薛 云，周 鋒，王樂偉

（河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)與工程學(xué)院，河南洛陽 471023）

斷奶期仔兔對環(huán)境和食物的變化較為敏感，易出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致生長速度放緩，生理性和病理性腹瀉發(fā)生，嚴(yán)重時可以引起仔兔死亡，給家兔養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失（潘海強(qiáng)，2018）。斷奶仔兔機(jī)體發(fā)育尚不完善，尤其是胃腸道黏膜較脆弱，機(jī)體對食物的消化吸收能力低，因此，當(dāng)仔兔食物從母乳變成飼料時，常導(dǎo)致消化不良，繼而出現(xiàn)腹瀉等疫?。ǜ哝骆碌?，2011）。也有學(xué)者認(rèn)為，仔兔斷奶之后不能再從母乳中獲得免疫球蛋白，而自身體內(nèi)的母源抗體水平也迅速下降，因此，感染輪狀病毒等病原微生物的幾率增加，導(dǎo)致仔兔群體腹瀉（Pan等，2014）。此外，在家兔實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，抗生素使用不當(dāng)常引起腸道微生物菌群失衡，加劇仔兔腹瀉病情的發(fā)展，給斷奶仔兔的飼養(yǎng)管理帶來困擾（Yuan等，2012）。

枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis，BS）作為一種重要的微生態(tài)制劑已被廣泛應(yīng)用于營養(yǎng)性飼料領(lǐng)域，其無毒、無殘留，同時又耐熱、耐酸、耐堿和耐紫外線等多種環(huán)境不利因素，是一種穩(wěn)定、實(shí)用又有效的營養(yǎng)性飼料添加劑（Bae等，2010）。一些證據(jù)顯示，枯草芽孢桿菌可提高畜禽飼料利用率，提高生產(chǎn)性能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高動物機(jī)體抗病能力（龍淼等，2015）?？莶菅挎邨U菌作為一種綠色添加劑，已應(yīng)用于豬、禽、牛等反芻動物和魚類等水產(chǎn)動物，但在家兔養(yǎng)殖方面的應(yīng)用研究仍相對較少（Joyeux等，1960）。因此，本試驗(yàn)旨在研究枯草芽孢桿菌對斷奶期仔兔生長性能的促進(jìn)作用，并分析在環(huán)境、飼料等因素改變所造成的應(yīng)激性、病理性腹瀉下其對仔兔的保護(hù)作用，為枯草芽孢桿菌在家兔養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株 某企業(yè)生產(chǎn)枯草芽孢桿菌制劑，有效成分為枯草芽孢桿菌，輔料為淀粉。其中，枯草芽孢桿菌活菌計數(shù)＞2×1010cfu/g。

1.2 試驗(yàn)動物 健康斷奶仔兔40只，雌性，日齡（35±3）d，體重（2±0.3）kg，購自某肉兔養(yǎng)殖場。

1.3 試驗(yàn)動物分組和飼喂方法 將40只斷奶仔兔隨機(jī)分為4組，每組10只。其中A、B、C組為試驗(yàn)組，基礎(chǔ)日糧中分別添加0.1%、0.2%、0.3%的枯草芽孢桿菌制劑。D為對照組，基礎(chǔ)日糧中不添加枯草芽孢桿菌制劑?；A(chǔ)日糧的配方參照任永軍等（2014）方法進(jìn)行配制，各組仔兔均按養(yǎng)殖場的正常頻率和飼喂量連續(xù)飼喂30 d。

1.4 生長性能測定 對試驗(yàn)第0和30天的各組仔兔分別稱量空腹體重，計算仔兔平均日增重，記錄各組仔兔飼料的加料量與剩余量，計算料重比，計算公式如下：

1.5 免疫指標(biāo)測定 對試驗(yàn)第0和第30天各組仔兔分別經(jīng)耳中動脈無菌采血1 mL。4℃冰箱靜置2 h后，3000 r/min離心10 min，收集血清。然后經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定兔血清中總IgA、IgM、IgG含量以及補(bǔ)體C3和補(bǔ)體C4水平。

1.6 免疫器官指數(shù)測定 試驗(yàn)結(jié)束后，各組隨機(jī)挑選3只仔兔，頸部脫臼處死，采集脾臟和胸腺稱重，測定免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)計算公式為：

脾（胸腺）指數(shù)（g/kg）=脾（胸腺）質(zhì)量 /宰前活質(zhì)量。

1.7 腹瀉率與死亡率測定 從試驗(yàn)開始至30 d試驗(yàn)結(jié)束，每天觀察仔兔的精神狀態(tài)、活動情況和排便情況，重點(diǎn)記錄各組仔兔腹瀉與死亡情況。試驗(yàn)結(jié)束后，統(tǒng)計各組仔兔腹瀉發(fā)生的發(fā)病率和死亡率。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析 使用SPSS 12.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)數(shù)據(jù)以百分率（%）表示，計量數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。計數(shù)數(shù)據(jù)之間的比較采用Fisher精確檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 平均日增重和料重比測定 由表1可知，各組仔兔平均日增重測定結(jié)果表明，基礎(chǔ)日糧添加了枯草芽孢桿菌制劑的試驗(yàn)組A、B、C組仔兔平均日增重均顯著高于無添加對照組D組（P＜0.05）。其中，B組和C組仔兔平均日增重與對照組D組相比差異極顯著（P＜0.01）。A、B、C三組間仔兔平均日增重?zé)o顯著差異（P＞0.05）。各組仔兔料重比測定結(jié)果表明，B組料重比顯著低于對照組D組（P＜0.05），其他組間無顯著差異（P ＞ 0.05）。

表1 枯草芽孢桿菌對仔兔平均日增重和料重比的影響

2.2 免疫指標(biāo)測定 由表2可知，各組仔兔血清免疫指標(biāo)測定結(jié)果表明，在IgA、IgM、IgG、C3和C4 5個檢測指標(biāo)中，B組和C組IgA、IgG水平與D組存在顯著差異（P＜0.05）。而A、B、C試驗(yàn)組其他指標(biāo)與對照組D組相比，雖略有升高但差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 各組仔兔血清免疫指標(biāo)測定結(jié)果

2.3 免疫器官指數(shù)測定 由表3可知，免疫器官指數(shù)測定結(jié)果表明，C組仔兔的胸腺重量顯著高于對照組D組（P＜0.05），其他組間均無顯著差異（P＞0.05）。C組的脾臟和胸腺免疫器官指數(shù)均最高，但與其他各組差異不顯著（P＞0.05）（表3）。

表3 各組仔兔免疫器官指數(shù)測定結(jié)果

2.4 腹瀉率及死亡率的測定 由表4可知，試驗(yàn)開始后，跟蹤觀察統(tǒng)計斷奶仔兔的健康狀況發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)日糧添加了枯草芽孢桿菌制劑的試驗(yàn)組均無死亡現(xiàn)象，僅A組1只仔兔出現(xiàn)輕微腹瀉癥狀。而對照組D組中，1只仔兔死亡，2只出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉癥狀。各試驗(yàn)組仔兔的腹瀉率和死亡率均顯著低于對照組（P＜0.05）。其中，B組和C組的仔兔的腹瀉率均顯著低于A組（P＜0.05）。

表4 腹瀉率及死亡率統(tǒng)計結(jié)果

3 討論

枯草芽孢桿菌是在人和動物營養(yǎng)領(lǐng)域得到普遍認(rèn)可的一種腸道益生菌，具有耐高溫、耐酸堿、性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)勢，常用于食品添加劑（Yu等，2009；Hong等，2008）?？莶菅挎邨U菌可以產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶等多種酶類，提高機(jī)體對營養(yǎng)物的消化吸收能力（Liu等，2006）。同時還可以輔助動物消化道微生物健康菌群的建立，促進(jìn)機(jī)體生長發(fā)育（Vepachedu等，2005；Imai等，2000）。由于斷奶仔兔消化道功能不完善，對飼料的消化吸收能力有限（胡艷等，2013；張佳蕾等，2017），而枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的多種酶類和多糖能幫助機(jī)體消化吸收食物，從而促進(jìn)兔的生長發(fā)育和提高其抗病能力（Guo等，2017；Phuoc等，2017）。因此，推測在仔兔斷奶敏感期可以起到較好的促生長作用，同時具有預(yù)防腹瀉的作用。

動物日增重和料重比反應(yīng)了動物對飼料的利用率，是評價生長性能的主要指標(biāo)。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)向斷奶仔兔基礎(chǔ)日糧中添加適量枯草芽孢桿菌制劑能有效提高日增重和降低料重比，改善仔兔生長性能。血清免疫指標(biāo)和免疫器官重量是評價健康動物機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育的重要參考依據(jù)。在本研究中，血清免疫指標(biāo)檢測發(fā)現(xiàn)，添加適量枯草芽孢桿菌制劑的試驗(yàn)組IgA、IgG水平與對照組存在顯著差異。免疫器官指數(shù)測定結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，部分試驗(yàn)組胸腺重量顯著高于對照組。這結(jié)果表明，基礎(chǔ)日糧中添加適量枯草芽孢桿菌制劑既有助于仔兔免疫系統(tǒng)的生長發(fā)育，也間接起到防病抗病的作用。此外，對于試驗(yàn)仔兔的跟蹤觀察發(fā)現(xiàn)，添加適量枯草芽孢桿菌制劑的試驗(yàn)組其腹瀉率和死亡率均顯著低于對照組，也進(jìn)一步證實(shí)了我們的推測，枯草芽孢桿菌可以有效預(yù)防斷奶仔兔腹瀉的發(fā)生。

在本研究中，枯草芽孢桿菌添加還呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)。對比各試驗(yàn)組添加0.1%、0.2%、0.3%枯草芽孢桿菌制劑的效果，0.2%枯草芽孢桿菌制劑在提高斷奶仔兔的生長性能和抗腹瀉能力的綜合效應(yīng)最佳，可以作為家兔生產(chǎn)養(yǎng)殖中推薦使用的添加劑量。

4 結(jié)論

在斷奶仔兔基礎(chǔ)日糧中添加適量的枯草芽孢桿菌制劑可以有效增加仔兔平均日增重，降低料重比，完善仔兔生長發(fā)育和免疫系統(tǒng)，降低腹瀉發(fā)病率和死亡率。添加0.2%的枯草芽孢桿菌制劑是綜合評價效用最佳的使用劑量。