陳肇源，陳盛文，萬慶文，陳桂霞

（1.廣東省東莞市萬江農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523050；2.東莞市長安鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523846）

禽流感是由禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）引起的高度接觸性傳染病。其中，H7N9亞型流感是A型流感中的一種，2013年3月31日首先在中國上海和安徽發(fā)現(xiàn)了3例人感染H7N9流感病例。為遏制H7N9流感疫情，2017年7月開始，東莞市進(jìn)行了H5+H7N9二價苗試點(diǎn)免疫，以掌握疫苗對家禽的保護(hù)效果和抗體水平消漲情況。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

來自東莞市2個種雞場、2個肉雞場、1個肉鵝場。在免疫當(dāng)天(0d)以翅靜脈采血，采集全血樣品2mL，以3500r/min離心15min分離獲得待檢血清，-20℃保存?zhèn)錂z作為免疫前對比。用哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司提供的重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株，批號為20180603)免疫21d后，采集血清待檢。

1.2 試劑與方法

表1 不同禽群免疫21d后H5N1 Re-8株抗體水平比較

表2 不同禽群免疫21d后H7N9 H7-Re1株抗體水平比較

1.2.1 1%雞紅細(xì)胞懸液

采集實(shí)驗室飼養(yǎng)的3只禽流感和新城疫非免疫的健康公雞的血液與阿氏液等體積混合，用pH值7.2的0.01mol/L PBS液洗滌3次，每次以1000r/min離心10min，洗滌后用PBS液配成體積分?jǐn)?shù)1%雞紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 檢測試劑

抗體檢測試劑禽流感H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株抗原及陽性血清，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。

1.2.3 主要耗材和儀器

96孔“V”型反應(yīng)板，離心機(jī)，8道移液器，微量震蕩器。

1.2.4 檢測方法

按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)規(guī)定的血凝與血凝抑制方法操作。以完全抑制4單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI的滴度。HI效價小于或等于31og2判陰性，HI效價大于或等于41og2判陽性,判定為抗體合格。

2 結(jié) 果（見表1.2）

2.1 種雞場群體抗體水平

兩個種雞場免疫前H5N1 Re-8株整體抗體水平為100%，H7N9 H7-Re1株抗體水平為24.14%，免疫21d后，H5N1 Re-8株為100%，H7N9 H7-Re1株為91.38%。

2.2 肉雞場群體抗體水平

2個肉雞場免疫前H5N1 Re-8株整體抗體水平為96.67%，H7N9 H7-Re1株抗體水平為0，免疫21d后，H5N1 Re-8株為100%，H7N9 H7-Re1株為78.57%。

2.3 肉鵝場群體抗體水平

免疫前H5N1 Re-8株整體抗體水平為96.15%，H7N9 H7-Re1株抗體水平為 0，免疫 21d后，H5N1 Re-8株為100%，H7N9 H7-Re1株為96.43%。

3 討論

3.1 試驗禽在免疫H5+H7N9二價苗前已有免疫H5亞型疫苗的基礎(chǔ)，在免疫該二價苗后H5N1 Re-8株抗體水平基本未受到H7N9 H7-Re1株的影響，同時仍有較大增幅，抗體陽性率均達(dá)到100%。

3.2 試驗禽在免疫后，H7N9 H7-Re1株抗體水平基本能達(dá)到70%以上，甚至95%以上，證明該二價苗在H7N9 H7-Re1株上有較好的保護(hù)力，肉雞場A抗體為69.23%，送樣的15份血清中有2份發(fā)生溶血，對檢測結(jié)果造成了一定影響。另外，種雞場在免疫前已檢到一定的抗體，據(jù)調(diào)查，種雞場A和種雞場B在農(nóng)業(yè)部試點(diǎn)免疫H5+H7N9二價苗前已私下購買使用其他廠家的H5+H7N9二價苗，也不排除存在其他可能因素，目前，該兩個種雞場已因畜禽養(yǎng)殖污染整治被清理，當(dāng)時抽檢的雞群也已宰殺銷售，具體原因暫未能查明。

3.3 肉鵝場在免疫一次H5+H7N9二價苗后，抗體水平能夠達(dá)到96.43%，說明H7N9 H7-Re1株對水禽也能產(chǎn)生明顯的免疫應(yīng)答反應(yīng)，這和相關(guān)研究也是相吻合的。