◎ 楊穗珊，謝作蓉，林寶英

（海南省食品檢驗檢測中心，海南 ?？?570311）

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）為革蘭氏陰性桿菌，是一種嗜鹽性細菌。含有該菌的食物可導致食物中毒，常見于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產品及鹽漬食品中，自1951年藤野等報告該菌以來，許多國家相繼有病例報道，至今已成為許多沿海國家重要食物中毒重要病原菌之一，在中國位居食源性疾患的前3位[1]。

能力驗證是證明實驗室能力的一種有效技術手段，是對實驗室技術能力和管理狀況的客觀的考核方法，是實驗室內部質量控制的有效補充方式。通過參加能力驗證，對實驗室質量控制情況和實驗人員水平技能進行考核和判定，能最有效地消除偏差，提高檢驗人員檢測水平，保證檢測數(shù)據(jù)達到檢驗質量標準[2]。海南省食品檢驗檢測中心實驗室于2018年5月參加了FAPAS組織的盲樣編號為M230d21的副溶血性弧菌能力驗證。

1 材料與方法

1.1 材料

FAPAS發(fā)來的2個魚肉盲樣，編號分別為M230d21A和M230d21B。

1.2 主要培養(yǎng)基和試劑

3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂、3%氯化鈉堿性蛋白胨水、TCBS、3%氯化鈉三糖鐵瓊脂、氧化酶試紙、副溶血性弧菌生化鑒定盒，采購自環(huán)凱微生物科技有限公司。弧菌顯色培養(yǎng)基，采購于上海欣中生物公司。副溶血性弧菌核酸檢測試劑盒、細菌基因組DNA快速提取試劑盒，購自廣州迪澳生物科技有限公司。GN細菌鑒定卡，采購于生物梅里埃。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品來源

依據(jù)FAPAS作業(yè)指導書要求，在每個盲樣中加入20 mL 3% NaCl堿性蛋白胨水作為25 g待測原樣。

1.3.2 副溶血性弧菌檢驗

按照國家標準GB 4789.7-2013《食品微生物學檢驗 副溶血性弧菌檢驗》[3]對兩個樣品進行檢測。取GB 4789.7-2013步驟中3%氯化鈉堿性蛋白胨水，（36±1）℃培養(yǎng)8～18 h后的培養(yǎng)物進行副溶血性弧菌環(huán)介導等溫擴增實驗。

2 結果與分析

樣品在經過增菌培養(yǎng)后轉種于TCBS培養(yǎng)基和弧菌顯色培養(yǎng)基，M230d21A不生長。M230d21B在弧菌顯色培養(yǎng)基上有淡紫色典型可疑菌落生長，TCBS培養(yǎng)基上呈現(xiàn)圓形表面光滑的綠色菌落，分別挑取3個可疑菌落進行純化，并對純化后的可疑菌落進行革蘭氏染色，染色結果顯色為革蘭氏陰性，無芽孢。

2.1 初步鑒定結果

氧化酶試驗結果顯示為陽性。3%氯化鈉三糖鐵瓊脂穿刺反應顯示底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變，有動力。

2.2 確定鑒定結果

用梅里埃全自動微生物生化鑒定儀VITEK2鑒定出的結果為副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Probability:99%）。用副溶血性弧菌生化試劑盒鑒定的結果見表1，鑒定結果為副溶血性弧菌。

表1 樣品M230d21B副溶血性弧菌干制生化試劑盒鑒定結果表

2個樣品增菌物的環(huán)介導等溫擴增的結果見圖1，M230d21A號樣品未檢出副溶血性弧菌，M230d21B號樣品增菌物檢出副溶血性弧菌。

圖1 副溶血性弧菌環(huán)介導等溫擴增結果圖

3 討論

本次能力驗證采用了常規(guī)國家標準方法和環(huán)介導等溫擴增的快速檢測方法，兩種方法檢出的結果一致，國家標準方法時間較長操作較為繁瑣，人為影響因素也較大，生化鑒定易出現(xiàn)假陰性的結果[4]。環(huán)介導等溫擴增法較為靈敏，時間短，節(jié)省人力，可考慮作為大型會議保障的快速篩查的檢測手段。海南島是國際旅游勝地，大型會議較多，海產品豐富，副溶血性弧菌作為一種海洋食源性致病菌，近年來已成為我國沿海地區(qū)的首要食源性致病菌。通過參加此次FAPAS的能力驗證，不但提高了實驗室市場競爭力，更進一步加強了實驗人員對副溶血性弧菌的檢驗技能，促進實驗室檢驗能力的不斷提升，同時也是對實驗室內部質量控制程序的一種補充。