王承東，高 琪，李德生，張和民，鄧林華，吳虹林，陳正禮，*

(1.中國大熊貓保護研究中心，四川 都江堰 611844； 2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院 實驗動物疾病模型研究室，四川 成都 611130)

大熊貓是我國特有的珍稀動物，被譽為“活化石”和“中國國寶”，現(xiàn)存的主要棲息地是中國四川、陜西和甘肅的山區(qū)，具有極高的研究價值和觀賞價值[1]。野外大熊貓的壽命為18～20歲，圈養(yǎng)狀態(tài)下可以超過30歲。原發(fā)性肝癌是指起源于肝細胞和肝內(nèi)膽管上皮細胞的惡性腫瘤，其中，以肝細胞癌和肝內(nèi)膽管癌最為常見[2]。肝細胞癌是全球第六常見的腫瘤，也是癌癥死亡的三大原因之一。2008年全球診斷出這種惡性疾病超過70萬例，發(fā)病率為每10萬人中16例。肝細胞癌是肝硬化患者死亡的主要原因[3]。本文對一例大熊貓保護研究中心飼養(yǎng)的因原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移致多器官功能障礙甚至衰竭而死亡的大熊貓病例進行了詳細的病理形態(tài)學(xué)研究，旨在探討大熊貓肝細胞癌的病理特征，為臨床診斷與大熊貓原發(fā)性肝癌的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

大熊貓“盼盼”，雄性，31歲。體重自2014年起呈明顯下降趨勢，2016年3月發(fā)現(xiàn)其白細胞數(shù)目和粒細胞數(shù)目均增高，堿性磷酸酶(ALP)明顯升高，并對其采取了相應(yīng)治療措施。2016年4月，發(fā)現(xiàn)其左側(cè)肛周腺上出現(xiàn)粉紅色菜花樣贅生物，可見少量血絲附著，肛周腺氣味濃烈。一周后觀察發(fā)現(xiàn)贅生物有明顯擴增趨勢。分別于5月31日、6月5日采集其血樣及肛周贅生物組織，進行腫瘤標(biāo)志物的檢查與病理活檢，確診為鱗狀細胞癌。2016年10月下旬以來，“盼盼”的腹圍明顯增加，體重顯著增加，多項血液生理指標(biāo)出現(xiàn)異常。于11月17日對其實施麻醉，進行CT檢查，發(fā)現(xiàn)其肝臟下緣腹腔內(nèi)存在一個巨大的軟組織密度腫塊，大小約為15 cm×11 cm×9 cm，且腹腔見大量積液，疑為腫瘤占位性病變。經(jīng)專家會診后采取保守治療，加強飼養(yǎng)管理，增強營養(yǎng)，讓其帶瘤生存。2016年12月28日，“盼盼”因多器官功能衰竭死亡。

1.2 病理學(xué)檢查方法

對死亡大熊貓進行系統(tǒng)解剖，觀察并詳細記錄各臟器的病理變化。取肝臟、胰腺、胃、十二指腸、結(jié)腸、直腸、心臟、肺臟、腎臟、膀胱、脾臟、甲狀腺、頜下腺、腸系膜淋巴結(jié)、頜下淋巴結(jié)、睪丸、肛周皮膚組織、前肢肌、后肢肌，以及肝左葉腫塊、膈肌腫塊、腸系膜腫塊、腋下腫塊、腹膜腫塊，組織標(biāo)本用4%多聚甲醛磷酸緩沖液固定，常規(guī)方法石蠟包埋、切片。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin， HE)染色后在光鏡下觀察組織病理變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 病理剖檢

尸體體形消瘦，腹部腫大，全身脂肪量少。右側(cè)腋下有一腫塊，大小約7.9 cm×4.6 cm，游離性弱，腫塊質(zhì)地較硬，被膜較厚，界限清晰，表面血管豐富，內(nèi)部呈膠凍狀，切面可見少量鈣化結(jié)節(jié)(圖1-A)。右肺可見出血灶。腹膜黃染、增厚，可見大量實質(zhì)性組織團塊附著。腹腔積液總質(zhì)量31 kg。腹腔左側(cè)，可見一大小約為20.5 cm×15.0 cm×11.0 cm的腫塊與肝臟左葉相連，靠近膽管位置，重1.9 kg，表面可見大量結(jié)節(jié)，質(zhì)地脆，內(nèi)部可見大量膿性分泌物、血樣物質(zhì)(圖1-B)。肝臟表面可見3處乳白色結(jié)節(jié)性增生，邊緣不整齊，切面可見化膿灶、鈣化灶(圖1-C)。左側(cè)膈肌可見點灶狀乳白色增生物，表面光滑。腸系膜上可見一黑色腫塊，約0.5 cm。直腸可見大量出血點。脾臟下半段明顯腫大。肛周皮膚散在小結(jié)節(jié)，附著血色分泌物，異味強，左下緣可見菜花樣結(jié)節(jié)，大小約為1.8 cm×1.9 cm(圖1-D)。右陰囊皮膚內(nèi)側(cè)散在結(jié)節(jié)。

A，右腋下腫塊切面；B，肝左葉腫塊切面；C，肝臟切面；D，肛周皮膚。A， Section of right armpit tumor; B， Section of left lobe of liver; C， Hepatic section; D， Perianal skin.

2.2 病理組織學(xué)觀察

肝臟彌漫性中重度脂肪變性，含鐵血黃素沉積，可見多灶性膿腫，細胞壞死(圖2-A)；肝細胞呈多角形，胞質(zhì)豐富，胞核大，核膜厚且核仁明顯，細胞有互相聚合傾向，細胞排列成梁狀，梁寬窄不一，小梁中的細胞呈腺樣、鵝卵石樣結(jié)構(gòu)，細胞異型增生，核質(zhì)比增大，致細胞密度增加(圖2-B)，疑似肝細胞癌[4-5]。胰腺輕度萎縮，可見少量細胞空泡變性并有空洞形成，出血(圖2-C)。十二指腸黏膜上皮細胞輕度脫落(圖2-D)。直腸黏膜末端上皮細胞輕度脫落，局部黏膜出血(圖2-E)。心臟心肌纖維斷裂，間質(zhì)腫脹、出血(圖2-F)。肺臟可見大部肺泡腔內(nèi)有纖維素性滲出，瘀血、出血(圖2-G)。腎臟大部腎小管上皮細胞脫落，部分腎小管上皮細胞出血凝固性壞死，可見炎性細胞浸潤，管腔內(nèi)可見異型性細胞團塊(圖2-H)，疑似腫瘤轉(zhuǎn)移。膀胱黏膜下有少量炎性細胞浸潤(圖2-I)。脾臟出血、血腫，淋巴細胞顯著減少(圖2-J)。甲狀腺部分腺泡顯著擴張，偶見腺上皮細胞脫落(圖2-K)。腸系膜淋巴結(jié)水腫，可見大量蛋白樣物質(zhì)沉積(圖2-L)。頜下淋巴結(jié)可見大量巨噬細胞增生(圖2-M)。睪丸間質(zhì)輕度水腫，未見成熟精子(圖2-N)。肛周皮膚組織由不規(guī)則表皮細胞團塊構(gòu)成，向真皮增生，可見大量正常鱗狀細胞和非典型鱗狀細胞間雜分布，以及細胞角化不良和角化珠的形成，組織內(nèi)可見炎癥反應(yīng)，判為鱗癌(圖2-O)。肌肉前肢肌輕度萎縮，間質(zhì)水腫增寬(圖2-P)，后肢肌間質(zhì)增寬。胃、結(jié)腸及頜下腺結(jié)構(gòu)正常。

肝臟左葉腫塊組織由分布不均的纖維成分隔開，細胞排列紊亂(圖3-A)，細胞核大，核膜厚且核仁明顯，核形不規(guī)則，可見異型性核分裂相(圖3-B)；膈肌腫塊細胞核質(zhì)比大，呈多形性，較大的清晰核仁，可見核分裂相(圖3-C)，疑似肝癌轉(zhuǎn)移；腸系膜小腫塊實為淋巴結(jié)，可見重度出血，淋巴細胞顯著減少(圖3-D)；右腋下腫塊可見大量纖維樣細胞及嗜酸性粒細胞樣細胞(圖3-E)；腹膜腫塊重度出血引起腫脹(圖3-F)。

3 討論

大熊貓尸檢可見大量腹水，肝臟左葉可見巨大腫瘤，肝組織內(nèi)可見多角形細胞，細胞排列呈腺樣、鵝卵石樣結(jié)構(gòu)，細胞異型增生，核質(zhì)比增大，致細胞密度增加，腫瘤組織可見明顯異型性核分裂相，疑似肝細胞癌[6]。腎組織內(nèi)可見部分腎小管壞死、大量炎性細胞浸潤，管腔內(nèi)可見異型性細胞團塊，疑似肝癌轉(zhuǎn)移[7]。膈肌腫瘤組織可見多形性細胞，且異型性核分裂相明顯，疑似肝癌轉(zhuǎn)移。心臟、肺臟、脾臟、胰腺、直腸組織可見明顯出血，腎臟、膀胱組織可見炎性細胞浸潤，腸系膜淋巴結(jié)、甲狀腺、睪丸、肌肉組織出現(xiàn)水腫。肛周組織病變顯示其患有鱗狀細胞癌[8]，但其相較于肝細胞腫瘤病變范圍小且未轉(zhuǎn)移，排除因鱗癌致死的可能性。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大熊貓肝細胞癌的主要表現(xiàn)與大鼠、兔、人的肝細胞癌病理變化相似，主要表現(xiàn)為瘤細胞呈多形性，異型性明顯，胞核增大，胞質(zhì)少，嗜堿性，可見較多畸形的單核、多核瘤巨細胞和核分裂相[9-10]。本研究在腎臟和膈肌腫塊中均發(fā)現(xiàn)了上述異形細胞，綜合全身組織器官病理學(xué)變化，推斷該例大熊貓患肝細胞癌并鄰近轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腎臟、心臟、肺臟、胰腺出現(xiàn)了嚴重的病理損傷，合并致機體功能障礙致死。

A， 肝臟(200×)；B， 肝臟(400×)；C， 胰腺(200×)；D， 十二指腸(200×)；E， 直腸(200×)；F， 心臟(200×)；G， 肺臟(200×)；H， 腎臟(200×)；I， 膀胱(200×)；J， 脾臟(200×)；K， 甲狀腺(200×)；L， 腸系膜淋巴結(jié)(100×)；M， 頜下淋巴結(jié)(400×)；N， 睪丸(200×);O， 肛周皮膚組織(200×)；P， 前肢肌肉(200×)。A， Liver (200×); B， Liver (400×); C， Pancreas (200×); D， Duodenum (200×); E， Rectum (200×); F， Heart (200×); G， Lung (200×); H， Kidney (200×); I， Bladder (200×); J， Spleen (200×); K， Thyroid (200×); L， Mesenteric lymph node (100×); M， Submandibular lymph node (400×); N， Testis (200×); O， Perianal skin tissue (200×); P， Forelimb muscle (200×).

A， 肝左葉腫塊(200×)；B， 肝左葉腫塊(400×)；C， 膈肌腫塊 (400×)；D， 腸系膜腫塊(200×)；E， 腋下腫塊(200×)；F， 腹膜腫塊(200×)。A， Left lobe of liver (200×); B， Left lobe of liver (400×); C， Diaphragmatic tumor (400×); D， Mesenteric tumor(200×); E， Armpit tumor (200×); F， Peritoneal tumor (200×).