黃謙　張文廣　蔡純雁　鄧烈華

【摘要】 目的：探討中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒AnxA1、CD11b及CD62L水平在判斷燒傷膿毒癥患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后中的作用，為燒傷膿毒癥的診療提供理論依據(jù)。方法：選取2014年7月-2017年6月本院體檢中心的20例健康人員（對(duì)照組），同時(shí)搜集28例重度燒傷合并膿毒癥患者（膿毒癥組）、11例重度燒傷合并重癥膿毒癥患者（膿毒癥休克組）。在第1、3、7天采集所有參與人員的血標(biāo)本，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血漿中性粒細(xì)胞來(lái)源微顆粒（AnxA1、CD11b、CD62L）并計(jì)算其絕對(duì)個(gè)數(shù)，同步記錄急性生理學(xué)與慢性健康狀況評(píng)分Ⅱ（APACHE Ⅱ評(píng)分），并統(tǒng)計(jì)機(jī)械通氣時(shí)間、總住院時(shí)間、病死率。結(jié)果：三組患者的中性粒細(xì)胞來(lái)源微顆粒（AnxA1、CD11b及CD62L）水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。膿毒癥組及膿毒癥休克組的AnxA1、CD11b及CD62L均高于對(duì)照組（P<0.05）；而膿毒癥休克組的AnxA1低于膿毒癥組（P<0.05），CD11b及CD62L均高于膿毒癥組（P<0.05）。通過(guò)血漿中性粒細(xì)胞來(lái)源微顆粒及APACHE Ⅱ評(píng)分的動(dòng)態(tài)變化可知，膿毒癥組及膿毒癥休克組患者的AnxA1水平在治療期間無(wú)明顯變化，而CD11b及CD62L水平均有所升高，APACHE Ⅱ評(píng)分則呈下降趨勢(shì)。膿毒癥組機(jī)械通氣時(shí)間、總住院時(shí)間均短于膿毒癥休克組（P<0.05），病死率低于膿毒癥休克組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒AnxA1、CD11b及CD62L可早期對(duì)燒傷膿毒癥患者的病情程度及預(yù)后進(jìn)行預(yù)測(cè)，為燒傷膿毒癥患者的診療提供參考。

【關(guān)鍵詞】 中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒； 燒傷膿毒癥； 病情程度

Diagnostic Value of Neutrophil Derived Micro-particles AnxA1，CD11b and CD62L in Burn Sepsis/HUANG Qian，ZHANG Wenguang，CAI Chunyan，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（17）：057-060

【Abstract】 Objective：To investigate the role of AnxA1，CD11b and CD62L levels in neutrophil derived micro-particles in determining the severity and prognosis of burn sepsis patients and provide a theoretical basis for the diagnosis and treatment of burn sepsis.Method：From July 2014 to June 2017，20 healthy subjects （control group） in the physical examination center of our hospital were selected，28 patients with severe burn and sepsis （sepsis group） were collected，severe burn combined with severe sepsis symptomatic patients in 11 cases（septic shock group） were selected.Blood samples of all the participants were collected on the 1st，3rd and 7th day，the plasma neutrophil granulocytes（AnxA1，CD11b and CD62L） were detected by flow cytometry and their absolute numbers were counted.The Acute Physiology and Chronic Health Score（APACHE Ⅱ score），mechanical ventilation time，total length of stay，and mortality were calculated.Result：The levels of AnxA1，CD11b and CD62L in neutrophil derived micro-particles were significantly different among the three groups（P<0.05）.The levels of AnxA1，CD11b and CD62L in sepsis group and septic shock group were higher than those in control group（P<0.05）；the AnxA1 of septic shock group was lower than that of septic shock group （P<0.05），CD11b and CD62L were higher than those in sepsis group（P<0.05）.The dynamic changes of plasma neutrophil derived micro-particles and APACHE Ⅱ scores were observed，the level of AnxA1 in sepsis group and septic shock group did not change significantly during the treatment period，while the levels of CD11b and CD62L increased，the APACHE Ⅱ score showed a downward trend.The duration of mechanical ventilation and total hospital stay in sepsis group were shorter than those in septic shock group（P<0.05），the mortality was lower than that in septic shock group，but there was no significant difference（P>0.05）.Conclusion：The neutrophil derived micro-particles AnxA1，CD11 and CD62L can predict the degree and prognosis of burn sepsis in the early stage，and provide reference for the diagnosis and treatment of patients with burn sepsis.

【Key words】 Neutrophil derived micro-particles； Burn sepsis； Severity of illness

First-authors address：Longhua District Peoples Hospital in Shenzhen City，Shenzhen 518109，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.17.015

膿毒癥是一種全身炎癥反應(yīng)綜合征，嚴(yán)重感染引發(fā)的膿毒癥是目前嚴(yán)重?zé)齻畛Ｒ?jiàn)的死亡原因[1]。早期診斷、積極預(yù)防是膿毒癥治療的關(guān)鍵，因此，需要找到一些能夠及早診斷膿毒癥并評(píng)估其預(yù)后的生物標(biāo)記物，使燒傷膿毒癥得到最早最佳的治療方案，以降低其死亡率。目前，臨床上主要采用C反應(yīng)蛋白、降鈣素原指標(biāo)判斷膿毒癥患者的病情程度，但其敏感性、特異性仍需進(jìn)一步研究[2]。有國(guó)外文獻(xiàn)提示，中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒（AnxA1、CD11b及CD62L）在膿毒癥患者中具有重要的臨床意義[3]。但并未就該指標(biāo)對(duì)燒傷膿毒癥患者的早期診斷與預(yù)后的意義進(jìn)行探討。本研究就中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒（AnxA1、CD11b及CD62L）對(duì)燒傷膿毒癥的診斷價(jià)值及預(yù)后進(jìn)行深入探討，為燒傷膿毒癥患者的診療提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 參與研究人員選取時(shí)間為2014年7月-2017年6月，其中本院體檢中心健康人員20例（對(duì)照組）、重度燒傷合并膿毒癥患者28例（膿毒癥組）、重度燒傷合并重癥膿毒癥患者11例（膿毒癥休克組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）膿毒癥患者均符合“2012國(guó)際嚴(yán)重膿毒癥及膿毒性休克診療指南”中膿毒癥的診斷及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[4]；（2）無(wú)嚴(yán)重心肺、肝腎等嚴(yán)重器質(zhì)性疾病；（3）同意參與本研究，并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近7 d內(nèi)出現(xiàn)因急性冠脈綜合征、急性心力衰竭、心胸外科手術(shù)、胸外心臟按壓、除顫、直流電復(fù)律等引起心肌損傷標(biāo)志物升高者；（2）惡性腫瘤、免疫功能低下或中毒者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施。

1.2 方法 抽取對(duì)照組血液標(biāo)本，膿毒癥組及膿毒癥休克組確診后第1、3、7天動(dòng)脈血標(biāo)本各5 mL，將其放置于37 ℃室溫中1 h，離心，收集上清液樣品，放置于-80 ℃冰箱保存待測(cè)。以流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒（AnxA1、CD11b、CD62L）。

1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 同步記錄PCT、APACHE Ⅱ評(píng)分（最終APACHE Ⅱ評(píng)分=急性生理評(píng)分+年齡評(píng)分+慢性健康評(píng)分，總分值為0～71分，分值越高，疾病程度越嚴(yán)重）、多器官功能障礙評(píng)分（MODS評(píng)分，總分0～24分，分?jǐn)?shù)越高，疾病程度越嚴(yán)重），分析其與膿毒癥病情嚴(yán)重程度的關(guān)系；并統(tǒng)計(jì)機(jī)械通氣時(shí)間、總住院時(shí)間、病死率，判斷其在預(yù)后中的預(yù)測(cè)效果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，三組間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；以率（%）描述計(jì)數(shù)資料，T表示理論頻數(shù)，以1、5為分界。T≥5應(yīng)用檢驗(yàn)，1≤T<5應(yīng)用校正檢驗(yàn)；當(dāng)T<1時(shí)應(yīng)用Fisher確切概率法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較 對(duì)照組男10例，女10例，平均年齡（46.8±2.1）歲；膿毒癥組男13例，女15例，平均年齡（47.1±2.3）歲；膿毒癥休克組男6例，女4例，平均年齡（46.3±2.7）歲。三組患者的一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組中性粒細(xì)胞來(lái)源微顆粒水平比較 三組患者的中性粒細(xì)胞來(lái)源微顆粒（AnxA1、CD11b及CD62L）水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。膿毒癥組的AnxA1、CD11b及CD62L均高于對(duì)照組（t=12.179、6.604、8.587，P=0.000、0.000、0.000）；膿毒癥休克組的AnxA1、CD11b及CD62L均高于對(duì)照組（t=9.317、10.579、10.496，P=0.000、0.000、0.000）；膿毒癥休克組的AnxA1低于膿毒癥組（t=1.892，P=0.033），CD11b及CD62L均高于膿毒癥組（t=7.309、4.619，P=0.000、0.000）。見(jiàn)表1。

2.3 兩組血漿中性粒細(xì)胞來(lái)源微顆粒及APACHE Ⅱ評(píng)分的動(dòng)態(tài)變化比較 膿毒癥組及膿毒癥休克組患者的AnxA1水平在治療期間均無(wú)明顯變化（F=0.097、0.598，P=0.908、0.552），CD11b及CD62L水平均有所升高（CD11b：F=149.263、141.028，P=0.000、0.000；CD62L：F=74.941、89.324，P=0.000、0.000），APACHE Ⅱ評(píng)分則呈下降趨勢(shì)（F=10.836、6.706，P=0.000、0.002），見(jiàn)表2。

2.4 膿毒癥組及膿毒癥休克組機(jī)械通氣時(shí)間、總住院時(shí)間、病死率情況比較 兩組患者的、總住院時(shí)間、病死率情況對(duì)比，膿毒癥組的機(jī)械通氣時(shí)間為（4.7±1.2）d、總住院時(shí)間為（26.3±4.8）d，均短于膿毒癥休克組的（11.9±1.8）、（32.7±6.2）d，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=14.578、3.448，P=0.000、0.001）；膿毒癥組的病死率為0，雖低于膿毒癥休克組的9.1%（1/11），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.28）。

3 討論

膿毒癥是由感染引起的，多發(fā)生于嚴(yán)重疾病患者中，如嚴(yán)重?zé)齻?、多發(fā)傷及外科手術(shù)后等，病原微生物包括細(xì)菌、真菌、病毒及寄生蟲(chóng)，其依據(jù)病情的嚴(yán)重程度可將其分為膿毒癥、嚴(yán)重膿毒癥及膿毒性休克，其中嚴(yán)重膿毒癥是膿毒癥伴有器官功能障礙、組織灌注不良或低血壓；膿毒性休克是嚴(yán)重膿毒癥給予足量液體復(fù)蘇后仍伴有無(wú)法糾正的持續(xù)性低血壓，被認(rèn)為是嚴(yán)重膿毒癥的一種特殊類(lèi)型。國(guó)外流行病學(xué)提示，因膿毒癥而死亡的人數(shù)已超過(guò)心肌梗死，且仍以每年1.5%的速度遞增[5]，因此需對(duì)膿毒癥的診療引起重視。近年來(lái)，雖然人們已對(duì)膿毒癥的發(fā)病機(jī)制基本闡明，且形成較為完善的診療指南，但該種疾病的發(fā)病率及病死率并未有明顯的降低，仍需進(jìn)行進(jìn)一步的研究探討[6-8]。

目前國(guó)內(nèi)關(guān)于反映膿毒癥病情程度的炎癥指標(biāo)主要有C反應(yīng)蛋白、降鈣素原等，但其敏感性、特異性仍有待進(jìn)一步商榷[9]。而文獻(xiàn)[10]研究顯示，中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒（AnxA1、CD11b及CD62L）已在感染及炎癥部位找到，可作為一項(xiàng)評(píng)價(jià)膿毒癥患者炎癥水平的指標(biāo)，但其對(duì)燒傷膿毒癥患者的診斷與預(yù)后的評(píng)價(jià)仍存在空缺。本研究通過(guò)對(duì)20例健康人員（對(duì)照組）、28例重度燒傷合并膿毒癥患者（膿毒癥組）、11例重度燒傷合并重癥膿毒癥患者（膿毒癥休克組）的中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒水平，并對(duì)所有患者APACHE Ⅱ評(píng)分進(jìn)行評(píng)價(jià)，分析其與燒傷膿毒癥病情嚴(yán)重程度的關(guān)系；記錄機(jī)械通氣時(shí)間、總住院時(shí)間、病死率等情況，探討中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒水平與燒傷膿毒癥患者預(yù)后的關(guān)系，為臨床診療提供參考依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示：對(duì)照組、膿毒癥組、膿毒癥休克組患者的中性粒細(xì)胞來(lái)源微顆粒（AnxA1、CD11b及CD62L）水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；膿毒癥組及膿毒癥休克組的AnxA1、CD11b及CD62L均高于對(duì)照組，膿毒癥休克組的AnxA1低于膿毒癥組，CD11b及CD62L均高于膿毒癥組（P<0.05），表明AnxA1、CD11b及CD62L水平可預(yù)測(cè)疾病的嚴(yán)重程度。AnxA1是一種內(nèi)源性的抗炎效應(yīng)蛋白，它所標(biāo)記的中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒只由活化中性粒細(xì)胞釋放，炎癥反應(yīng)中AnxA1微粒可運(yùn)動(dòng)到細(xì)胞膜，結(jié)合四氧嘧啶（ALX）受體，作用于特定的G蛋白偶聯(lián)受體，使得中性粒細(xì)胞不能運(yùn)動(dòng)到炎癥部位與IL-1β相互作用，隨著這些AnxA1微粒在微循環(huán)中不斷蓄積，通過(guò)時(shí)間依賴(lài)阻尼作用促進(jìn)炎癥消散，達(dá)到抗炎作用[11-12]。而CD62L能夠抑制中性粒細(xì)胞的滾動(dòng)作用，很有可能就是通過(guò)這種途徑產(chǎn)生抗炎作用[13-14]。有體外研究標(biāo)明CD11b微?？勺鳛檎{(diào)節(jié)白細(xì)胞-血小板相互作用的主要受體，作用于靜止的血小板，使其過(guò)度活化，增加表面P-選擇素的表達(dá)，促進(jìn)血栓形成，參與動(dòng)脈粥樣硬化及再狹窄的起始與發(fā)展，并可能在一定程度上抑制白細(xì)胞的促炎作用，達(dá)到抗炎效果[15]。在本研究中，通過(guò)對(duì)膿毒癥患者及膿毒癥休克患者在治療第1、3、7天檢測(cè)AnxA1、CD11b、CD62L及APACHE Ⅱ評(píng)分的變化，結(jié)果提示，AnxA1水平在治療期間無(wú)明顯變化，而CD11b及CD62L水平均有所升高，APACHE Ⅱ評(píng)分則呈下降趨勢(shì)，且膿毒癥組機(jī)械通氣時(shí)間、總住院時(shí)間均短于膿毒癥休克組（P<0.05），病死率低于膿毒癥休克組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。該結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了AnxA1、CD11b、CD62L水平可動(dòng)態(tài)預(yù)測(cè)燒傷膿毒癥患者的病情程度，并為疾病治療及預(yù)后提供參考依據(jù)。

綜上所述，中性粒細(xì)胞來(lái)源微粒AnxA1、CD11b及CD62L水平在燒傷膿毒癥患者的診療及預(yù)后評(píng)價(jià)中具有重要的臨床價(jià)值，值得推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2018-04-19） （本文編輯：張爽）