“萬能抗氧化劑”[6]。另外，ALA的相對(duì)分子質(zhì)量較低，其分子質(zhì)量比水溶性抗壞血酸大并遠(yuǎn)小于脂溶性生育酚，并且由于具有羧基末端以及比抗壞血酸更多的碳原子（ALA與DHLA結(jié)構(gòu)如圖1所示），這使其兼具水溶性和脂溶性[7]。

圖1 ALA（a）和DHLA（b）的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig. 1 Chemical structure of ALA (a) and DHLA (b)

目前，α-硫辛酸已在醫(yī)藥方面廣泛用于治療糖尿病及相關(guān)并發(fā)癥[8]，在化妝品方面用于修復(fù)肌膚、抗皺延緩衰老[9]，在保健食品方面常用于預(yù)防自由基引起的各種急慢性癥狀，并可作為VC、VE等維生素補(bǔ)充劑[10]，但由于化學(xué)合成硫辛酸的某些未知的安全性限制了其在食品領(lǐng)域中的應(yīng)用[11]，因此研究天然硫辛酸純化、分離技術(shù)對(duì)其在食品領(lǐng)域的應(yīng)用十分重要。分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymers，MIPs）是一種可以應(yīng)用于不同領(lǐng)域的具有吸附、釋放或特異性識(shí)別的高分子聚合物，具有選擇性好、穩(wěn)定性好和制備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)[12]。MIPs在分析領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，且作為分離、純化材料被認(rèn)為是生物大分子的優(yōu)越替代材料[13-15]。為了快速篩選MIPs印跡比例，提高印跡識(shí)別能力，從分子水平上探討MIPs印記識(shí)別原理，計(jì)算機(jī)模擬廣泛應(yīng)用于探究MIPs體系[16-17]。本研究應(yīng)用密度泛函理論（density functional theory，DFT）在B3LYP水平下利用Gaussain軟件模擬分析ALA和N-異丙基丙烯酰胺（N-isopropyl acrylamide，NIPAM）自組裝體系，并以ALA為印跡分子、NIPAM為功能單體制備了硫辛酸分子印跡聚合物（ALA-MIPs），為ALA-MIPs在天然ALA的富集和分離應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

ALA（純度99%）、DHLA（純度98%）、3-苯基丁酸（3-phenylbutyric acid，PBA；純度93%）、NIPAM（純度97%）、乙二醇二甲基丙烯酸酯（ethylene glycol dimethacrylate，EGDMA；純度97%） 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；偶氮二異丁腈（azodiisobutyronitrile，AIBN；純度99%） 阿拉丁試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ZORBAX SB-C18色譜柱 美國(guó)安捷倫科技有限公司；P230Ⅱ高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀（配有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和EC2006 V1.70色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)） 大連依利特分析儀器有限公司；SPECTRA Max 190酶標(biāo)儀 美谷分子儀器有限公司；730.009-QG石英微孔板 德國(guó)Hellma公司；S-3400N掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM） 日本日立公司；Frontier傅里葉變換紅外光譜（Fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)T-IR）儀 美國(guó)PerkinElmer公司；LRH生化培養(yǎng)箱上海一恒科技有限公司；TG16-WS高速離心機(jī) 上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；數(shù)顯恒溫水浴振蕩器 金壇市良友儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 理論計(jì)算方法

應(yīng)用DFT在Gaussian View 5.08軟件中構(gòu)建分子模型，在B3LYP水平下，應(yīng)用6-31G+（d）基組分別對(duì)ALA和NIPAM進(jìn)行幾何構(gòu)型優(yōu)化和分子靜電勢(shì)（molecular electrostatic potential，MEP）計(jì)算，應(yīng)用6-311++（d，p）基組進(jìn)行復(fù)合物結(jié)構(gòu)優(yōu)化計(jì)算。本研究所有計(jì)算均在貴州大學(xué)云計(jì)算平臺(tái)上完成。

1.3.2 反應(yīng)位點(diǎn)預(yù)測(cè)

對(duì)復(fù)合物進(jìn)行幾何構(gòu)型優(yōu)化，在同樣水平下對(duì)模板分子（ALA）和功能單體（NIPAM）進(jìn)行頻率計(jì)算，得到?jīng)]有虛頻的幾何構(gòu)型，采用Cube＝Potential關(guān)鍵詞計(jì)算ALA與NIPAM的分子靜電勢(shì)，并預(yù)測(cè)其活性位點(diǎn)。

1.3.3 結(jié)合能的計(jì)算

在B3LYP水平下應(yīng)用6-311++（d，p）基組，首先對(duì)ALA、NIPAM分子構(gòu)型優(yōu)化和能量進(jìn)行計(jì)算，然后對(duì)復(fù)合物的構(gòu)型優(yōu)化和能量進(jìn)行計(jì)算，最后復(fù)合物的結(jié)合能通過式（1）計(jì)算，基組迭加誤差采用Counterpoise方法消除。

式中：?E為Counterpoise方法校正后的結(jié)合能/（kJ/mol）；E（complex）為復(fù)合物的總能量/（kJ/mol）；E（ALA）為模板分子ALA的能量/（kJ/mol）；ΣE（NIPAM）為所有單體NIPAM的能量之和/（kJ/mol）。

1.3.4 MIPs的制備

以NIPAM為功能單體，ALA為模板分子，EGDMA為交聯(lián)劑，AIBN為引發(fā)劑，ALA與NIPAM的物質(zhì)的量之比為1∶2（下同），交聯(lián)劑與致孔劑參考Yu Cong等[18]利用酰胺基合成MIPs研究中的用量，具體步驟如下：稱取0.520 g ALA、0.570 g NIPAM、0.100 g AIBN于25 mL三角瓶中，加15 mL乙腈溶解，加10 g EGDMA混勻，超聲脫泡5 min，向三角瓶充氮?dú)? min，反復(fù)超聲-浸氮2 次后加塞密封，置于4 ℃生化培養(yǎng)箱中，在365 nm紫外光照射下聚合48 h得到的較硬固體，研磨后過200 目（75 μm）篩，用甲醇-乙酸（9∶1，V/V，下同）洗脫液清洗3 次以除去未反應(yīng)的單體及其余雜質(zhì)，然后放入盛有甲醇-乙酸洗脫液的索氏提取器中洗脫模板分子，直到洗脫液中ALA的吸光度小于0.005，將洗脫模板分子后的聚合物于50 ℃干燥24 h后得到ALA-MIPs。非印跡聚合物（non imprinted polymers，NIPs）的制備方法相同，只是不添加模板分子ALA。

1.3.5 SEM觀察

對(duì)ALA-MIPs和NIPs樣品用雙面膠帶法均勻固定在樣品臺(tái)上，用洗耳球輕輕吹掉沒有粘牢的樣品，然后進(jìn)行噴金固定，利用S-3400N SEM對(duì)其形貌進(jìn)行觀察。

1.3.6 FT-IR實(shí)驗(yàn)

采用KBr壓片法：分別將ALA、NIPAM和ALA-MIPs研磨成粉末，50 ℃烘干至質(zhì)量恒定，將樣品與KBr按1∶100（m/m）混合后放在模具中，將模具放在壓片機(jī)中30 GP壓力下保持30 s取出，將制作好的KBr晶片放在紅外檢測(cè)儀上檢測(cè)。

1.3.7 HPLC條件

色譜柱ZORBAX SB-C18（250 mm×4.60 mm，5 μm，pH 1.0～8.0），檢測(cè)器為紫外-可見光檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)215 nm，流動(dòng)相為乙腈-水（用磷酸調(diào)pH 3.5，體積比50∶50），流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。

1.3.8 等溫吸附實(shí)驗(yàn)

分別稱取20.0 mg的ALA-MIPs與NIPs置于25 mL的錐形瓶中，分別加入5 mL不同質(zhì)量濃度（20、40、60、80、100、120、140 mg/L）ALA乙腈溶液，密封后，將其置于恒溫振蕩器中25 ℃、70 r/min振蕩12 h，然后10 000 r/min離心10 min，0.22 μm有機(jī)膜過濾后用HPLC測(cè)定平衡液中ALA濃度。根據(jù)式（2）計(jì)算ALA-MIPs的單位吸附量Q，并進(jìn)行Scatchard作圖分析。

式中：Q為ALA-MIPs的單位吸附量/（mg/g）；ρ0為ALA的初始質(zhì)量濃度/（g/L）；ρ為ALA吸附殘液的質(zhì)量濃度/（g/L）；V為ALA溶液的體積/mL；m為ALA-MIPs質(zhì)量/g。

1.3.9 吸附特異性實(shí)驗(yàn)

分別稱取20 mg的ALA-MIPs與NIPs置于25 mL的錐形瓶中，分別加入5 mL ALA、DHLA、PBA乙腈溶液，密封后，將其置于恒溫振蕩器中25 ℃、70 r/min條件下振蕩12 h，然后10 000 r/min離心10 min，0.22 μm有機(jī)膜過濾后用HPLC法測(cè)定平衡液中ALA的質(zhì)量濃度。根據(jù)式（3）計(jì)算印跡因子α值。

式中：QALA-MIPs、QNIPs分別為ALA-MIPs和NIPs對(duì)ALA的吸附量/（mg/g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 以NIPAM為功能單體的ALA-MIPs構(gòu)建

在MIPs制備中，依據(jù)功能單體和模板分子間形成加成物的性質(zhì)，分子印跡法分為共價(jià)印跡法與非共價(jià)印跡法[19]。非共價(jià)印跡法反應(yīng)條件溫和、模板分子選擇范圍廣，且操作簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)，因此成為了分子印跡使用最普遍的方法[20]。由于羧基（—COOH）可以作為氫鍵供體和受體與多種模板分子形成氫鍵作用，甲基丙烯酸（2-methylacrylic acid，MAA）成為了在非共價(jià)印跡法中最常用的功能單體[21]。為了減小非特異性結(jié)合和背景離子交互作用對(duì)MIPs的影響，非共價(jià)印跡法引入不可電離的功能單體，如酰胺。

表1 MAA、AAm和NIPAM的介電常數(shù)和偶極矩比較[27]Table 1 Dielectric constants and dipole moments of MAA,AAm and NIPAM[27]

從表1可以看出，丙烯酰胺（acrylamide，AAm）和NIPAM的介電常數(shù)與偶極矩明顯大于MAA，并根據(jù)Hunter[22]計(jì)算的酰胺的氫鍵受體值（β＝8.3）大于羧酸的氫鍵受體值（β＝5.3），這說明酰胺能比羧酸與模板分子形成更強(qiáng)的氫鍵。自從Yu Cong等[23-24]首次使用了AAm作為非共價(jià)印跡氫鍵結(jié)合功能單體制備MIPs之后，AAm作為功能單體成功印跡了多種模板分子[25]，但是AAm不溶于多數(shù)有機(jī)溶劑，印跡需要選擇極性溶劑，而使用極性溶劑會(huì)減弱功能單體和模板分子間的氫鍵作用。

與AAm作為非共價(jià)印跡法功能單體相比，NIPAM是更好的選擇，因?yàn)橛H脂性的異丙基使得NIPAM溶于大多數(shù)非極性溶劑，并且二級(jí)酰胺是比一級(jí)酰胺更強(qiáng)的氫鍵受體，酰胺基的O或N原子均能與氫鍵供體形成氫鍵[26]，這表明以NIPAM為功能單體能提高M(jìn)IPs的識(shí)別特性。Nguyen等[25]的研究表明，與AAm和MAA作為功能單體相比，以NIPAM為功能單體制備的MIPs對(duì)模板分子具有更好的選擇性能，且能減少非特異性鍵合。因此選擇NIPAM作為實(shí)驗(yàn)制備ALA-MIPs的功能單體，ALA-MIPs的制備過程如圖2所示。

圖2 ALA-MIPs制備示意圖Fig. 2 Schematic representation of ALA-MIPs

2.2 模板分子與功能單體反應(yīng)位點(diǎn)預(yù)測(cè)

圖3 NIPAM（a）和ALA（b）的分子靜電勢(shì)圖Fig. 3 Molecular electrostatic potential map of NIPAM (a) and ALA (b)

在B3LYP水平下，采用6-31G+（d）基組模擬計(jì)算NIPAM與ALA的分子靜電勢(shì)，由圖3可知，NIPAM負(fù)電荷區(qū)域主要集中在羰基的O原子上，易與親電試劑的反應(yīng)失去電子；正電荷區(qū)域主要集中在與N原子相連的H原子上，易與親核試劑反應(yīng)得到電子。因此NIPAM活性位點(diǎn)主要為羰基的O原子和與N原子相連的H原子。同理，ALA中羧基O原子可以作為質(zhì)子受體而失去電子，羥基H原子可作為質(zhì)子給體而得到電子，即ALA活性位點(diǎn)主要為羧基O原子和羥基H原子。

2.3 模板分子與功能單體空間結(jié)構(gòu)優(yōu)化

在MIPs合成過程中，為了形成具較高特異識(shí)別性的聚合物，印跡分子與功能單體比例通常大于1，但過量的功能單體會(huì)使MIPs的非特異性吸附增大，選擇性降低[28]。

圖4 ALA與NIPAM不同比例復(fù)合物優(yōu)化構(gòu)型圖Fig. 4 Models of ALA-NIPAM complexes at different ratios

在B3LYP水平下，采用6-311++（d，p）基組計(jì)算ALA與NIPAM在不同比例下的復(fù)合物構(gòu)型及氫鍵形成見圖4，可以看出ALA結(jié)構(gòu)中羧基O原子與羥基H原子為反應(yīng)位點(diǎn)，ALA中羥基H原子作為電子受體與NIPAM中羧基形成氫鍵，ALA中羧基作為電子供體與NIPAM中胺基H原子形成氫鍵，這與分子靜電勢(shì)分析結(jié)果一致。氫鍵鍵長(zhǎng)因氫鍵強(qiáng)度而不同，由圖4可知，ALA與NIPAM在1∶1比例下分子間鍵長(zhǎng)分別為1.710 02 ?（O28…H26—O25）、2.294 17 ?（O24…H32—C31），在1∶2比例下分子間鍵長(zhǎng)分別為1.683 10 ?（O28…H26—O25）、2.064 22 ?（N48—H49…O24），與Needham[29]報(bào)道的各類氫鍵鍵長(zhǎng)相比，形成的復(fù)合物分子間鍵長(zhǎng)均在氫鍵鍵長(zhǎng)范圍內(nèi)，且屬于較強(qiáng)氫鍵。如表2所示，復(fù)合物比例1∶2時(shí)的結(jié)合能的絕對(duì)值比復(fù)合物物質(zhì)的量之比為1∶1和1∶3時(shí)要大，這是由于1∶2時(shí)形成的氫鍵數(shù)目飽和，此時(shí)結(jié)合能為-349.32 kJ/mol，這表明復(fù)合物比例1∶2時(shí)印跡分子與功能單體可望形成更穩(wěn)定的復(fù)合物，結(jié)合能的計(jì)算與復(fù)合物模型通過氫鍵預(yù)測(cè)復(fù)合物穩(wěn)定性結(jié)論一致。

表2 在B3LYP/6-311（d，p）水平下模擬計(jì)算的復(fù)合物結(jié)合能Table 2 Binding energies of complexes calculated at the B3LYP/6-311(d, p) level

表2 在B3LYP/6-311（d，p）水平下模擬計(jì)算的復(fù)合物結(jié)合能Table 2 Binding energies of complexes calculated at the B3LYP/6-311(d, p) level

注：—.無結(jié)合能項(xiàng)目。

校正后?E/（kJ/mol）ALA -3.308 8×106 — —NIPAM -9.591 0×105 — —ALA-NIPAM復(fù)合物（1∶1） -4.268 2×106 -240.30 -237.86 ALA-NIPAM復(fù)合物（1∶2） -5.227 4×106 -349.32 -345.86 ALA-NIPAM復(fù)合物（1∶3） -6.186 5×106 -312.12 -306.52分子 E/（kJ/mol） 校正前?E/（kJ/mol）

2.4 ALA-MIPs形貌分析

圖5 NIPs（a）和ALA-MIPs（b）的SEM照片F(xiàn)ig. 5 SEM images of NIPs (a) and ALA-MIPs (b)

MIPs的分散程度、粒徑大小及排列等表面形貌可以使用SEM觀察[30]，圖5為NIPs和ALA-MIPs的SEM照片，可以看出NIPs表面呈現(xiàn)不規(guī)則的、松散的塊狀，有較嚴(yán)重的團(tuán)聚現(xiàn)象；ALA-MIPs表面則呈現(xiàn)相對(duì)規(guī)則的多孔狀，可以看出其具有較多的三維空穴，這種三維空穴有利于底物與結(jié)合位點(diǎn)接觸，提高其對(duì)印跡分子的結(jié)合量。

2.5 ALA-MIPs紅外光譜分析

利用紅外光譜中紅外吸收帶的波長(zhǎng)的變化可以分析MIPs中印跡分子與功能單體結(jié)合過程中基團(tuán)的變化及結(jié)合位點(diǎn)的位置[31]。ALA結(jié)構(gòu)中特征吸收峰主要是1 690 cm-1處的C＝O伸縮振動(dòng)和3 000 cm-1左右的-OH伸縮振動(dòng)，其特征峰除此之外還有在2 700 cm-1左右由伸縮振動(dòng)和變形振動(dòng)的倍頻及組合頻引起的吸收峰以及920 cm-1處的彎曲振動(dòng)吸收峰；而NIPAM的特征峰主要是1 650 cm-1左右二級(jí)酰胺中C＝O伸縮振動(dòng)峰和3 350 cm-1左右N-H的彎曲振動(dòng)峰。

由圖6可以看出，ALA-MIPs中酰胺的1 650 cm-1處C＝O伸縮振動(dòng)和3 350 cm-1處N-H彎曲振動(dòng)明顯減弱，并且羧基中-OH的2 728 cm-1伸縮振動(dòng)峰幾乎被掩蓋，1 690 cm-1處羧酸C＝O伸縮振動(dòng)峰向高波數(shù)1 717 cm-1處移動(dòng)，這說明ALA羧基中-OH和NIPAM中酰胺的N-H的特征吸收光譜受到屏蔽，即制備得到的固體ALA-MIPs中ALA與NIPAM結(jié)合位點(diǎn)形成，結(jié)果與ALA和NIPAM自組裝體系理論分析一致。

圖6 ALA、NIPAM和ALA-MIPs的FT-IR譜圖Fig. 6 FT-IR spectra of ALA, NIPAM and ALA-MIPs

2.6 ALA-MIPs吸附性研究

2.6.1 等溫吸附性能

圖7 ALA-MIPs和NIPs的等溫吸附曲線Fig. 7 Adsorption isotherms of ALA-MIPs and NIPs

通過靜態(tài)平衡吸附法得到ALA在20～160 mg/L范圍內(nèi)的等溫吸附線如圖7所示，可以看出在ALA初始質(zhì)量濃度低于120 mg/L時(shí)，ALA-MIPs的等溫吸附曲線呈直線上升趨勢(shì)，對(duì)ALA的吸附量（Q）增加較快，之后ALA-MIPs對(duì)ALA的吸附量增加緩慢，這說明ALA-MIPs中對(duì)ALA的結(jié)合位點(diǎn)基本達(dá)到吸附飽和。而NIPs的等溫吸附曲線在ALA初始質(zhì)量濃度低于100 mg/L時(shí)，對(duì)ALA的吸附量增加較快，之后NIPs對(duì)ALA的吸附量趨近平衡，當(dāng)吸附量趨近平衡，NIPs的吸附容量比ALA-MIPs小。

在MIPs的吸附性能研究中經(jīng)常使用Scatchard模型（式（4））來評(píng)價(jià)MIPs對(duì)模板分子的結(jié)合特性[32]。

式中：Q為各濃度下的平衡吸附量/（mg/g）；Qmax為飽和吸附量/（mg/g）；ρ為ALA平衡質(zhì)量濃度/（g/L）；Kd為平衡解離常數(shù)/（mol/L）。

圖8 ALA-MIPs和NIPs對(duì)ALA的等溫吸附Scatchard分析圖Fig. 8 Scatchard plot analysis of the binding of ALA to ALA-MIPs and NIPs

Scatchard作圖法進(jìn)行分析，以Q/ρ對(duì)Q作圖（圖8），可以看出NIPs的吸附結(jié)合位點(diǎn)呈線性關(guān)系，可以用一條直線進(jìn)行較好的擬合，說明NIPs對(duì)ALA的結(jié)合只存在一類結(jié)合位點(diǎn)；而ALA-MIPs的吸附結(jié)合位點(diǎn)呈非線性關(guān)系的，可以由兩條直線進(jìn)行較好的擬合，這說明ALAMIPs中存在兩類不同的結(jié)合位點(diǎn)，即高親和力位點(diǎn)和低親和力位點(diǎn)，這是因?yàn)锳LA-MIPs中模板分子與功能單體的自組裝過程中存在兩類不同的結(jié)合方式，因此形成兩類不同親和力的結(jié)合位點(diǎn)[33]，這與理論計(jì)算得到模板分子與功能單體自組裝可以形成兩種不同比例的復(fù)合物的結(jié)論一致。分別從圖8中兩段線性部分?jǐn)M合方程的斜率和截距可以得出，ALA-MIPs的高親和力位點(diǎn)平衡解離常數(shù)和最大吸附量分別為6.969 7×10-5mol/L、12.145 mg/g；低親和力位點(diǎn)平衡解離常數(shù)和最大吸附量分別為1.558 5×10-5mol/L、104.06 mg/g。

2.6.2 吸附特異性分析

圖9 ALA-MIPs和NIPs對(duì)ALA及其類似物的飽和吸附量Fig. 9 Adsorption of ALA-MIPs and NIPs for ALA and analogues

如圖9所示，ALA-MIPs對(duì)模板ALA吸附量較高，而對(duì)DHLA、PBA的吸附量明顯較ALA的吸附量低，比NIPs的吸附量大，這主要是因?yàn)楸M管ALA、DHLA和PBA分子均含有能與功能單體酰胺基團(tuán)的氧原子或氫原子形成氫鍵的羧基，但由于MIPs印跡孔穴的空間位阻的存在，使得ALA結(jié)構(gòu)類似物不能像ALA一樣，與印跡孔穴中特定的空間結(jié)合位點(diǎn)形成較強(qiáng)的作用力，這表明ALA-MIPs對(duì)ALA的吸附具有特異選擇性。

MIPs的特異選擇性一般用印跡因子α表示[34]，α值越大說明特異性越強(qiáng)，印跡效果越好，根據(jù)式（2）計(jì)算得ALA、DHLA和PBA的α值分別為2.017、1.207和1.119。從α值也可以看出，實(shí)驗(yàn)制備的ALA-MIPs具有較好選擇性，在一定范圍內(nèi)可以對(duì)ALA選擇性吸附。

3 結(jié) 論

利用密度泛函理論在B3LYP水平下模擬計(jì)算了模板分子ALA與功能單體NIPAM形成復(fù)合物的構(gòu)型和成鍵情況，優(yōu)化了功能單體NIPAM與模板分子ALA間的印跡比例，以理論計(jì)算優(yōu)化的印跡比例制備了ALA-MIPs，并對(duì)ALA-MIPs進(jìn)行了微觀形貌、結(jié)構(gòu)和吸附性研究，結(jié)果有望為分子印跡技術(shù)在天然抗氧化劑硫辛酸的富集和分離方法中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

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