任春光,楊豐,黃振興,劉曼,聶飛

(1.貴州省生物研究所,貴州 貴陽　550009; 2.麻江藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)工程技術(shù)中心,貴州 麻江　557602)

藍(lán)莓Vacciniumsp.又稱藍(lán)漿果或越桔,屬多年生灌木型小漿果果樹,果實呈藍(lán)色,是杜鵑花科Ericaceae 越橘屬Vaccinium植物。因果實中含有豐富的花青素,具有獨特的食用營養(yǎng)與保健作用,聯(lián)合國糧農(nóng)組織將其列為人類五大健康食品之一。貴州境內(nèi)山巒重疊,丘陵起伏,地勢變化大,形成了明顯的地區(qū)性氣候差異。貴州發(fā)展藍(lán)莓具有得天獨厚的自然條件優(yōu)勢,從2000年開始引種兔眼藍(lán)莓,至今已有17年栽培歷史,先后引入了四類40多個品種[1-2],貴州的麻江、黃平、丹寨、鳳岡、松桃、獨山、花溪和烏當(dāng)?shù)?0個縣區(qū)進(jìn)行了栽培種植。

近年來隨著藍(lán)莓種植面積持續(xù)增長、對外引種頻繁,病害種類隨之增多,發(fā)病程度日趨嚴(yán)重。為了摸清貴州省藍(lán)莓葉、莖、花真菌病害種類,有效控制病害的發(fā)生,保持藍(lán)莓良好的生長狀態(tài),提高生產(chǎn)效益,我們對藍(lán)莓真菌病害種類進(jìn)行了系統(tǒng)調(diào)查。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本采集2015—2017年,采用隨機(jī)普查和定點調(diào)查方式分別在貴州麻江、黃平、丹寨、鳳岡、松桃等地的藍(lán)莓主要栽培區(qū)調(diào)查病害種類,采集癥狀典型的新鮮病株供室內(nèi)鑒定。

1.2病原真菌分離及鑒定根據(jù)真菌病害發(fā)生部位和形式,針對性采用不同方法分離病原。每份材料重復(fù)3次,取藍(lán)莓基地健康植株組織作空白對照。

對于癥狀明顯,病原菌用肉眼可見的病害,在解剖鏡下用無菌接種針直接從病部挑取病原菌放在無菌水中,混合均勻后,再吸取少量菌液在水瓊脂培養(yǎng)基(15 g瓊脂,1 000 mL)上,等待萌發(fā)后挑取單孢進(jìn)行多次純化獲得純培養(yǎng)。

對于癥狀明顯但病原菌無法用肉眼看見的病害,采取組織分離法,取新鮮病健交界處的病組織洗凈后切成4 mm×4 mm小塊,用滅菌水沖洗3～4次;分別用75%酒精消毒30 s左右,再在0.1%升汞中消毒1～2 min,然后用無菌水沖洗3～4次,在無菌條件下將感病組織接在PDA培養(yǎng)基[3]的平板上。

1.3致病性測定對疑難病害用柯赫氏法則進(jìn)行致病性測定[3-4]。將純化所得的菌株配成孢子懸浮液,每視野50～60個孢子(10×16倍),以刺傷和無傷接種法,把孢子液涂于新鮮健康的離體寄主上;以無菌水保濕作對照(CK),然后將接種的葉片或枝條放入無菌濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中,置于25 ℃溫箱內(nèi)保濕培養(yǎng),每處理3個重復(fù),每隔2 d觀察1次,記錄接種結(jié)果,并對接種成功的病斑進(jìn)行組織分離,確認(rèn)致病菌株[5]。

根據(jù)病原菌形態(tài)特征,參照魏景超[5](1979)《真菌鑒定手冊》和陸家云[4](2001)《植物病原真菌學(xué)》,按照Ainsworth分類系統(tǒng),參考有關(guān)文獻(xiàn)[6-8],初步鑒定貴州藍(lán)莓病害的病原真菌。

2　結(jié)果與分析

2.1藍(lán)莓褐斑病

癥狀 褐斑病主要危害葉片,葉片受害初期產(chǎn)生棕褐色小點,邊緣有卷起,后期隨著病斑擴(kuò)大,邊緣褐色至紅褐色,病健交界清楚,斑點生于葉正面,形狀不規(guī)則,多個病斑融合成不規(guī)則大斑(圖1a)。

病原菌 假尾孢菌Pseudocercosporasp.。分生孢子梗多根,直立或稍彎曲,灰褐色,有隔膜,分枝。分生孢子棍棒形、呈曲膝狀、淺褐色、多數(shù)稍彎曲,兩端鈍圓,通常有3～6個隔膜,(20～80)μm×(2～9)μm,符合假尾孢菌屬Pseudocercospora的形態(tài)描述(圖1b)。

分布及危害評價 假尾孢屬Pseudocercosporasp.在世界各地廣泛發(fā)生,如美國、英格蘭、澳大利亞、韓國等均有報道[8],在中國的東北、重慶、北京、貴州等其它植物上發(fā)現(xiàn)過假尾孢屬病原菌[7-9]。假尾孢病原菌在貴州的獼猴桃上有報道,主要危害葉片,引起干枯后卷曲,落葉,嚴(yán)重影響植物光合作用[7]。該屬是植物病原菌,可危害蔬菜、花卉、經(jīng)濟(jì)林木、中藥材等多種植物,是非常重要的病原菌。引起葉片枯焦,提前脫落,或造成落花、落果,影響產(chǎn)量和品質(zhì),常造成一定的經(jīng)濟(jì)損失,假尾孢屬有些種引起的病害甚至被列在檢疫法規(guī)中成為檢疫對象。目前藍(lán)莓褐斑病發(fā)病率為10%～15%,在藍(lán)莓上未見此病原菌報道。因為藍(lán)莓褐斑病對藍(lán)莓生產(chǎn)可能造成相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重時甚至可以導(dǎo)致絕收,因此不能輕視藍(lán)莓褐斑病的危害,應(yīng)作為后期重點觀察病害之一；定點觀察藍(lán)莓褐斑病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律,加強(qiáng)室內(nèi)生物源藥劑篩選試驗,為預(yù)防病害進(jìn)一步蔓延打下前期基礎(chǔ)。

圖1　藍(lán)莓褐斑病癥狀和病原菌Pseudocercospora sp.

2.2藍(lán)莓葉點病

癥狀主要危害葉片,新葉和老葉均危害,病部多從葉中開始,發(fā)病初期出現(xiàn)很多褪綠色大小不一小斑點,后期呈棕色斑點,斑點形狀不規(guī)則,后期葉片逐漸變紅,病斑仍清楚。保濕培養(yǎng)后著生黑色小點,即病菌分生孢子器。7—8月高溫干旱,病害最重,導(dǎo)致葉片提早枯落(圖2a)。

病原菌擬盤多毛孢屬Pestalotiopsissp.。分生孢子紡錘形,(13～18) μm×(4～6) μm,直或稍彎,3個隔膜,中間3個細(xì)胞黑褐色,兩端細(xì)胞無色,圓錐形,頂生1～2根附屬絲,長12～23 μm,基細(xì)胞具短柄(圖2b)。

分布及危害評價 擬盤多毛孢屬Pestalotiopsissp.在世界各地廣泛發(fā)生,可危害許多農(nóng)作物及經(jīng)濟(jì)植物,例如玉米、獼猴桃、竹子等。目前該病發(fā)病率為5%～10%,擬盤多毛孢菌是多數(shù)植物上的弱致病真菌,也是植物上常見腐生真菌,通常引起不同程度斑點狀,環(huán)境條件適合時發(fā)病較重,擬盤多毛孢菌對生產(chǎn)危害不大,及時噴施葉面肥或植物源真菌殺菌劑該癥狀很快緩解。

圖2　藍(lán)莓葉點病癥狀和病原菌Pestalotiopsis sp.

2.3藍(lán)莓炭疽病

癥狀藍(lán)莓炭疽病可危害藍(lán)莓花、葉、果,嫩芽等,主要危害葉片,在高溫多雨時發(fā)病較重,發(fā)病初期在葉緣或葉尖開始,出現(xiàn)水漬狀棕褐色斑點,后期變成深褐色或黑色、近圓形、中央稍凹陷的病斑。天氣干燥,病斑中央灰白色,表皮下埋生小黑點即為病原菌分生孢子盤。嚴(yán)重時造成葉片脫落,嫩梢枯死,果實產(chǎn)量下降(圖3a)。

病原菌刺盤孢屬Colletotrichumsp.。分生孢子盤多聚生,黑褐色,頂端不規(guī)則破裂。分生孢子盤上著生剛毛直立,黑褐色,剛毛1～3根,頂端較尖,基部較粗,1～3個隔膜,(80～320) μm×(2～4) μm。分生孢子無色,單胞,紡錘形、橢圓形或棒狀形,兩端鈍圓,含1個油球或無油球,大小為(15～27) μm ×(3～5) μm(圖3b)。

分布及危害評價炭疽病原菌能侵染很多經(jīng)濟(jì)植物,在世界各地廣泛發(fā)生,如美國、英格蘭、澳大利亞等均有報道[11-12]。在中國遼寧,曾報道藍(lán)莓炭疽病發(fā)生嚴(yán)重,可造成相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失,損失嚴(yán)重時甚至可以導(dǎo)致絕收;有專家認(rèn)為炭疽病的高發(fā)還會導(dǎo)致藍(lán)莓采收后微生物超標(biāo),影響產(chǎn)品安全[10-13]。刺盤孢屬Colletotrichumsp.在貴州的藍(lán)莓、獼猴桃、竹子等經(jīng)濟(jì)植物上有過報道[6-7,13-14],目前在貴州藍(lán)莓上發(fā)生危害較輕,發(fā)病率為5%～8%,鑒于炭疽病在其它藍(lán)莓栽培區(qū)可造成相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失,因此不能輕視,后期要定點定時觀察藍(lán)莓炭疽病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律。

2.4藍(lán)莓莖枯病

癥狀該病可危害藍(lán)莓葉、莖,發(fā)病初期在嫩莖上形成圓形或橢圓形病斑,后期縱橫方向逐漸擴(kuò)散到整個嫩枝,嚴(yán)重時每株多個枝條受害,嚴(yán)重影響開花和座果率。嫩莖上密生許多黑色小點,為病原菌的分生孢子器,保濕后長白色絲狀霉層(圖4a)。

病原菌蛇孢腔菌屬Ophiobolussp.。子囊座散生,球形或近球形,淺棕色,頂端呈乳頭狀突起。子囊圓筒形或棍棒形,大小為(74～113) μm×(5～8)μm。子囊孢子絲狀,無色,有2～5個隔膜,大小為(72～110)μm×(2～4)μm(圖4b)。

分布及危害評價目前蛇孢腔菌屬Ophiobolussp.在土耳其、美國等許多國家和地區(qū)廣泛發(fā)生[15-18],我國主要在小麥栽培區(qū)發(fā)生較重。蛇孢腔菌主要侵染禾本科植物,例如小麥、玉米、竹子等植物,可引起禾谷類根部毀滅性的影響[15]。藍(lán)莓莖枯病目前發(fā)病率為10%～15%,蛇孢腔菌在寄主藍(lán)莓上還未見報道。鑒于蛇孢腔菌屬病原菌可能對藍(lán)莓造成毀滅性的影響,所以必須密切注意藍(lán)莓莖枯病的侵染發(fā)生情況,積極深入研究病害發(fā)生規(guī)律及防治措施,及時進(jìn)行有效防控,避免和減少藍(lán)莓莖枯病的傳播,影響貴州藍(lán)莓可持續(xù)發(fā)展。

圖4　藍(lán)莓莖枯病癥狀和病原菌Ophiobolus sp.

2.5藍(lán)莓灰霉病

癥狀藍(lán)莓灰霉病可危害藍(lán)莓的花和果實。在花期,陰雨天氣相對濕度大時最易感病;初期多從花尖形成逐漸向花內(nèi)擴(kuò)展,形成灰色病斑,后期病斑上著生許多灰色霉層,藍(lán)莓灰霉病病菌易迅速發(fā)生、流行。采收后的藍(lán)莓在室內(nèi)存放一周后,果實容易被感染,上呈現(xiàn)灰色霉層,很快軟化腐爛,嚴(yán)重影響藍(lán)莓的果實品質(zhì)(圖5a,b)。

病原菌葡萄孢屬Botrytiscinerea。分生孢子梗細(xì)長,直立,通常二叉或三叉分枝。分生孢子圓形、卵圓形,單細(xì)胞,無色,單生或聚集呈葡萄狀,大小為(5～11) μm×(1～8)μm(圖5c)。

圖5　藍(lán)莓灰霉病癥狀和病原菌 Botrytis cinerea

分布及危害評價灰霉病在世界各地均有危害,是植物上常見病害。多數(shù)是腐生真菌,少數(shù)是弱寄生真菌,葡萄孢菌在藍(lán)莓上有報道[14]。目前發(fā)病率15%～25%,該病原菌主要受天氣影響較大,當(dāng)開花期連續(xù)數(shù)日陰雨天氣,樹體抵抗力低,座果率差時,容易感染此病,當(dāng)天氣連續(xù)數(shù)日晴朗時病原菌數(shù)量自然降低,病菌不再傳播蔓延,不用噴施藥劑癥狀很快緩解,對生產(chǎn)危害不大。

2.6藍(lán)莓枯萎病

癥狀藍(lán)莓枝條枯萎病往往發(fā)生在當(dāng)年生嫩尖上,主要癥狀是頂尖死亡,緣葉脈向邊緣擴(kuò)散到整葉,發(fā)病初期呈水漬狀,后期呈現(xiàn)黑色萎焉,嚴(yán)重時,一個植株上多個枝條受害。保濕培養(yǎng)后上著生黑色小點,即分子孢子器(圖6a)。

病原菌擬莖點霉屬Phomopsissp.,分生孢子有2種。1種β型孢子,鉤狀或絲狀,單孢,無色,(9～26) μm×(1～2) μm。另1種是α型孢子,紡錘型或橢圓形,無色,單胞,(4～7) μm×(1～2) μm,內(nèi)含1～2個油球,其中α型孢子較多(圖6b)。

分布及危害評價擬莖點霉菌呈世界性分布,是林業(yè)和農(nóng)業(yè)上重要的病原菌和內(nèi)生菌。擬莖點霉屬真菌種類較多,可引起多種病害,例如果腐、葉枯、枝枯、根腐等,部分種類可以危害人或其他哺乳動物造成真足菌腫病,在自然生態(tài)系統(tǒng)中占有非常重要的地位。擬莖點霉菌在遼寧、山東、貴州麻江先后報道,國內(nèi)將擬莖點霉菌Phomopsisvaccinii危害果實的病害列為新的檢疫性病害[19-20]。目前擬莖點霉在凱里市宣威鎮(zhèn)藍(lán)莓基地上發(fā)病率為5%～8%,危害藍(lán)莓報道。鑒于擬莖點霉屬的病原菌可能危害藍(lán)莓果實,其中部分病原菌已被列入檢疫病害,雖然目前發(fā)病較輕,對生產(chǎn)影響不大,但是不能輕視該病的危害,因此后期要定點定時觀察其病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律,及時對這些病害進(jìn)行有效防控,避免此類病害的傳播。

圖6　藍(lán)莓枯萎病癥狀和病原菌Phomopsis sp.

2.7葉斑病

癥狀主要危害葉片。葉片染病初期為黑褐色小斑點,不久擴(kuò)大為不規(guī)則形大斑,褐色。隨著斑點增多變大,整葉變褐干枯向內(nèi)卷曲,高溫天氣病斑中間呈灰白色輪紋狀。潮濕時,病部出現(xiàn)黑色粉狀霉層(圖7a)。高溫高濕有利于病害發(fā)生。

病原菌鏈格孢屬Alternariasp.。分生孢子梗單生或簇生,直立或稍彎曲,褐色具隔膜。分生孢子單生,倒棒形,直或彎曲,褐色,具隔膜,橫隔2～4個,縱、斜隔0～2個,分隔處略縊縮,(13～20) μm×(5～11) μm。喙短柱狀,淡褐色(圖7b)。

分布及危害評價藍(lán)莓葉斑病在世界各地廣泛發(fā)生。鏈格孢屬病原菌能侵染很多經(jīng)濟(jì)植物,是植物上常見病害,多數(shù)是腐生真菌,少數(shù)是弱寄生真菌。目前發(fā)病率為10%～15%,此病原菌與環(huán)境條件關(guān)系密切。鏈格孢病原菌對生產(chǎn)危害不大,及時溝施微生物菌肥或噴施葉面肥，病害癥狀很快緩解。

圖7　藍(lán)莓葉斑病癥狀和病原菌Alternaria sp.

3　結(jié)論與討論

通過近2 a 對藍(lán)莓病害的研究,我們已基本摸清了貴州藍(lán)莓葉、莖、花病害種類和主要病害危害情況,初步鑒定出貴州藍(lán)莓葉、莖 、花真菌病害7種,藍(lán)莓褐斑病、藍(lán)莓炭疽病、莖枯病、枯萎病4種病害可能對藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)造成潛在的危害。此研究結(jié)果對今后藍(lán)莓主要病害的病原生物學(xué)特性、發(fā)生規(guī)律、病害檢疫及綜合防治具有一定的理論參考價值,也為指導(dǎo)藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)提供了重要的理論依據(jù)。

目前我國已報道的侵染藍(lán)莓葉部的真菌病害有5 種[2,14,20],其中假尾孢屬和蛇孢腔菌屬病原菌在藍(lán)莓上引發(fā)病害為首次報道,同屬病原菌在不同寄主上危害癥狀不一。假尾孢屬主要危害蔬菜、花卉等植物,蛇孢腔菌主要危害禾本科植物,此次藍(lán)莓成為該病原菌的新寄主,是否與貴州一帶采用稻谷殼作為藍(lán)莓栽培后覆蓋物,果園附近有蔬菜和花卉基地有關(guān),有待進(jìn)一步驗證。本試驗僅從調(diào)查和鑒定病害入手,其中重要病害發(fā)生發(fā)展規(guī)律、發(fā)病特點等還需進(jìn)行深入研究。