陳永忠 ，蒲常廷 ，孟茹

（1.西寧市畜牧獸醫(yī)站，青海 西寧 810003；2.湟中常綠養(yǎng)殖合作社，青海 湟中 811607）

近年來,高致病性禽流感在世界上許多國家暴發(fā)流行 ,給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)由于禽流感病毒有感染人的能力 ,也給人類的身體健康造成巨大的威脅[1]。疫苗免疫是預(yù)防禽流感暴發(fā)流行的重要途徑之一，為探討H5N1亞型禽流感滅活疫苗對黃羽肉雞的免疫效果 ,本研究采用不同劑量不同免疫途徑免疫黃羽肉雞，監(jiān)測抗體的消長規(guī)律 ,以制定合理的免疫程序。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 1周齡黃羽肉雞，購自寧夏肉雞場。

1.2 疫苗及試劑 禽流感病毒H5N1亞型滅活疫苗，批號為2014038，哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)。禽流感病毒H5亞型HI試驗(yàn)抗原，批號為20150702，青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)。標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，批號為20151004，青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)。0.1M PBS(pH7.2)阿氏液，1%的雞紅細(xì)胞懸液（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

1.3 儀器 一次性V型血凝板，微量移液器，微量振蕩器，離心機(jī)。

1.4 分組和免疫操作 將新購進(jìn)的1周齡黃羽肉雞隨機(jī)分成6組，每組20只。待雞禽流感母源抗體衰減到2log2以下時(shí)，第一、二、三組均用禽流感疫苗免疫接種，胸部肌肉注射，劑量分別為第一組 0.3ml/頭、第二組 0.4ml/頭、第三組 0.5ml/頭、第四組用禽流感苗飲水免疫，劑量為1ml/只，第五組對照。免疫后每2周翅靜脈采血（1ml/只）并分離血清。

1.5 抗體測定 按照“禽流感病毒H5N1亞型滅活疫苗制造及檢驗(yàn)試行規(guī)程”中血凝抑制（HI）試驗(yàn)操作技術(shù)進(jìn)行。

2 結(jié)果

禽流感疫苗可有效刺激雞產(chǎn)生HI抗體。免疫后2周，抗體平均效價(jià)分別達(dá)到:第一組4.2log2，第二組4.1log2，第三組 4.4log2，第四組 2.9log2。第4周免疫注射組HI抗體效價(jià)達(dá)到最高，均值分別為第一組9.7log2、第二組9.8log2、第三組 9.5log2、第四組4.6log2，各組抗體效價(jià)從第6周開始下降，第8周以后下降相對較緩慢。18周內(nèi)能夠維持較高的抗體水平，20周以后抗體效價(jià)均值降低到4log2以下。各免疫組抗體合格率在4～10周內(nèi)維持較高水平，第10周以后緩慢下降，18周內(nèi)維持在70%以上，之后下降到70%以下。飲水免疫組第8周以后抗體均值在4.0log2以下。飲水免疫組抗體水平自始至終不合格。不同滴度、不同免疫途徑的禽流感疫苗免疫雞只后的抗體滴度和合格率見表1。

表1 禽流感疫苗不同劑量、不同免疫途徑的抗體滴度和合格率統(tǒng)計(jì)表

3 分析和討論

3.1 禽流感疫苗免疫后2周后可產(chǎn)生抗體，第4周抗體效價(jià)最高，各組抗體效價(jià)從第6周開始下降，第8周以后下降相對較緩慢。18周內(nèi)能夠維持較高的抗體水平，20周以后抗體效價(jià)均值降低到4log2以下；各免疫組抗體合格率18周內(nèi)維持在70%以上，之后下降到70%以下。此時(shí)不足以抵御外界病毒侵襲，由于肉雞4個(gè)月可出欄，建議普通肉雞免疫一次即可，蛋雞每4個(gè)月免疫1次，劑量以0.3ml為宜。

3.2 注射免疫第三組，有2只肉雞死亡，這是由于疫苗注射劑量過大，發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)死亡，這和于桂陽等[2]研究結(jié)果相符合。

3.3 禽流感疫苗注射免疫效果較好，飲水免疫不但浪費(fèi)大量疫苗，而且免疫效果較差，同時(shí)養(yǎng)殖場(戶)無法及時(shí)監(jiān)測免疫效果，有疫病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，因此，建議養(yǎng)殖戶在對雞只進(jìn)行禽流感疫苗免疫時(shí)不要用飲水免疫，注意在日常免疫操作中應(yīng)避免大劑量使用疫苗和隨意改變免疫途徑的做法。