王 根 趙 芳 高 超 趙國(guó)棟 李曉斌 馬 晨 楊開(kāi)倫

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆肉乳用草食動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830052)

哺乳動(dòng)物體內(nèi)褪黑素(melatonin,ML)是主要由松果體和腸黏膜合成和分泌的一種吲哚類激素，廣泛分布在很多器官、組織和細(xì)胞中[1-2]。研究顯示，ML可促進(jìn)綿羊卵母細(xì)胞成熟[3]、維持精子功能[4]、促進(jìn)胚胎發(fā)育[5]和提高機(jī)體的抗氧化能力[6]，因此適當(dāng)提高綿羊體內(nèi)ML含量可能對(duì)其生殖和抗氧化性能具有重要的意義。色氨酸(tryptophan,Trp)作為動(dòng)物體內(nèi)一種重要的功能性氨基酸同時(shí)也是ML合成的前體物質(zhì)，在體內(nèi)經(jīng)羥化、脫羧、乙?；图谆纬蒑L。Huenther等[7]證實(shí)在鼠和雞飼糧中添加或腹腔注射150～300 mg/(kg BW·d) Trp后1 h血漿ML含量顯著增加，且存在劑量效應(yīng)；由于反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)棲居大量的微生物，Trp易被降解為吲哚、吲哚乙酸、糞臭素等物質(zhì)，故直接飼喂反芻動(dòng)物不能達(dá)到理想目的，而瘤胃保護(hù)性色氨酸(rumen protected tryptophan,RPTrp)可以有效降低其在瘤胃中的降解。研究表明，遼寧絨山羊添喂6 g/(只·d) RPTrp(Trp含量為33%)，第30、60、90天血漿Trp含量顯著提高[8]。本課題組在前期奶牛試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，添喂RPTrp可提高血漿Trp含量及夜間血漿ML含量[9]。早期研究表明，腹腔注射500 mg/(kg BW·d) Trp，綿羊血漿ML含量并未增加[10]。為進(jìn)一步證實(shí)能否通過(guò)提高綿羊腸道Trp吸收量來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體ML含量，本試驗(yàn)選擇綿羊?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物模型，通過(guò)在飼糧中添加一定量的Trp、RPTrp，測(cè)定綿羊血漿中Trp及5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)、ML等主要代謝物含量的變化，為通過(guò)飼糧中添加Trp或RPTrp來(lái)調(diào)節(jié)綿羊機(jī)體內(nèi)ML的含量提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

本試驗(yàn)于2017年6月至2017年7月在新疆惠康畜牧生物科技有限公司羊場(chǎng)進(jìn)行，自然光照條件。采樣當(dāng)天日出時(shí)間為06:37、日落時(shí)間為21:54，晝長(zhǎng)15.27 h。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇年齡(3.0±0.5)歲、平均體重(53.49±2.41) kg、健康的薩?？司d羊15只。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)羊只單欄位飼養(yǎng)，每天每只羊的Trp、RPTrp、精料和玉米青貯平均分成2份，分別于08:00、20:00飼喂。為保證補(bǔ)喂的Trp或RPTrp采食完全，將Trp或RPTrp與50 g精料混勻后飼喂，待綿羊采食完畢后再投喂剩余精料、玉米青貯，自由采食混合干草，自由飲水。根據(jù)試驗(yàn)羊場(chǎng)的飼養(yǎng)管理規(guī)定，定期打掃圈舍。綿羊干物質(zhì)采食量見(jiàn)表2。

1.5 樣品的采集與處理

1.6 指標(biāo)的測(cè)定

血漿用于測(cè)定總色氨酸(total tryptophan,T-Trp)、Kyn、白蛋白(albumin,ALB)、游離脂肪酸(free fatty acids,FFA)、5-HT、ML含量；上午飼喂后0 h時(shí)采集的血漿測(cè)定總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量；超濾管制備的血漿用于測(cè)定游離色氨酸(free tryptophan,F-Trp)含量。

利用高效液相色譜法測(cè)定血漿T-Trp、Kyn含量[12]，血漿F-Trp含量測(cè)定參考謝占武等[13]的比色法進(jìn)行。血漿ALB、FFA含量，上午飼喂后0 h時(shí)血漿T-AOC，GSH-Px、SOD活性，MDA含量送至南京建成生物工程研究所采用比色法檢測(cè)。血漿5-HT、ML含量由北京華英生物技術(shù)研究所采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) %

1)每千克精料含有 One kg of concentrate contained the following:玉米 corn 0.44 kg，燕麥 oat 0.16 kg，大麥 barley 0.15 kg，豆粕 soybean meal 0.20 kg，CaHPO40.03 kg，NaCl 0.01 kg，預(yù)混料 premix 0.01 kg。預(yù)混料為每千克精料提供 The premix provided the following per kg of the concentrate: VA 480 IU，VB1816 mg, VB2333 mg，VB649 mg，VD 70 U，VE 21 333 IU，泛酸 pantothenic acid20 mg，煙酰胺 nicotinamide 485 mg，Cu (as copper sulfate) 11 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate)35 mg，Mn (as manganese sulfate) 33 mg，Zn (as zinc sulfate)31 mg，I (as potassium iodide) 2 mg，Se (as sodium selenite) 6 mg，Co (as cobalt chloride) 1 mg。
2)色氨酸含量為計(jì)算值，其他營(yíng)養(yǎng)水平為實(shí)測(cè)值。Trp was a calculated value, while the other nutrient levels were measured values.

表2 綿羊干物質(zhì)采食量Table 2 Dry matter intake of sheep g/d

1.7 數(shù)據(jù)處理

用Excel 2010進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)整理，SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，以P<0.05和P<0.01分別為差異顯著和極顯著的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿T-Trp含量的變化

由表3可知，上午飼喂后，對(duì)照組綿羊血漿T-Trp含量在0～6 h呈現(xiàn)出下降后又上升的變化趨勢(shì)，6～10 h變化幅度較小，維持在30.61～32.95 μmol/L的范圍內(nèi)；試驗(yàn)Ⅰ組在0～2 h快速升高，2 h時(shí)極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，2～4 h快速降低，4～10 h變化趨勢(shì)與對(duì)照組相似，2組間差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)Ⅱ組血漿T-Trp含量與對(duì)照組相比均有所提高，變化趨勢(shì)相似，且在6 h時(shí)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。下午飼喂后，對(duì)照組和試驗(yàn)組血漿T-Trp含量變化趨勢(shì)與上午飼喂后相似。總體而言，與對(duì)照組相比，補(bǔ)喂Trp可短時(shí)迅速提高綿羊血漿T-Trp含量，而補(bǔ)喂RPTrp可持續(xù)小幅度提高血漿T-Trp含量。

表3 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿T-Trp含量的影響Table 3 Effects of Trp and RPTrp supplementations on plasma T-Trp content of sheep (n=5) μmol/L

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。
In the same row, values with the same or no letter superscripts mean no significant different (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant different (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below.

2.2 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿F-Trp含量的變化

由表4可知，上午飼喂后，對(duì)照組血漿F-Trp含量在0～8 h變化較小，維持在7.39～7.98 μmol/L，8～10 h至下午飼喂后0 h從7.56 μmol/L持續(xù)升高至9.26 μmol/L；試驗(yàn)Ⅰ組血漿F-Trp含量在上午飼喂后2 h時(shí)極顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅱ組(P<0.01)，對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅱ組間差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)Ⅱ組在上午飼喂后2～6 h持續(xù)緩慢升高，在上午飼喂后6 h顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組(P<0.05)，對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組間差異不顯著(P>0.05)。下午飼喂后，試驗(yàn)組與上午飼喂后變化趨勢(shì)基本一致；對(duì)照組血漿F-Trp含量在下午0～10 h呈先下降后升高的趨勢(shì)，在下午飼喂后4 h顯著低于試驗(yàn)組(P<0.05)，試驗(yàn)組間差異不顯著(P>0.05)。

表4 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿F-Trp含量的影響Table 4 Effects of Trp and RPTrp supplementations on plasma F-Trp content of sheep (n=5) μmol/L

續(xù)表4采樣時(shí)間Sampling time時(shí)鐘點(diǎn)Clock time對(duì)照組Control group試驗(yàn)Ⅰ組Trial group Ⅰ試驗(yàn)Ⅱ組Trial group Ⅱ上午飼喂后10 h 10 h after feeding in the morning18:008.93±1.828.67±0.848.61±0.73下午飼喂后0 h 0 h after feeding in the afternoon19:309.26±1.929.00±1.629.80±2.21下午飼喂后2 h 2 h after feeding in the afternoon22:007.60±0.70Bb12.25±1.31Aa8.50±0.73Bb下午飼喂后4 h 4 h after feeding in the afternoon00:006.78±0.48b8.80±1.10a9.46±1.80a下午飼喂后6 h 6 h after feeding in the afternoon02:007.21±1.378.19±1.058.87±0.99下午飼喂后8 h 8 h after feeding in the afternoon04:007.61±1.547.62±1.019.39±0.93下午飼喂后10 h 10 h after feeding in the afternoon06:007.99±1.388.40±1.349.11±1.22

2.3 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿ALB含量的變化

由表5可知，上午飼喂后，對(duì)照組綿羊血漿ALB含量呈先升高后降低的變化趨勢(shì)，試驗(yàn)組與對(duì)照組變化趨勢(shì)相似，但血漿ALB含量峰值出現(xiàn)延遲，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組分別出現(xiàn)在上午飼喂后4和6 h；上午飼喂后各組間差異均不顯著(P>0.05)。下午飼喂后，對(duì)照組和試驗(yàn)組綿羊血漿ALB含量變化趨勢(shì)基本一致，均出現(xiàn)2個(gè)峰值，分別在下午飼喂后4和10 h，各組間差異也不顯著(P>0.05)。

4.支持開(kāi)發(fā)核心技術(shù)，保障網(wǎng)絡(luò)安全。習(xí)近平總書記指出： “網(wǎng)絡(luò)安全的本質(zhì)在對(duì)抗，對(duì)抗的本質(zhì)在攻防兩端能力較量?！钡胤秸y(tǒng)籌推動(dòng)網(wǎng)絡(luò)核心技術(shù)創(chuàng)新，支持本地企業(yè)、高校、科研機(jī)構(gòu)等突破核心技術(shù)，加強(qiáng)對(duì)工業(yè)互聯(lián)網(wǎng)、人工智能、大數(shù)據(jù)等新技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域安全技術(shù)研究，構(gòu)建多領(lǐng)域、多層次的網(wǎng)絡(luò)核心技術(shù)體系。要積極培育壯大網(wǎng)絡(luò)安全產(chǎn)品服務(wù)市場(chǎng)，引導(dǎo)通信、能源、金融、交通等重要行業(yè)、重要領(lǐng)域加大關(guān)鍵信息基礎(chǔ)設(shè)施網(wǎng)絡(luò)安全投入，并不斷優(yōu)化網(wǎng)絡(luò)產(chǎn)業(yè)生態(tài)，營(yíng)造有利于網(wǎng)絡(luò)產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展的地方環(huán)境，努力將核心技術(shù)牢牢掌握在自己手里，加快推進(jìn)國(guó)產(chǎn)自主可控替代，構(gòu)建安全可控的信息技術(shù)體系。

表5 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿ALB含量的影響Table 5 Effects of Trp and RPTrp supplementations on plasma ALB content of sheep (n=5) g/L

2.4 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿FFA含量的變化

由表6可知，上午飼喂后，各組綿羊血漿FFA含量呈先降低后升高的變化趨勢(shì)；試驗(yàn)組在4 h至下午飼喂后0 h均低于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。下午飼喂后，各組血漿FFA含量變化趨勢(shì)與上午飼喂后相似，但試驗(yàn)組在下午飼喂后0～2 h降低較快，下午飼喂后2 h時(shí)極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)；其余時(shí)間點(diǎn)，各組間差異均不顯著(P>0.05)。

2.5 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿Kyn含量的變化

由表7可知，上午飼喂后，對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅱ組綿羊血漿Kyn含量變化幅度均較小，分別維持在3.19～3.79 μmol/L和3.56～4.35 μmol/L，各時(shí)間點(diǎn)試驗(yàn)Ⅱ組均高于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組血漿Kyn含量在0～2 h快速升高，2 h時(shí)顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅱ組(P<0.05)。下午飼喂后，對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅱ組綿羊血漿Kyn含量在2～8 h持續(xù)小幅升高，2組間差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)Ⅰ組的變化趨勢(shì)與上午飼喂后相似，在2 h時(shí)顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅱ組(P<0.05)。

表6 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿FFA含量的影響Table 6 Effects of Trp and RPTrp supplementations on plasma FFA content of sheep (n=5) g/L

表7 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿Kyn含量的影響Table 7 Effects of Trp and RPTrp supplementations on plasma Kyn content of sheep (n=5) μmol/L

2.6 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿5-HT含量的變化

由表8可知，上午飼喂后，各組綿羊血漿5-HT含量均出現(xiàn)先降低后升高再降低的變化趨勢(shì)，均在8 h時(shí)達(dá)到峰值；10 h時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，試驗(yàn)Ⅰ組與對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅱ組間差異均不顯著(P>0.05)；下午飼喂后，0～6 h時(shí)，各組血漿5-HT含量緩慢升高，而在6～10 h升高較快，8 h時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組(P<0.05)，而對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組間差異不顯著(P>0.05)。

2.7 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿ML含量的變化

由表9可知，上午飼喂后，試驗(yàn)組血漿ML含量在2～8 h呈持續(xù)增加趨勢(shì)，其中在6、8 h時(shí)，試驗(yàn)組均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，試驗(yàn)組間差異不顯著(P>0.05)；對(duì)照組增加幅度較小。下午飼喂后，2～10 h時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組血漿ML含量變化幅度最小，維持在87.19～98.34 pg/mL，在各采樣點(diǎn)均高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組，其中在4、8 h時(shí)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，試驗(yàn)Ⅰ組與對(duì)照組間差異不顯著(P>0.05)。

表8 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿5-HT含量的影響Table 8 Effects of Trp and RPTrp supplementations on plasma 5-HT content of sheep (n=5) ng/mL

表9 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿ML含量的影響Table 9 Effects of Trp and RPTrp supplementations on plasma ML content of sheep (n=5) pg/mL

2.8 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿抗氧化能力的變化

由表10可知，試驗(yàn)組血漿GSH-Px活性極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，而MDA含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)；試驗(yàn)Ⅱ組血漿T-AOC極顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組(P<0.01)。

3 討 論

3.1 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿T-Trp、F-Trp、FFA和ALB含量的變化

本試驗(yàn)顯示，上午和下午補(bǔ)喂Trp或RPTrp后，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組綿羊血漿T-Trp、F-Trp含量在2 h(10:00、22:00)時(shí)極顯著升高。研究表明，給羊瘤胃灌胃一定量放射性同位素[14C]標(biāo)記吲哚環(huán)的Trp，10 min后即可在肝門靜脈血漿檢測(cè)到Trp，且在3 h內(nèi)有25%～70%會(huì)被吸收進(jìn)入肝門靜脈[14]。試驗(yàn)Ⅰ組血漿T-Trp和F-Trp含量在飼喂后0～2 h快速升高，可能與部分溶于瘤胃液的Trp隨瘤胃的蠕動(dòng)快速過(guò)瘤胃有關(guān)，也可能與本試驗(yàn)中先將Trp與50 g精料混勻后飼喂有關(guān)。試驗(yàn)Ⅱ組綿羊血漿T-Trp含量在飼喂后6 h(14：00)時(shí)顯著升高，F(xiàn)-Trp含量在飼喂后6(14：00)和4 h(00：00)時(shí)也顯著升高。Kollmann等[15]給奶牛添喂500 g/(d·頭)RPTrp(Trp含量為25%)后，白天和夜間血漿T-Trp含量均顯著提高；補(bǔ)喂6 g/(只·d) RPTrp(Trp含量為33%)可顯著提高遼寧絨山羊血漿T-Trp含量[8]；以上研究均與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)Ⅰ組血漿T-Trp含量在飼喂后2～4 h(10:00—12:00、22:00—24:00)低于對(duì)照組，而試驗(yàn)Ⅱ組變化幅度較小且高于對(duì)照組說(shuō)明RPTrp有效避免在瘤胃中的降解[16]。下午飼喂后，試驗(yàn)Ⅱ組血漿T-Trp含量高于對(duì)照組，但差異不顯著，與Kollmann等[15]研究結(jié)果不一致，這可能與綿羊采食時(shí)間和飼糧的組成有關(guān)。

表10 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿抗氧化能力的影響Table 10 Effects of Trp and RPTrp supplementations on plasma antioxidant capacity of sheep (n=5)

本試驗(yàn)中，各組綿羊血漿FFA含量在白天和夜間均呈先降低后升高的變化趨勢(shì)，這是由于FFA在反芻動(dòng)物消化道的吸收部位主要在空腸后3/4處，而在瘤胃內(nèi)吸收較慢。此外，研究表明，煙酸作為Trp代謝的主要產(chǎn)物之一，是一種抗脂類分解的物質(zhì)[17]。奶牛飼喂12 g/(頭·d)的煙酸，血漿FFA含量顯著降低[18]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組血漿FFA含量降低可能與血漿煙酸含量升高有關(guān)。研究表明，血漿ALB分子性質(zhì)穩(wěn)定、幾乎不含Trp殘基[19]，消除半衰期較長(zhǎng)，為12.7～18.2 d[20]，合成和降解機(jī)制復(fù)雜、尚未完全清楚[21]。有學(xué)者認(rèn)為，血漿ALB含量主要受血漿膠體滲透壓的調(diào)節(jié)[22]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組間血漿ALB含量無(wú)顯著性差異，說(shuō)明補(bǔ)喂Trp或RPTrp對(duì)綿羊血漿ALB含量無(wú)顯著性影響。

3.2 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿Kyn含量的變化

本試驗(yàn)中，補(bǔ)喂Trp或RPTrp后，綿羊血漿Kyn含量與T-Trp和F-Trp變化趨勢(shì)相似。這與成年健康男子口服Trp后血漿Kyn含量增加的研究結(jié)果一致[23]。哺乳動(dòng)物體內(nèi)Trp約95%經(jīng)Kyn途徑代謝，主要由肝臟色氨酸-2，3雙加氧酶(tryptophan-2，3-dioxygenase,TDO)催化形成Kyn[24]。研究表明，大鼠腹腔注射100 mg/(kg BW·d) Trp后3 h，血漿F-Trp含量顯著增加，且肝臟中TDO活性顯著提高[25]。此外，飼糧中添加Trp后，仔豬肝TDO含量有增加的趨勢(shì)[26]。本試驗(yàn)結(jié)果可能與綿羊肝臟TDO活性升高或含量增加有關(guān)。

3.3 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿5-HT含量的變化

本試驗(yàn)中，上午飼喂后10 h(16:00)和下午飼喂后8 h(04:00)，試驗(yàn)Ⅱ組血漿5-HT含量顯著高于對(duì)照組，而試驗(yàn)Ⅰ組與對(duì)照組在白天和夜間差異均不顯著。研究表明，5-HT是哺乳動(dòng)物體內(nèi)Trp代謝的一個(gè)重要產(chǎn)物，血漿中5-HT主要由腸黏膜嗜鉻細(xì)胞(chromaffin cells,EC)產(chǎn)生和分泌[27]，肥大細(xì)胞、胰腺β細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞也可分泌少量5-HT[28]，色氨酸羥化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)是合成5-HT的關(guān)鍵酶。隨飼糧Trp含量的增加(0.11%～0.24%)，仔豬血清5-HT含量顯著提高[29]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。但也有學(xué)者證實(shí)，補(bǔ)喂RPTrp后泌乳奶牛血漿5-HT含量無(wú)顯著性升高[9]，與本試驗(yàn)結(jié)果不一致，這可能與泌乳奶牛腸黏膜EC中TPH活性較低或含量較少有關(guān)。研究表明，TPH的米氏常數(shù)(Km)約為50 μmol/L[30]；其活性受底物Trp和輔酶四氫生物蝶呤等多種因素的影響[31]；EC內(nèi)TPH含量較低或輔酶含量不足均抑制5-HT的合成與分泌。

3.4 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿ML含量的變化

本試驗(yàn)中，上午飼喂后6～8 h(14:00—16:00)時(shí)，試驗(yàn)組血漿ML含量極顯著高于對(duì)照組；下午飼喂后，試驗(yàn)Ⅱ組均高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組。研究表明，哺乳動(dòng)物血漿ML在白天主要來(lái)自于腸黏膜嗜EC而夜間主要來(lái)自于松果體，存在明顯的晝夜節(jié)律[32-33]。給(22±3)月齡未妊娠瑞士褐牛添喂500 g/(頭·d)RPTrp(Trp含量為25%)后，白天血漿ML含量極顯著升高，而夜間顯著升高[15]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。此外，前人研究表明，豬血漿ML含量最高值出現(xiàn)在上午飼喂后5 h，且與回腸、盲腸和結(jié)腸中ML含量呈顯著相關(guān)性[34]。本試驗(yàn)中，上午飼喂后4～8 h(12:00—16:00)，試驗(yàn)組血漿ML含量呈增加趨勢(shì)，可能與綿羊回腸、盲腸和結(jié)腸中ML含量升高有關(guān)。本試驗(yàn)未檢測(cè)綿羊腸道內(nèi)ML含量，今后可進(jìn)一步研究血漿ML含量與腸道內(nèi)ML含量的關(guān)系。

本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組血漿ML含量最高值均出現(xiàn)在上午飼喂后8 h(16:00)，對(duì)照組出現(xiàn)在下午飼喂后2 h(22:00)，并未表現(xiàn)出明顯的晝夜節(jié)律。這可能與以下原因有關(guān)：其一，哺乳動(dòng)物血漿ML含量具有明顯的季節(jié)變化規(guī)律，本試驗(yàn)采樣當(dāng)天日出時(shí)間為06:36，日落時(shí)間為21:53，晝長(zhǎng)為15.27 h，長(zhǎng)日照條件下，松果體內(nèi)ML合成關(guān)鍵酶N-乙酰轉(zhuǎn)移酶表達(dá)量降低[35]，減弱了夜間松果體ML的分泌；其二，綿羊血漿ML含量具有顯著的個(gè)體差異[36]，在夜間其雙側(cè)頸靜脈ML含量也具有顯著的差異[37]。

3.5 補(bǔ)喂Trp、RPTrp后綿羊血漿抗氧化能力的變化

本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組血漿GSH-Px活性和MDA含量與對(duì)照組相比差異均極顯著，試驗(yàn)Ⅱ組還可極顯著提高血漿T-AOC。研究表明，斷奶仔豬飼糧中添加適量Trp可顯著提高血清T-AOC和降低MDA含量[26]。飼糧中添喂220 g/(d·頭)RPTrp(Trp含量為45%)可使奶牛血漿GSH-Px活性極顯著提高，與本試驗(yàn)結(jié)果一致[9]。這是由于補(bǔ)喂Trp或RPTrp提高了血漿Trp和ML含量，Trp分子中的氨基可以與氧化劑結(jié)合，阻礙氧化反應(yīng)的發(fā)生，降低血漿MDA含量[38]。ML除直接發(fā)揮抗氧化作用外還可通過(guò)提高抗氧化酶活性發(fā)揮作用；此外，ML代謝產(chǎn)物N-乙酰基-N-甲?；?5-甲氧基-犬脲胺和6-羥基褪黑素均具有更強(qiáng)的抗氧化作用[39]。

4 結(jié) 論

① 補(bǔ)喂Trp使綿羊采食后血漿T-Trp、F-Trp的含量迅速升高，Trp經(jīng)犬尿酸途經(jīng)代謝也迅速加快，而補(bǔ)喂RPTrp時(shí)上述作用則較平緩。

② 補(bǔ)喂Trp、RPTrp對(duì)綿羊血漿ALB、FFA、5-HT含量影響較小，僅有個(gè)別時(shí)間點(diǎn)作用顯著。

③ 補(bǔ)喂Trp、RPTrp使綿羊白天血漿中ML含量升高，補(bǔ)喂Trp對(duì)夜間綿羊血漿中ML含量沒(méi)有顯著影響，補(bǔ)喂RPTrp可使綿羊夜間血漿ML含量維持在相對(duì)較高的水平上。

④ 補(bǔ)喂Trp、RPTrp可提高綿羊血漿抗氧化能力。