張 莉，薛 煒

(馬鞍山市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科，安徽 馬鞍山 243000 )

慢性盆腔炎是女性生殖器官中常見(jiàn)的疾病，免疫紊亂在慢性盆腔炎的發(fā)病機(jī)制中起重要作用?，F(xiàn)有研究在一定程度上闡述了慢性盆腔炎患者固有免疫和適應(yīng)性免疫之間的關(guān)系[1-2]。

有報(bào)道Th17細(xì)胞主要通過(guò)其產(chǎn)生的IL-17、IL-22和IL-26等在自身免疫性疾病和炎癥性疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮效用[3]。IL-26是IL-10家族中的一員[4]，在慢性盆腔炎中作用于單核細(xì)胞并產(chǎn)生其他促炎介質(zhì)，如IL-1β、IL-6和TNF-α。IL-10蛋白家族可通過(guò)抑制一系列細(xì)胞因子、趨化因子和受體的表達(dá)而參與介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的負(fù)性調(diào)控[5-6]。IL-26是一個(gè)多效細(xì)胞因子，在腸道和肺中同時(shí)具有促炎和抗炎的作用，并參與了自身免疫性疾病的進(jìn)程調(diào)控、組織修復(fù)和致病性炎癥。研究表明，它在感染和炎癥期間對(duì)機(jī)體具有一定的保護(hù)性作用[7]。上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞，包括肺泡巨噬細(xì)胞、Th1、Th17、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，是IL-26的主要來(lái)源。IL-26可激活各種免疫細(xì)胞，以促進(jìn)抗病毒和抗菌反應(yīng)。如IL-26通過(guò)誘導(dǎo)人外周血NK細(xì)胞TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)從而殺死丙型肝炎病毒感染的肝細(xì)胞[8]。此外，CD68+肺泡巨噬細(xì)胞及Th17細(xì)胞來(lái)源的IL-26分別通過(guò)招募中性粒細(xì)胞及效應(yīng)性免疫細(xì)胞至肺部細(xì)菌感染部位及誘導(dǎo)DC細(xì)胞產(chǎn)生IFN來(lái)激發(fā)抗菌效應(yīng)[9]。本文通過(guò)對(duì)慢性盆腔炎中IL-26表達(dá)的研究，觀(guān)察IL-26在其中所發(fā)揮的作用，并探究其具體作用機(jī)制，為臨床治療慢性盆腔炎提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 病例采集 收集臨床60例慢性盆腔炎患者[平均年齡(35.4 ± 6.7)歲]和60例健康對(duì)照者[平均年齡(35.9 ± 8.2)歲]的血清及盆腔液樣品，其中9例慢性盆腔炎患者處于急性發(fā)作期。此項(xiàng)研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，并獲得了所有患者的書(shū)面同意。

1.2 體液中各種炎癥因子的ELISA檢測(cè) 采用人ELISA試劑盒(R&D Systems)檢測(cè)血清和盆腔液中IL-26、IL-17和IL-37的表達(dá)，操作均按照試劑盒說(shuō)明嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3 細(xì)胞分離與培養(yǎng) 使用Ficoll Hypaque梯度離心法從9例慢性盆腔炎患者和隨機(jī)選取的10例健康對(duì)照者的外周血中分離出單核細(xì)胞，再用磁珠分選獲得純化的CD14+單核細(xì)胞，通過(guò)磁珠和流式細(xì)胞儀分選獲得CD4+CD45ROT細(xì)胞，將1×105/mL密度的CD4+CD45ROT細(xì)胞和5×103/mL密度的CD14+單核細(xì)胞在含有2 % FCS、100 U / mL青霉素和鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中共培養(yǎng)，并加入IL-26和抗-CD3單抗進(jìn)行刺激。培養(yǎng)7 d后，檢測(cè)培養(yǎng)上清液IL-17和IL-37的水平。

1.4 C-反應(yīng)蛋白的測(cè)定 采用常規(guī)貝克曼生化自動(dòng)分析儀，采用免疫比濁法測(cè)定CRP。正常范圍的上限為5 mg/L。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 使用Graphpad 5.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩變量間采用直線(xiàn)相關(guān)分析，多組間采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-26在慢性盆腔炎中表達(dá)上調(diào) 收集慢性盆腔炎患者(60名，含51名非急性期患者和9名急性發(fā)作期患者)及健康對(duì)照者血清和盆腔液樣本，ELISA檢測(cè)IL-26表達(dá)情況。結(jié)果表明慢性盆腔炎患者較健康對(duì)照者血清(t=5.25,P<0.001)和盆腔液中(t=4.16,P<0.01) IL-26表達(dá)水平上調(diào)(見(jiàn)圖1A、C)。在對(duì)慢性盆腔炎患者急性期(51例)和非急性期(9例)的血清IL-26水平的比較發(fā)現(xiàn)，慢性盆腔炎急性發(fā)作期時(shí)血清中IL-26水平較非急性發(fā)作期低(見(jiàn)圖1B，t=3.27,P<0.05)。

A.慢性盆腔炎患者與健康對(duì)照者血清IL-26水平(P<0.001);B.慢性盆腔炎急性發(fā)作患者與非急性發(fā)作患者血清IL-26水平(P<0.05);C.慢性盆腔炎患者與健康對(duì)照者盆腔液IL-26水平(P<0.01)。1.慢性盆腔炎；2.健康對(duì)照者；3.慢性盆腔炎急性發(fā)作；4.慢性盆腔炎非急性發(fā)作。

*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

圖1 IL-26在慢性盆腔炎中表達(dá)上調(diào)

2.2 血清及盆腔穿刺液中IL-26的表達(dá)與IL-17及IL-37表達(dá)的相關(guān)性 收集慢性盆腔炎患者血清及盆腔穿刺液，ELISA分別測(cè)定樣本中IL-26、IL-17、IL-37的表達(dá)，分析IL-26與IL-17及IL-37表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果表明，在血清及盆腔液中IL-26的表達(dá)與IL-17的表達(dá)呈正相關(guān)(圖2A、B)，而與IL-37的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(圖2 C、D)。

2.3 IL-26促進(jìn)Th17型細(xì)胞因子的產(chǎn)生并抑制Treg型細(xì)胞因子的產(chǎn)生 將9例慢性盆腔炎急性發(fā)作患者和健康對(duì)照者的CD4+T細(xì)胞和單核細(xì)胞分別共培養(yǎng)，并加入IL-26和抗-CD3抗體刺激，通過(guò)ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中IL-17(F=49.53,P<0.01)、IL-23(F=17.26,P<0.01)、IL-10(F=69.97,P<0.01)和TGF-β1(F=11.15,P<0.01)的水平。結(jié)果表明IL-26可促進(jìn)Th17型細(xì)胞因子(IL-17、IL-23)的分泌而抑制Treg型細(xì)胞因子(IL-10、TGF-β)的產(chǎn)生。

A.患者血清中IL-17與IL-26相關(guān)性分析；B.患者盆腔液中IL-17與IL-26相關(guān)性分析；C.患者血清中IL-37與IL-26相關(guān)性分析；D.患者盆腔液中IL-37與IL-26相關(guān)性分析。

圖2 兩種體液中IL-26與IL-17及IL-37含量的相關(guān)性分析

A.細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-17的表達(dá)；B.細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-23的表達(dá)；C.細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-10的表達(dá)；D.細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-β1的表達(dá)。

*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

圖3 ELISA檢測(cè)IL-17、IL-23和IL-10、TGF-β1的表達(dá)

3 討論

本研究通過(guò)對(duì)慢性盆腔炎患者體內(nèi)IL-26及與Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)T細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞因子的檢測(cè)，結(jié)果顯示，和健康對(duì)照組相比，慢性盆腔炎患者血清中IL-26增高，且增高程度與該病活動(dòng)度呈正相關(guān)。并且，IL-26的表達(dá)促進(jìn)Th17細(xì)胞相關(guān)因子IL-17和IL-23的表達(dá)水平，抑制調(diào)節(jié)T細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞因子IL-10和TGF-β的表達(dá)。

慢性盆腔炎是女性生殖系統(tǒng)中常見(jiàn)的疾病，是由于生殖器官被病原體感染發(fā)生炎癥導(dǎo)致。有研究發(fā)現(xiàn)，在病人血清和人工培養(yǎng)的外周淋巴細(xì)胞中致炎因子IL-17、 TNF-α、 IL-6 和IL-1β抑制因子均增多[10-11]。但是目前為止，引起這些促炎因子產(chǎn)生的因素還不明確，在血清、盆腔穿刺液中，IL-26與IL-17均呈正相關(guān)，與IL-26和IL-17呈負(fù)相關(guān)的IL-37可能在慢性盆腔炎中起到抗炎作用。

鑒于IL-26和 IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β在免疫調(diào)控中的相互關(guān)聯(lián)性，有研究報(bào)道其能夠誘導(dǎo)Th17細(xì)胞和促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，推測(cè)IL-26可能處于炎癥反應(yīng)中的上游[12]。而Th17相關(guān)細(xì)胞因子在慢性盆腔炎的病理生理中起到重要作用，這種作用在 IL-10 和TGF-β表達(dá)降低時(shí)更為顯著[13]。

IL-26通過(guò)誘導(dǎo)IL-17和IL-23的產(chǎn)生，進(jìn)而誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞的生成，有研究表示TNF-β可以誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的生成，也有研究表示IL-26不能促進(jìn)TNF-β的產(chǎn)生，并且TNF-β可以反過(guò)來(lái)抑制IL-26產(chǎn)生[14]。我們的研究顯示，TNF-β和IL-10的低表達(dá)提示Th17相關(guān)細(xì)胞因子分泌增強(qiáng)和調(diào)節(jié)T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子分泌降低。

IL-37是一種抗炎因子，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IL-37與IL-26存在相關(guān)性，有文獻(xiàn)認(rèn)為IL-26具有抗炎和致炎雙向作用，原始致炎因子和炎癥細(xì)胞的趨化作用引起IL-26的基因表達(dá)和蛋白分泌[15]，本實(shí)驗(yàn)也證明IL-26是一種致炎因子。有關(guān)外周血中Th17細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)IL-26的基因表達(dá)與IL-17A存在相關(guān)性[16]，另外，有關(guān)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究認(rèn)為，炎癥部位的Th17細(xì)胞能產(chǎn)生IL-26，CD4+T記憶細(xì)胞可以促進(jìn)IL-17A的表達(dá)和分泌[17]。

本研究發(fā)現(xiàn)IL-26對(duì)炎癥介質(zhì)還有正調(diào)節(jié)作用，從而形成局部炎癥反應(yīng)中放大環(huán)路，已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞分泌IL-26受Th17細(xì)胞的分化階段和細(xì)胞微環(huán)境的影響。之前有研究在克羅恩病病人的病變結(jié)腸和牛皮癬患者的病變皮膚中發(fā)現(xiàn)IL-26表達(dá)，在一個(gè)基因相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，IL-26基因存在單核苷酸多態(tài)性(SNP)是炎性腸病和關(guān)節(jié)炎的易感因素。IL-26還可以促進(jìn)PDC分泌INF-α進(jìn)而激活固有免疫引起細(xì)胞和組織損傷，這些發(fā)現(xiàn)均提示IL-26在自身免疫中起一定作用[10,12,15]。本實(shí)驗(yàn)中，慢性盆腔炎患者體內(nèi)IL-26過(guò)度表達(dá)，IL-26促進(jìn)表皮細(xì)胞分泌炎癥因子和Th17細(xì)胞的生成，說(shuō)明IL-26在慢性炎性疾病的發(fā)病機(jī)制中起到了促進(jìn)作用。

綜上所述，我們的研究表明慢性盆腔炎患者體內(nèi)IL-26表達(dá)增強(qiáng)并且與疾病活動(dòng)性有關(guān)，可能位于炎癥瀑布式放大反應(yīng)的上游，IL-26也許可以成為慢性盆腔炎新的治療靶點(diǎn)。