李國成

山東省菏澤市牡丹區(qū)中醫(yī)醫(yī)院外科,菏澤 274000

前列腺癌是影響男性生命健康的惡性腫瘤,其發(fā)病率僅低于肺癌,占男性惡性腫瘤的30%,死亡率占11%。前列腺癌的發(fā)病過程隱匿,進程較慢,且發(fā)病早期無明顯癥狀,一旦發(fā)現,往往已發(fā)展到晚期或已發(fā)生轉移[1]。因此,前列腺癌的早期發(fā)現、早期治療具有顯著的意義。免疫組化染色是診斷前列腺癌的必要方法,其中α-甲?；o酶A消旋酶(又稱P504S)是近年來研究較為廣泛的前列腺癌重要標志物,有報道指出[2],P504S對于前列腺癌的診斷具有顯著的特異性。P63和Ck34βE12是前列腺中基底細胞的陽性標志物,對前列腺的惡性癌變及良性病變具有較為靈敏的診斷[3]。前列腺特異性膜抗原(PSMA)在前列腺上皮細胞表面特異表達,在前列腺癌細胞上的表達顯著增加[4]。本研究探究P504s、P63、PSMA及Ck34βE12在前列腺良惡性病變鑒別中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月—2016年12月收治的菏澤市牡丹區(qū)中醫(yī)醫(yī)院直腸B超引導下的手術切除標本112例,前列腺穿刺活檢標本89例及經尿道電切除標本23例,共224例作為研究對象?；颊吣挲g55～ 81歲,平均(70.54±4.27)歲;經檢測發(fā)現,前列腺癌(PCa)51例,前列腺非典型腺瘤性增生(AAH)12例,高級別前列腺上皮內瘤變(HGPIN)15例,基底細胞增生(BCH)9例及良性前列腺瘤樣增生(BPH)21例。本研究經醫(yī)院倫理委員會同意,患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

所獲標本均進行石蠟切片,行蘇木精-伊紅(HE)染色。于10%的中性福爾馬林中固定24 h,進行石蠟切片。切片置于65 ℃孵箱過夜,經過抗原修復和封閉后,加入P504S單克隆抗體、p63 單克隆抗體、PSA單克隆抗體或Ck34βE12單克隆抗體于4 ℃過夜,洗滌,加入二抗,洗滌后加入ABC復合物,并進行DAB顯色。本研究所用一抗均購自北京中山金橋生物技術有限公司,所有操作按照說明書嚴格進行,且每次實驗設置陽性及陰性對照。

1.3 結果判定

P504S主要存在于細胞胞質中,陽性細胞胞質呈現棕黃色;P63主要分布在細胞核中,陽性細胞細胞核出現棕黃色;PSMA在細胞膜及胞質中分布,陽性細胞的細胞膜及細胞質中呈現棕黃色顆粒;Ck34βE12存在于細胞質中,呈現棕黃色;根據陽性細胞比例分級:陰性(-):視野中無陽性細胞出現;(+):陽性細胞比例<10%;(++):陽性細胞比例在10%～50%;(+++):陽性細胞比例在50%～100%。對單獨和聯合檢測P504S、P63、PSMA及Ck34βE12的準確度,靈敏性及特異性進行統(tǒng)計。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 P504S在前列腺良惡性病變組織中的表達

P504S主要表達在腫瘤細胞的胞質內,51例Pca患者中32例顯示出強的棕黃色彌散性胞質染色,彌散陽性率為62.75%,陽性率為100.00%;12例HGPIN患者中11例出現彌散性或散在陽性,陽性率為91.67%;而AAH、BCH及BPH患者標本中P504S的陽性率分別為6.67%、11.11%及0.00%,與Pca和HGPIN患者的P504S相比,具有顯著性差異(P< 0.05),見表1。

2.2 P63在前列腺良惡性病變組織中的表達

P63在Pca的陽性率為0%,而在HGPIN,AAH,BCH和BPH中的表達量均為100.00%,Pca中P63的表達量顯著低于其他種類的前列腺病變(P< 0.05),見表2。

2.3 PSMA在前列腺良惡性病變組織中的表達

PSMA在Pca和HGPIN的陽性率為98.04%和90.91%,在AAH,BCH和BPH中的表達量分別為13.33%,11.11%和9.52%,Pca,HGPIN的陽性率顯著高于AAH、BCH和BPH(P<0.05),見表3。

表1 P504S在前列腺良惡性病變組織中的表達

注:與Pca相比,(1)P< 0.05;與HGPIN相比,(2)P< 0.05。

表2 P63在前列腺良惡性病變組織中的表達

注:與Pca相比,(1)P< 0.05。

表3 PSMA在前列腺良惡性病變組織中的表達

注:與Pca相比,(1)P< 0.05;與HGPIN相比,(2)P< 0.05。

2.4 Ck34βE12在前列腺良惡性病變組織中的表達

Ck34βE12在Pca中陽性率為0.00%,在HGPIN、AAH,BCH和BPH中的陽性率均為100.00%,Pca陽性率顯著低于HGPIN、AAH、BCH和BPH(P< 0.05),見表4。

表4 Ck34βE12在前列腺良惡性病變組織中的表達

注:與Pca相比,(1)P< 0.05。

2.5 單獨及聯合檢測P504S、P63、PSMA及Ck34βE12對前列腺癌診斷的準確度,靈敏性及特異性

P504S、P63、PSMA及Ck34βE12聯合檢測對前列腺癌診斷的準確度,靈敏度及特異性分別達到100.00%,97.85%和98.24%,均高于單獨檢測,具有一定的臨床診斷價值,見表5。

表5單獨及聯合檢測P504S、P63和PSMA對前列腺癌診斷的準確度,靈敏度及特異性(%)

Tab.5Theaccuracy,sensitivity,andspecificityofseparateandjointdetectionofP504S,P63,PSMAandCk34βE12,inthediagnosisofprostatecancer(%)

指標準確度特異性靈敏度P504S90.3596.5289.66P6385.3480.6383.46PSMA92.6794.0195.24Ck34βE1283.4785.4487.25聯合檢測100.0097.8598.24

3 討論

目前臨床上對于前列腺癌的診斷主要通過其結構、浸潤方式的改變及細胞結構的異型性等,但一些微小的形態(tài)差別,如前列腺非典型腺瘤性增生,高級別前列腺上皮內瘤變,基底細胞增生及良性前列腺瘤樣增生等與惡性前列腺癌變具有的差別甚微,HE染色比較難以區(qū)分[5],因此,尋找有效的標志物進行區(qū)分,提高前列腺癌的診斷準確性及特異性具有重要意義。

P63和Ck34βE12均為基底細胞的特異性標記物,定位于細胞質和細胞核,通過對P63和Ck34βE12染色強度的分析,能夠清楚分辨基底細胞的存活狀態(tài)及是否缺失,而基底細胞的缺失是前列腺癌變的重要指征,前列腺癌變時,P63和Ck34βE12的染色強度顯著降低,許多報道指出P63和Ck34βE12可以作為特異性標記物對前列腺癌進行檢測[6]。本研究結果顯示,P63和Ck34βE12在Pca的陽性率為0%,而在其他前列腺病變中陽性率為100.00%,與以前研究的結果相似。由此可見,P63和Ck34βE12可以作為特異性標志物用于分辨前列腺的癌性病變和良性增生。有研究結果顯示,良性前列腺增生的細胞中含有少數的腺泡和導管周圍,存在P63和Ck34βE12間斷的陽性或陰性,此結果表明了單獨檢測P63和Ck34βE12的局限性,對于穿刺活檢的標本,存在一定的視野限制,更容易出現假陽性或假陰性的結果[7]。因此,P63和Ck34βE12應與其他檢測指標聯合應用來對前列腺癌進行診斷。

P450S作為一種高度敏感的前列腺癌的陽性標志物,主要存在于線粒體及過氧化物酶體中,有報道稱P450S在前列腺癌組織中高表達,但是在正常前列腺組織中幾乎不表達[8]。本研究結果與以前的報道相似,P504S在前列腺癌中的表達顯著升高。PSMA在前列腺上皮組織中表達,在胞漿近腔緣側的染色較深,且其表達量隨著上皮細胞形狀改變程度的加重而增加,在正常前列腺組織中表達較低。有研究顯示,PSMA在前列腺癌中的表達程度與年齡,淋巴結轉移及組織分化程度具有密切的關系[9]。也有報道稱 99mTc-PSMA全身平面顯像結合局部SPECT/CT斷層顯像對前列腺癌原發(fā)灶和轉移灶的探測有較高應用價值,靈敏度及特異度均較高[10]。本研究結果顯示,PSMA在Pca,HGPIN中的表達顯著增加。因此,PMSA是一種診斷前列腺癌較為特異的標志物,能夠作為靶向物,與其他技術結合,作為前列腺癌診斷與治療的新手段。

針對以上原因,本研究對單獨檢測和聯合檢測P504S、P63、PSMA及Ck34βE12的準確度,靈敏性及特異性進行評價,發(fā)現以上指標聯合檢測,對前列腺癌診斷的準確度、靈敏性及特異性均得到了增加。