蔡愛萍

（河北省保定市阜平縣農(nóng)業(yè)局，河北保定 073200）

豆粕是動(dòng)物生產(chǎn)中重要的蛋白來源，但豆粕中含有的抗?fàn)I養(yǎng)因子限制了動(dòng)物機(jī)體對(duì)養(yǎng)分的吸收利用（袁林，2012）。近年來，利用微生物發(fā)酵技術(shù)降解豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子成為主流，發(fā)酵豆粕可使豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子降低，大分子蛋白轉(zhuǎn)化為易消化吸收小肽，伴隨發(fā)酵過程還會(huì)產(chǎn)生維生素、消化酶和未知生長(zhǎng)因子（宋文心和邵慶均，2009）。隨著我國(guó)對(duì)豬肉安全問題的重視，無抗養(yǎng)殖成為趨勢(shì)，微生態(tài)產(chǎn)品也將逐漸替代抗生素。在豬日糧中添加發(fā)酵豆粕可改善豬的腸道健康，增強(qiáng)抵抗力，提高養(yǎng)殖效率。目前，發(fā)酵豆粕的研究多集中在仔豬階段，對(duì)生長(zhǎng)速度快、發(fā)病率高的生長(zhǎng)豬階段研究較少。本試驗(yàn)以生長(zhǎng)豬為試驗(yàn)動(dòng)物，研究發(fā)酵豆粕對(duì)生長(zhǎng)豬生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和抗氧化性能的影響，意在為生長(zhǎng)豬日糧中發(fā)酵豆粕添加量提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料 試驗(yàn)用發(fā)酵豆粕由日照東維飼料有限公司提供，粗蛋白質(zhì)≥48%、酸溶蛋白質(zhì)≥10%、乳酸≥3.5%。試驗(yàn)日糧為玉米-豆粕型生長(zhǎng)豬配合飼料，營(yíng)養(yǎng)水平參照豬NRC（2012）營(yíng)養(yǎng)需要量標(biāo)準(zhǔn)（見表1）。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì) 試驗(yàn)用生長(zhǎng)豬由新希望六和集團(tuán)提供，在山東新希望集團(tuán)嶺泉豬場(chǎng)進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)。將300頭杜長(zhǎng)大外三元生長(zhǎng)豬，按照健康狀況一致，公母比例相同，體重相近的原則隨機(jī)分為5組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭豬，采用圈養(yǎng)方式，每圈為一個(gè)重復(fù)。Ⅰ組為空白對(duì)照組，飼喂不添加發(fā)酵豆粕的基礎(chǔ)日糧，Ⅱ～Ⅴ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加2%、4%、6%、8%的發(fā)酵豆粕替代46%豆粕，試驗(yàn)期為35 d。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)開始前對(duì)豬舍、設(shè)備徹底清洗消毒，空欄一周。正式試驗(yàn)前各試驗(yàn)組先以生長(zhǎng)豬前期料與試驗(yàn)用基礎(chǔ)日糧按比例混合過渡預(yù)飼7 d，其他基礎(chǔ)條件相同。正式開始后，生長(zhǎng)豬的平均重量為（30.55±0.52）g，試驗(yàn)豬全期自由采食、飲水，少喂勤添，定期清理糞便。每天記錄溫度、病死數(shù)、采食量等數(shù)據(jù)，注意觀察生長(zhǎng)豬的健康狀態(tài)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法 試驗(yàn)開始日、試驗(yàn)結(jié)束日早上8：00分別以重復(fù)為單位進(jìn)行空腹稱重，稱重前不停水，停料6 h。對(duì)生長(zhǎng)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)記錄，得出試驗(yàn)周期豬只初始重、期末重、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（Feed/Gain）、腹瀉率等數(shù)據(jù)。

試驗(yàn)期最后一天對(duì)試驗(yàn)豬采血。每重復(fù)隨機(jī)選擇2頭健康狀況良好的豬只（一公一母），早上8：00空腹頸靜脈采血10 mL，采集血樣放于10 mL離心管中，于4℃冰箱靜置3 h，3000 r/min離心后取上層血清，每圈作為一個(gè)樣品，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩８鶕?jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)測(cè)定指標(biāo)，將樣品分為兩部分，分別用于血清生化指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)。

黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力，比色法測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力，紫外法測(cè)定過氧化氫酶（CAT）活力；分別采用TBA法、FRAP法測(cè)定血清丙二醛（MDA）含量和總抗氧化能力（T-AOC），模擬機(jī)體黃嘌呤氧化酶與黃嘌呤反應(yīng)系統(tǒng)的方法測(cè)定血清中抗超氧陰離子活力（ASA）。葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法測(cè)定血清葡萄糖（GLU）含量；考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定總蛋白（TP）含量；脲酶法測(cè)定尿素氮（UN）含量；酶偶聯(lián)比色法測(cè)定總膽固醇（TCH）和甘油三酯（TG）含量；AMP緩沖液法測(cè)定堿性磷酸酶（ALP）活性。試驗(yàn)用試劑盒均為南京建成生物工程研究所提供。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 以重復(fù)為單位對(duì)試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，應(yīng)用SPSS 19.0軟件中單因素方差分析（One-way ANOVA）中的LSD法進(jìn)行，用Duncan’s法進(jìn)行多重比較。以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”形式表示試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果。P＜0.05和P＜0.01分別表示為差異顯著和差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵豆粕對(duì)生長(zhǎng)豬生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，生長(zhǎng)豬期末重，與對(duì)照組相比，Ⅳ、Ⅴ組顯著增加（P＜0.05），Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）；平均日增重，Ⅳ、Ⅴ組極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），Ⅱ、Ⅲ組顯著高于對(duì)照組（P＜ 0.05），Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著（P＞ 0.05），Ⅱ、Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）。

表2 初始重、期末重、平均日增重

由表3可知，Ⅳ、Ⅴ組平均日采食量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組料重比顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），且各添加發(fā)酵豆粕組間差異不顯著（P＞0.05）；腹瀉率各組間差異不顯著（P＞0.05），但隨發(fā)酵豆粕添加比例增大而呈下降趨勢(shì)。

表3 平均日采食量、料重比、腹瀉率

2.2 發(fā)酵豆粕對(duì)生長(zhǎng)豬血清生化指標(biāo)的影響由表4可知，與對(duì)照組相比，血清葡萄糖含量Ⅳ組顯著降低（P＜0.05），Ⅴ組極顯著降低（P＜0.01），Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）；Ⅳ組血清總蛋白含量極顯著高于對(duì)照組組（P＜0.01），Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）；與對(duì)照組相比，Ⅳ、Ⅴ組血清尿素氮含量顯著降低（P＜0.05），且各添加發(fā)酵豆粕組間差異不顯著（P ＞ 0.05）。

表4 葡萄糖、總蛋白、尿素氮含量

由表5可知，血清總膽固醇含量，Ⅳ、Ⅴ組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），各添加組間差異不顯著（P＞0.05）；與對(duì)照組相比，Ⅴ組血清甘油三酯含量顯著降低（P＜0.05），各組間差異不顯著（P＞0.05）；與對(duì)照組相比，Ⅳ、Ⅴ組血清堿性磷酸酶活性顯著提高（P＜0.05），且各添加組間差異不顯著（P＞0.05）。

表5 總膽固醇、甘油三酯、堿性磷酸酶活性

2.3 發(fā)酵豆粕對(duì)生長(zhǎng)豬抗氧化性能的影響 由表6可知，各組間血清T-SOD活性差異不顯著（P＞0.05），但隨發(fā)酵豆粕添加比例增大而呈增加趨勢(shì)；Ⅳ、Ⅴ組血清GSH-Px活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）；，各組間血清CAT活性差異不顯著（P＞0.05），且與發(fā)酵豆粕添加比例無相關(guān)性。

表6 超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶活性 U/mL

由表7可知，與對(duì)照組相比，Ⅳ、Ⅴ組血清抗超氧陰離子活力顯著提高（P＜0.05），Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）；，與對(duì)照組相比，Ⅳ、Ⅴ組血清丙二醛含量顯著降低（P＜0.05），Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）；Ⅳ、Ⅴ組血清總抗氧化能力極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），Ⅱ、Ⅲ組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），且Ⅳ、Ⅴ組間差異不顯著，Ⅱ、Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）。

表7 抗超氧陰離子活力、丙二醛含量、總抗氧化能力

3 討論

3.1 發(fā)酵豆粕對(duì)生長(zhǎng)豬生長(zhǎng)性能的影響 蛋白質(zhì)作為動(dòng)物機(jī)體重要組成部分，可以修補(bǔ)、更新細(xì)胞組織，蛋白質(zhì)利用率的高低直接影響畜禽生產(chǎn)性能（馬靜等，2007）。經(jīng)微生物發(fā)酵處理后的豆粕富含小分子肽、游離氨基酸、未知生長(zhǎng)因子、消化酶和維生素，可提高機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率（劉海燕等，2010）。通過發(fā)酵工藝益生菌將豆粕中的不良?xì)馕度コ?，使發(fā)酵豆粕具有特殊酸香風(fēng)味，提高日糧適口性，增加采食量（Mital等，2010）。豆粕發(fā)酵過程中產(chǎn)生的乳酸能改善腸道環(huán)境，適宜益生菌生長(zhǎng)繁殖，有機(jī)酸還能提高消化酶活性，增強(qiáng)腸道蠕動(dòng)，從而提高腸道消化吸收能力（李少寧等，2016）。徐述亮等（2013）在仔豬日糧中添加4.3%的發(fā)酵豆粕，與對(duì)照組相比，平均日增重提高12.32%（P＜0.01），平均日采食量提高8.17%（P＜0.05），試驗(yàn)期末重提高3.81%（P＜ 0.05），料重比降低 3.79%（P＜ 0.01），腹瀉率降低33.33%（P＜0.05）。章世元等（2009）在斷奶仔豬日糧中添加35%和17.5%的發(fā)酵豆粕，與對(duì)照組比，料重比分別降低9.47%和4.21%。鄭云峰等（2006）在40日齡仔豬日糧中添加8%的發(fā)酵豆粕代替膨化大豆和魚粉，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組腹瀉率顯著降低（P＜0.05），經(jīng)濟(jì)效益得到提高。本研究中，與對(duì)照組相比，6%添加組可極顯著提高生長(zhǎng)豬結(jié)算的平均日增重（P＜0.01），顯著增加生長(zhǎng)豬的平均日采食量（P＜0.05），顯著降低生長(zhǎng)豬的料重比（P＜0.05），腹瀉率各組間差異不顯著（P＞0.05），但隨日糧發(fā)酵豆粕添加水平的增加有降低趨勢(shì)。因此，生長(zhǎng)豬日糧中添加發(fā)酵豆粕6%可去除豆粕中的有害因子，促進(jìn)豬腸道的消化吸收，提高經(jīng)濟(jì)效益，提升生長(zhǎng)性能。

3.2 發(fā)酵豆粕對(duì)生長(zhǎng)豬血清生化指標(biāo)的影響動(dòng)物血清中的葡萄糖分為腸道吸收、糖原分解和肝臟糖的異生3種主要來源，為機(jī)體提供能源（孫淑潔等，2012）。發(fā)酵豆粕中小分子活性肽能顯著提高動(dòng)物血液中胰島素水平，促進(jìn)血糖分解吸收，提高畜禽對(duì)糖類的利用率（張琳琰等，2012）?？偟鞍子砂椎鞍祝ˋLB）和球蛋白（GLB）組成，是機(jī)體細(xì)胞的重要組成部分，在一定限度內(nèi)，總蛋白濃度與機(jī)體合成利用蛋白質(zhì)能力正相關(guān)（孟苓鳳等，2013）。蛋白質(zhì)進(jìn)入機(jī)體經(jīng)過一系列代謝后形成血清尿素氮，在正常生理狀態(tài)下，體內(nèi)氮沉積量與血清尿素氮含量呈負(fù)相關(guān)，氮沉積水平的高低直接影響機(jī)體蛋白質(zhì)合成量（徐濤等，2013）。李少寧等（2015）在生長(zhǎng)豬日糧中添加3%的發(fā)酵豆粕，與對(duì)照組相比，總氮、糞氮、尿氮分別降低了19.6%、1.07%、22.24%，氮沉積率提高53.83%，氮生物學(xué)價(jià)值提高12.26%，表明發(fā)酵豆粕可提高生長(zhǎng)豬蛋白利用率，降低氮排泄量，減少環(huán)境污染。章世元等（2008）在豬日糧中添加17.5%和35%的發(fā)酵豆粕，與對(duì)照組相比，顯著提高豬對(duì)粗脂肪的表觀消化率，從而促進(jìn)脂肪代謝，這與發(fā)酵豆粕促進(jìn)小腸絨毛發(fā)育和增加胃黏膜厚度相關(guān)。堿性磷酸酶與磷代謝密切相關(guān)，重要的解毒因子有非特異性免疫作用（郭航等，2008）。本研究中，與對(duì)照組相比，添加發(fā)酵豆粕組均能顯著改善生長(zhǎng)豬的糖、蛋白質(zhì)、脂肪代謝功能，6%添加組生長(zhǎng)豬血清葡萄糖含量顯著降低（P＜0.05），血清尿素氮含量顯著降低性（P＜0.05），血清總蛋白含量顯著增加（P＜0.05），血清總膽固醇含量顯著降低（P＜0.05），血清堿性磷酸酶活性顯著增加（P＜0.05）。因此，生長(zhǎng)豬日糧中添加6%的發(fā)酵豆粕可提高機(jī)體對(duì)糖、脂肪、蛋白質(zhì)、磷等的利用率，顯著改善其血清生化指標(biāo)。

3.3 發(fā)酵豆粕對(duì)生長(zhǎng)豬抗氧化性能的影響 機(jī)體內(nèi)部和外界化學(xué)物質(zhì)代謝過程中產(chǎn)生了活性氧和自由基，引起氧化損傷導(dǎo)致各種疾病，機(jī)體抗氧化性能反應(yīng)了其健康狀況與抗外界環(huán)境損傷的能力（Giannenas，2015）。發(fā)酵豆粕中富含益生菌，使氨基酸容易被畜禽消化吸收，動(dòng)物機(jī)體對(duì)氨基酸的獲得跟組成吻合，保證氨基酸的平衡，從而提高機(jī)體抗氧化能力（梁明振等，2002）。發(fā)酵過程中產(chǎn)生的有機(jī)酸能清除機(jī)體自由基，螯合重金屬，增強(qiáng)還原能力（Gibbs等，2004）。經(jīng)過益生菌發(fā)酵后，豆粕異黃酮結(jié)構(gòu)和分子量均發(fā)生顯著變化，異黃酮糖苷轉(zhuǎn)化為異黃酮戒元，抗氧化功能均得到顯著提高，但抗氧化功能主要是由抗氧化肽作用產(chǎn)生的，大豆中的生物活性物質(zhì)經(jīng)發(fā)酵后釋放出來形成抗氧化肽，天然抗氧化劑穩(wěn)定性強(qiáng)，能防止脂質(zhì)過氧化發(fā)生，保護(hù)細(xì)胞和器官的正常結(jié)構(gòu)和功能（Junko等，2010）。機(jī)體中抗氧化酶主要為T-SOD、GSH-Px、CAT等，能單獨(dú)或協(xié)同清除體內(nèi)氧自由基，MDA直接反應(yīng)機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度，間接反映細(xì)胞損傷程度，超氧陰離子為機(jī)體生成氧自由基的源頭（吳先華等，2013）。劉海燕（2012）分別在試驗(yàn)豬日糧中14.27%和28.54%的發(fā)酵豆粕，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組仔豬血液中MDA含量分別降低了24.89%和27.97%，SOD和T-AOC含量隨添加比例的提高呈升高趨勢(shì)，該研究結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果相似。本研究中，與對(duì)照組相比，6%添加組生長(zhǎng)豬血清GSH-Px活性顯著提高（P＜0.05），血清T-AOC極顯著增高（P＜ 0.01），血清 ASA 顯著提高（P＜ 0.05），血清MDA含量顯著降低（P＜0.05）。各添加組間血清SOD活性差異不顯著（P＞0.05），但隨添加水平的提高有增加趨勢(shì)。因此，生長(zhǎng)豬日糧中發(fā)酵豆粕添加量為6%，可提高機(jī)體抗氧化酶活性，去除脂質(zhì)過氧化物跟自由基，顯著改善其抗氧化性能。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，生長(zhǎng)豬日糧中添加6%和8%的發(fā)酵豆粕均能顯著改善生長(zhǎng)豬的生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和抗氧化性能，但從經(jīng)濟(jì)角度出發(fā)，最適添加量為6%發(fā)酵豆粕替代普通豆粕。