羅　玲　易德瑋　楊坤明　韓奇鵬　曲湘勇

(1.湖南正虹科技發(fā)展股份有限公司，岳陽 414418； 2.湖南省飼料工程技術研究中心，岳陽 414418；3.湖南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，長沙 410128)

丁酸鈉又稱正丁酸鈉鹽，目前主要作為替代抗生素類添加劑在飼料中應用，其有效成分丁酸是一種短鏈揮發(fā)性脂肪酸，主要來自大腸中厭氧桿菌對糖類和蛋白質(zhì)的酵解，是結(jié)腸能量的主要來源[1-2]。大量研究證實，丁酸鈉可以刺激單胃動物腸道黏膜的生長和細胞增殖，抑制單胃動物消化道病原微生物和寄生蟲增殖，緩解或預防多種原因造成的腹瀉以及促進瘦素和胰高血糖素樣肽2(GLP-2)的分泌等[3]，其在促進仔豬、肉仔雞、幼魚生長、消化和抗氧化方面都有明顯效果[4-11]。在預混料、制粒條件下，經(jīng)包被的微囊丁酸鈉比粉劑的丁酸鈉穩(wěn)定性好、損失率小，而且在胃中的溶解度也有所降低，從而可以使丁酸鈉在腸道逐漸釋放來發(fā)揮其生理作用，且經(jīng)豬、雞的動物試驗驗證包被的微囊丁酸鈉飼養(yǎng)效果較粉劑的丁酸鈉更好[12-14]。團頭魴是我國淡水養(yǎng)殖的優(yōu)良品種，其肉質(zhì)鮮美、抗病強，隨著現(xiàn)代漁業(yè)集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，團頭魴的養(yǎng)殖密度增大，水中有機質(zhì)、氨氮含量及微生物數(shù)量等增加，水中溶氧濃度降低，均給團頭魴帶來了較大的應激。目前，關于微囊丁酸鈉對團頭魴成魚階段生長性能、非特異性免疫力和肝功能的影響尚未見報道。因此，本研究以團頭魴成魚為研究對象，通過在飼料中添加不同劑量的微囊丁酸鈉，研究其對團頭魴生長、非特異性免疫力和肝功能的影響，以期為丁酸鈉在團頭魴高密度養(yǎng)殖中的綜合利用提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　試驗材料

微囊丁酸鈉：由杭州康德權飼料有限公司提供，含30%丁酸鈉。

1.2　試驗設計與飼養(yǎng)管理

試驗在岳陽某試驗場的水泥池(規(guī)格：2.0 m×1.5 m×1.5 m)中進行。經(jīng)2周暫養(yǎng)后，選擇健康、規(guī)格相近[初始體重為(200.78±0.46) g]的團頭魴1 500尾，隨機分為5個組，每組6個重復，每個重復50尾。對照組(Ⅰ組)飼喂基礎飼料(基礎飼料組成及營養(yǎng)水平見表1)，試驗組(Ⅱ～Ⅴ組)分別飼喂在基礎飼料基礎上添加200、400、600、1 000 mg/kg微囊丁酸鈉的試驗飼料，試驗期為60 d。所有飼料原料經(jīng)粉碎過40目篩，采用國產(chǎn)環(huán)模式制粒機加工成直徑為1.5 mm、長為2.0 mm的顆粒飼料。

養(yǎng)殖用水為地下井水，經(jīng)過過濾、沉淀后流回蓄水池，再經(jīng)過增氧、控溫后由水泵送至魚池，每天08:00、12:00、18:00定時投喂飼料，日投餌量為魚體重的3.0%～3.5%，按水產(chǎn)養(yǎng)殖的常規(guī)程序定期換水和調(diào)水。試驗期間水溫為24～31 ℃，溶氧濃度>5.0 mg/L，pH為7.0～7.5，氨氮濃度<0.5 mg/L，亞硝酸鹽濃度<0.05 mg/L。

1.3　取樣及檢測指標

試驗期間每日記錄團頭魴的投喂量和死亡數(shù)，養(yǎng)殖試驗結(jié)束時，禁食24 h后進行計數(shù)和稱重，并計算成活率(SR)、增重率(WGR)、飼料系數(shù)(FCR)和肥滿度(CF)。每組隨機抽取5尾，尾靜脈采血，3 500 r/min離心15 min取上層血清，于4 ℃冰箱保存待測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)和溶菌酶(LSZ)活性；用濾紙將魚體表面的水分吸干，用解剖刀從魚體表面不同部位刮取黏液，稱重后加入5倍體積的pH 7.4、0.02 mol/mL的磷酸鹽緩沖液，用勻漿器勻漿，4 ℃、10 000 r/min離心20 min，取上清液，用液氮速凍后轉(zhuǎn)至-40 ℃冰箱保存，待測T-SOD和LSZ活性；取新鮮肝胰臟，經(jīng)稱重后加入10倍體積的pH 7.4、0.02 mol/mL的磷酸鹽緩沖液，用勻漿機勻漿，4 ℃、10 000 r/min離心20 min，取上清液，用液氮速凍后轉(zhuǎn)至-40 ℃超低溫冰箱保存，待測GPT、GOT和T-SOD活性。

表1　基礎飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)每千克預混料含有 Contained the following per kg of premix：VA 9 00 000 IU，VB1320 mg，VB21 090 mg，VB65 000 mg，VB12116 mg，生物素 biotin 50 mg，葉酸 folic acid 165 mg，D-泛酸D-pantothenic acid 1 000 mg，肌醇 inositol 15 000 mg，煙酸 nicotinic acid 2 500 mg，抗氧化劑 antioxidant 200 mg。

2)礦物質(zhì)預混料為每千克飼料提供The mineral premix provided the following per kg of the diet：Cu (as copper methionine) 2 mg，F(xiàn)e (as ferrous methionine) 106.5 mg，Mn (as manganese methionine) 5 mg，Zn (as zinc methionine) 15 mg，I (as potassium iodide) 1 mg，Se (as sodium selenite) 0.25 mg，Co (as cobalt chloride) 100 mg。

3)實測值 Measured values。

1.4　測定方法

生長性能指標的計算公式如下：

成活率(%)=100×(初始尾數(shù)-
終末尾數(shù))/初始尾數(shù)；
增重率(%)=100×(終末體重-
初始體重)/初始體重；
飼料系數(shù)=投飼量/(終末體重-初始體重)；
肥滿度(g/cm3)=體重/體長3。

血清、肝胰臟和黏液中T-SOD活性以及肝胰臟中GPT和GOT活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，使用酶標儀(Multiskan GO)、離心機、恒溫水浴箱、快速混勻器等儀器測定。

血清中GPT和GOT活性采用全自動生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S-200)及配套試劑測定。

血清和黏液中LSZ活性按Hultmark等[15]的方法用UV-1600型紫外可見分光光度計(北京瑞利)測定，具體方法：用0.1 mol/L的磷酸鉀緩沖液將溶壁微球菌配成懸液體[初始吸光度值(A0)≈0.3]，取懸液于試管內(nèi)水浴30 min后取出，水浴10 min終止反應，測定終末吸光度值(A)。

LSZ活性=(A0-A)/A。

1.5　數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SAS 9.2統(tǒng)計軟件中的ANOVA過程進行單因素方差分析，組間差異顯著性采用Duncan氏法進行多重比較，P<0.05為差異顯著。試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準差表示。

2　結(jié)　果

2.1　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴生長性能的影響

由表2可知，與對照組相比，飼料中添加200、400、600和1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉對團頭魴的肥滿度和成活率無顯著影響(P>0.05)，但成活率隨著微囊丁酸鈉添加量的增加而升高；飼料中添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著增加了團頭魴的終末體重(P<0.05)；飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團頭魴的增重率(P<0.05)；飼料中添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著降低了團頭魴的飼料系數(shù)(P<0.05)，且隨著微囊丁酸鈉添加量的增加，團頭魴飼料系數(shù)呈先增大后減少的趨勢。

表2　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴生長性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴非特異性免疫指標的影響

由表3可知，與對照組相比，飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了血清、黏液、肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性(P<0.05)；飼料中添加400 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性(P<0.05)；飼料中添加1 000 mg/kg微囊丁酸鈉顯著提高了黏液中LSZ活性(P<0.05)。

2.3　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴肝功能的影響

由表4可知，與對照組相比，飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了肝胰臟中GPT和GOT活性(P<0.05)。

表3　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴非特異性免疫指標的影響

表4　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴肝功能的影響

3　討　論

3.1　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴生長性能的影響

丁酸鈉對不同動物的促生長效果不盡相同，且最適添加量也存在很大差異。有研究報道丁酸鈉可促進魚類的生長，其在草魚幼魚飼料中的適宜添加量為0.1%～0.2%[9，16]，在鯽魚幼魚階段[初始體重(6.02±0.16) g]飼料中的適宜添加量為0.25%[6]，在大菱鲆幼魚階段[初始體重(13.00±0.01) g]飼料中的適宜添加量為0.15%[5]，在匙吻鱘[初始體重(48.87±3.13) g]飼料中的適宜添加量為0.1%[7]，在美洲鰻鱺幼魚飼料中的適宜添加量為1.0%[10]。也有研究發(fā)現(xiàn)在鱸魚飼料中添加0.2%的丁酸鈉對其增重率和特定生長率并沒有顯著影響，但會顯著影響免疫相關基因的表達，增強鱸魚的免疫機能[17]。賀姣[18]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加500 mg/kg微囊丁酸鈉可降低肉雞的死亡率并改善其福利狀況。本研究發(fā)現(xiàn)，在團頭魴成魚階段，飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著增加了增重率，飼料中添加1 000 mg/kg微囊丁酸鈉顯著降低了飼料系數(shù)，與Liu等[16]在草魚幼魚上的研究結(jié)果相似，而且團頭魴的成活率隨著丁酸鈉添加量的增加而升高，與賀姣[18]在肉雞上的研究結(jié)果相似，說明飼料中添加適量的丁酸鈉對促進團頭魴的消化吸收水平和健康水平均有積極作用。

3.2　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴非特異性免疫力的影響

已有研究發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉有利于促進仔豬[19]、雞[20]免疫器官發(fā)育，提高機體黏膜免疫功能；改善鯉魚腸道黏膜形態(tài)，提高非特異免疫力[21]；提高凡納濱對蝦血清非特異性免疫酶酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)活性[22]；提高圍生期奶牛免疫力和抗氧能力[23]。魚類屬較低等的變溫脊椎動物，其特異性免疫應答能力相對低下，非特異性免疫在其免疫防御中具有重要意義[24]，LSZ和超氧化物歧化酶(SOD)活性是衡量機體免疫能力的主要指標。LSZ又稱胞壁質(zhì)酶或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶[25]。SOD是超氧陰離子自由基(O2-·)的清除劑，是機體防御過氧化損害系統(tǒng)中的關鍵酶之一[26]。本研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉有利于提高團頭魴血清、黏液、肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性，添加400 mg/kg的微囊丁酸鈉提高了肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性，添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉提高了黏液中LSZ活性，與上述報道相吻合。這說明在團頭魴成魚飼料中添加適量的丁酸鈉有利于提高其非特異性免疫力，可能是因為丁酸鈉通過調(diào)節(jié)腸黏膜穩(wěn)態(tài)來增強自身免疫反應水平的，從而提高團頭魴的非特異性免疫力。

3.3　飼料中添加微囊丁酸鈉對團頭魴肝功能的影響

GPT和GOT是反映肝功能是否正常的重要指標[27]，也是反映機體氨基酸代謝情況的重要酶，主要存在肝細胞中，在機體蛋白質(zhì)代謝中起著重要作用[28]。正常情況下血清中轉(zhuǎn)氨酶活性低而且相對穩(wěn)定[29]，當肝細胞受到外來物質(zhì)的損傷時，細胞膜的通透性加大，大量GPT和GOT滲入血液，使血液中GPT和GOT活性升高且顯著高于正常水平[30]。楊良輝等[31]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加丁酸鈉對尼羅羅非魚無不良作用。魏朝青等[5]研究結(jié)果顯示高植物蛋白質(zhì)飼料中添加0.15%的丁酸鈉能夠提高大菱鲆幼魚肝臟的抗氧化功能。本研究結(jié)果顯示，飼料中添加200、400、600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉對團頭魴血清中GPT和GOT活性均無顯著影響，添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了肝臟中GPT和GOT活性，說明添加600、1 000 mg/kg微囊丁酸鈉有利于增強肝臟的解毒功能，加快尿素的生成，從而減少氨基酸代謝產(chǎn)物對機體的毒害，其具體分子機理還有待進一步驗證。

4　結(jié)　論

① 飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團頭魴的增重率，飼料添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了飼料利用率。

② 飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團頭魴血清、黏液、肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性，飼料中添加400 mg/kg微囊丁酸鈉顯著提高了團頭魴肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性，添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團頭魴黏液中LSZ活性。

③ 飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團頭魴肝胰臟中GTP和GOP活性。

④ 綜合考慮，飼料中添加適量的微囊丁酸鈉在一定程度有利于提高高密度養(yǎng)殖條件下團頭魴對飼料的利用率及其非特異免疫力，并改善肝功能。