陶麗，李珂珂，李東霞，弓曉杰

(大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116622)

人參果為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Meyer 的成熟果實。近年來，隨著對人參根日趨完善的研究和應(yīng)用，對人參地上部分(莖、葉、花蕾、果實)的研究也引起了廣大學(xué)者的興趣。人參果作為人參地上部位的一部分，其主要有效成分為人參皂苷，并且其人參皂苷的含量約為根部的4倍[1]。人參果中的人參皂苷具有顯著的抗腫瘤[2-4]、抗糖尿病[5-9]、抗心腦血管疾病[10]、抗炎[11]、抗癲癇[12]、抗氧化[13]等藥理活性。基于人參果總皂苷較好的藥理作用，目前已被開發(fā)成多種藥物，如人參果皂苷注射液、振源口服液、振源膠囊等[14]。在課題組對人參的根、莖葉及花蕾中皂苷類化學(xué)成分和其藥理學(xué)作用進行研究的基礎(chǔ)上[15-24]，為了更全面地認(rèn)識和開發(fā)利用人參果這一植物資源，我們對人參果中的皂苷類化學(xué)成分進行了比較系統(tǒng)的研究，從中分離并鑒定了22個化合物，其中化合物2、3、5、8、9、16、18～22為首次從人參果中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker AV 400型核磁共振波譜儀(Bruker BioSpin AG Facilities，F(xiàn)?llanden，瑞典)；島津液質(zhì)聯(lián)用儀(日本)：配置島津Nexera X2型液相色譜儀(包括LC-30AD二元泵、SIL-30AC自動進樣器、SPD-M30A檢測器和CTO-20AC柱溫箱)和8050型質(zhì)譜儀；CXTH 3000型半制備高效液相色譜儀(SP-HPLC，北京創(chuàng)新通恒科技發(fā)展有限公司)，配置UV3000檢測器、P3050二元泵、Daisogel C18色譜柱(250 mm×20 mm，10 μm)，紫外檢測波長為203 nm，體積流量為5 mL·min-1；大孔吸附樹脂用Diaion HP-20(日本三菱)；SBC MCI GEL反相色譜(F型，75～150 μm，成都科譜生物有限公司)；柱色譜硅膠(200～300目)和薄層色譜(TLC)硅膠板GF254(0.20～0.25 mm)，均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；三氯甲烷、甲醇、乙腈等試劑為分析純或色譜純。

人參果樣品于2016年9月采自吉林省集安市，經(jīng)弓曉杰教授鑒定為五加科人參屬植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的果實。憑證標(biāo)本(2016004)存放于大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院中藥研究室。

2 提取與分離

新鮮的人參果4.9 kg，去除種子得果肉漿，用甲醇加熱回流提取3次，加甲醇量依次為原料量的20、15、10倍量，依次提取3、2、1.5 h。合并提取液，減壓濃縮，得浸膏262 g，然后依次用環(huán)己烷和水飽和的正丁醇萃取，得到環(huán)己烷層(14.3 g)、正丁醇層(145.5 g)和水層(103.5 g)。取正丁醇層140 g，將其用水溶解后通過Diaion HP-20大孔吸附樹脂柱，依次用水及20%、40%、60%、80%乙醇水溶液和乙醇梯度洗脫，得到6個流分Fr.1(3.1 g)、Fr.2(2.0 g)、Fr.3(4.5 g)、Fr.4(62.7 g)、Fr.5(57.6 g)及Fr.6(3.5 g)。

Fr.3(4.5 g)通過MCI凝膠柱色譜，經(jīng)30%、40%甲醇水溶液及甲醇梯度洗脫，得到3個流分(C1～C3)。C3(0.5 g)經(jīng)半制備HPLC，先后用(MeOH-H2O，10∶90)及(MeOH-H2O，20∶80)分離、純化，得到化合物1(人參皂苷F2，10 mg)、2(越南人參皂苷R8，8 mg)、3(假人參皂苷Rc1，15 mg)。

Fr.4(42.7 g)經(jīng)過反復(fù)硅膠柱色譜，CHCl3-MeOH-H2O(10∶3∶0.4→2∶3∶0.4)梯度洗脫，得到6個流分(C1～C6)。C1(10.8 g)經(jīng)半制備HPLC(CH3CN-H2O，27∶73)分離，得流分C1-1(4.2 g)和C1-2(5.6 g)；C1-1再經(jīng)半制備HPLC(CH3CN-H2O，20∶80)純化，得到化合物4(人參皂苷Re，2.1 g)、5(三七皂苷R2，7.5 mg)。C1-2再經(jīng)半制備HPLC(CH3CN-H2O，30∶70)純化，得到化合物6(人參皂苷F5，2.1 g)、7(人參皂苷F3，1.5 g)、8(人參皂苷Ia，6.4 mg)、9(竹節(jié)參皂苷LM1，7.2 mg)。

Fr.5(46.5 g)通過MCI凝膠柱色譜，用60%、80%甲醇水溶液及甲醇梯度洗脫，得到8個流分(C1～C8)。C1(11.5 g)經(jīng)半制備HPLC(MeOH-H2O，67∶33)反復(fù)純化，得到化合物10[20(S)-人參皂苷Rg2，8.2 mg]、11(人參皂苷Rc，10.1 mg)、12(人參皂苷F1，6.7 mg)、13(人參皂苷Rd，12.3 mg)、14(人參皂苷Rb2，8.6 mg)、15(人參皂苷Rb1，9.1 mg)、16(人參皂苷Rh6，9.4 mg)。C6(14.1 g)經(jīng)半制備HPLC(MeOH-H2O，73∶27)反復(fù)分離純化，得到化合物17(人參皂苷Rh4，8.2 mg)、18(人參皂苷Rh5，5.1 mg)、19(絞股藍皂苷XⅦ，10.2 mg)、20(絞股藍皂苷Ⅸ，10.5 mg)、21(三七皂苷Fe，11.2 mg)、22(西洋參皂苷L10，12.1 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

所有22個化合物在TLC上展開后噴霧10%硫酸乙醇試液皆顯紫色斑點，Libermann-Burchard反應(yīng)皆呈陽性，提示它們均為三萜皂苷類化合物。

化合物1：白色無定型粉末，分子式C42H72O13。ESI-TOF-MSm/z785.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.25(1H，t，J=7.5 Hz，H-24)，5.21(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1″)，4.97(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.65(3H，s)，1.62(6H，s)，1.33(3H，s)，1.02(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)，0.84(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[20]，鑒定為人參皂苷F2。

化合物2：白色無定型粉末，分子式C48H82O19。ESI-TOF-MSm/z985.5[M+Na]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH6.30(1H，m，H-23)，6.02(1H，d，J=15.5 Hz，H-24)，5.40(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1?)，5.22(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，4.95(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.61(3H，s)，1.56(3H，s)，1.55(3H，s)，1.32(3H，s)，1.15(3H，s)，1.03(3H，s)，0.92(3H，s)，0.87(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[25]，鑒定為越南人參皂苷R8。

化合物3：白色無定型粉末，分子式C50H84O19。ESI-TOF-MSm/z989.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.27(1H，t，J=6.5 Hz，H-24)，5.34(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1?)，5.21(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1″)，4.93(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.65(3H，s)，1.62(3H，s)，1.55(3H，s)，1.35(3H，s)，1.15(3H，s)，0.99(3H，s)，0.98(3H，s)，0.87(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[26]，鑒定為假人參皂苷Rc1。

化合物4：白色無定型粉末，分子式C48H82O18。ESI-TOF-MSm/z947.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH6.47(1H，br s，H-rha-1″)，5.34(1H，t，J=7.4 Hz，H-24)，5.24(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，5.16(1H，d，J=7.8 Hz，H-glc-1?)；8個甲基質(zhì)子：δH2.11(3H，s)，1.66(6H，s)，1.61(3H，s)，1.38(3H，s)，1.19(3H，s)，0.98(3H，s)，0.96(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[20]，鑒定為人參皂苷Re。

化合物5：白色無定型粉末，分子式C41H70O13。ESI-TOF-MSm/z771.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.76(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1′)，5.35(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.33(1H，d，J=5.0 Hz，H-xyl-1″)；8個甲基質(zhì)子：δH2.08(3H，s)，1.69(3H，s)，1.66(3H，s)，1.47(3H，s)，1.42(3H，s)，1.19(3H，s)，0.99(3H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[27]，鑒定為三七皂苷R2。

化合物6：白色無定型粉末，分子式C41H70O13。ESI-TOF-MSm/z771.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.34(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.17(1H，br s，H-ara-1″)，5.13(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.99(3H，s)，1.65(3H，s)，1.62(3H，s)，1.60(3H，s)，1.46(3H，s)，1.12(3H，s)，1.02(3H，s)，0.98(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[23]，鑒定為人參皂苷F5。

化合物7：白色無定型粉末，分子式C41H70O13。ESI-TOF-MSm/z771.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.35(1H，br s，H-24)，5.11(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，4.97(1H，br s，H-ara-1″)；8個甲基質(zhì)子：δH1.98(3H，s)，1.69(3H，s)，1.65(3H，s)，1.63(3H，s)，1.45(3H，s)，1.11(3H，s)，1.02(3H，s)，0.99(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[23]，鑒定為人參皂苷F3。

化合物8：白色無定型粉末，分子式C42H72O14。ESI-TOF-MSm/z801.5[M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.27(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.20(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)，5.00(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)；8個甲基質(zhì)子：δH2.07(3H，s)，1.63(6H，s)，1.61(3H，s)，1.43(3H，s)，1.06(3H，s)，1.00(3H，s)，0.94(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[28]，鑒定為人參皂苷Ia。

化合物9：白色無定型粉末，分子式C41H70O13。ESI-TOF-MSm/z771.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.33(1H，m，H-24)，5.13(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)，4.99(1H，d，J=7.5 Hz，H-xyl-1″)；8個甲基質(zhì)子：δH1.99(3H，s)，1.67(3H，s)，1.65(3H，s)，1.63(3H，s)，1.46(3H，s)，1.10(3H，s)，1.01(3H，s)，0.99(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[29]，鑒定為人參皂苷LM1。

化合物10：白色無定型粉末，分子式C42H72O13。ESI-TOF-MSm/z785.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH6.50(1H，br s，H-rha-1″)，5.36(1H，t，J=7.0Hz，H-24)，5.29(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH2.13(3H，s)，1.70(3H，s)，1.66(3H，s)，1.42(3H，s)，1.38(3H，s)，1.22(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[30]，鑒定為20(S)-人參皂苷Rg2。

化合物11：白色無定型粉末，分子式C53H90O22。ESI-TOF-MSm/z1 079.6[M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.67(1H，br s，H-ara-1″″)，5.39(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.33(1H，t，J=7.0Hz，H-24)，5.15(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1?)，4.93(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.69(3H，s)，1.65(3H，s)，1.64(3H，s)，1.29(3H，s)，1.12(3H，s)，0.97(6H，s)，0.82(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[31]，鑒定為人參皂苷Rc。

化合物12：白色無定型粉末，分子式C36H62O9。ESI-TOF-MSm/z639.4 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.30(1H，m，H-24)，5.20(1H，d，J=6.5 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH2.00(3H，s)，1.61(3H，s)，1.60(6H，s)，1.48(3H，s)，1.17(3H，s)，1.06(3H，s)，0.93(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[32]，鑒定為人參皂苷F1。

化合物13：白色無定型粉末，分子式C48H82O18。ESI-TOF-MSm/z947.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.57(1H，m，H-24)，5.38(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.21(1H，d，J=7.6 Hz，H-glc-1?)，4.91(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.65(3H，s)，1.62(3H，s)，1.50(3H，s)，1.31(3H，s)，1.13(3H，s)，0.98(3H，s)，0.84(3H，s)，0.79(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[31]，鑒定為人參皂苷Rd。

化合物14：白色無定型粉末，分子式C53H90O22。ESI-TOF-MSm/z1 079.6[M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.40(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.35(1H，m，H-24)，5.15(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1?)，5.01(1H，d，J=7.5 Hz，H-ara-1″″)，4.93(1H，d，J=8.0Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.69(3H，s)，1.66(3H，s)，1.65(3H，s)，1.30(3H，s)，1.12(3H，s)，0.97(6H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[31]，鑒定為人參皂苷Rb2。

化合物15：白色無定型粉末，分子式C54H92O23。ESI-TOF-MSm/z1 109.6[M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.38(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.33(1H，m，H-24)，5.14(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1?)，5.10(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1″″)，4.93(1H，d，J=7.5Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.68(6H，s)，1.63(3H，s)，1.29(3H，s)，1.12(3H，s)，0.98(6H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[31]，鑒定為人參皂苷Rb1。

化合物16：白色無定型粉末，分子式C36H62O11。ESI-TOF-MSm/z671.4 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH6.22(1H，m，H-23)，6.09(1H，d，J=16 Hz，H-24)，5.25(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH2.02(3H，s)，1.62(3H，s)，1.61(3H，s)，1.60(3H，s)，1.49(3H，s)，1.18(3H，s)，1.08(3H，s)，0.94(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[33]，鑒定為人參皂苷Rh6。

化合物17：白色無定型粉末，分子式C36H60O8。ESI-TOF-MSm/z621.4 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.50(1H，t，J=7.0 Hz，H-22)，5.24(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.05(1H，d，J=7.7 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH2.09(3H，s)，1.84(3H，s)，1.64(3H，s)，1.63(3H，s)，1.60(3H，s)，1.27(3H，s)，1.07(3H，s)，0.86(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[34]，鑒定為人參皂苷Rh4。

化合物18：白色無定型粉末，分子式C37H64O9。ESI-TOF-MSm/z653.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.27(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.05(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH2.09(3H，s)，1.68(3H，s)，1.64(3H，s)，1.62(3H，s)，1.16(6H，s)，1.05(3H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表2。參照文獻[35]，鑒定為人參皂苷Rh5。

化合物19：白色無定型粉末，分子式C48H82O18。ESI-TOF-MSm/z947.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.34(1H，m，H-24)，5.15(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1″)，5.10(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1?)，4.96(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.68(3H，s)，1.63(3H，s)，1.33(3H，s)，1.05(3H，s)，1.02(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)，0.84(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[36]，鑒定為絞股藍皂苷XⅦ。

化合物20：白色無定型粉末，分子式C47H80O17。ESI-TOF-MSm/z917.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.34(1H，t，J=8.0 Hz，H-24)，5.15(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1″)，5.00(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1′)，4.74(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1?)；8個甲基質(zhì)子：δH1.68(3H，s)，1.67(3H，s)，1.60(3H，s)，1.33(3H，s)，1.02(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)，0.81(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[37]，鑒定為絞股藍皂苷Ⅸ。

化合物21：白色無定型粉末，分子式C47H80O17。ESI-TOF-MSm/z917.4 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.58[1H，br s，H-ara(f)-1?]，5.34(1H，t，J=8.0 Hz，H-24)，5.16(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1″)，4.95(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1′)；8個甲基質(zhì)子：δH1.69(3H，s)，1.66(3H，s)，1.64(3H，s)，1.52(3H，s)，1.32(3H，s)，1.01(3H，s)，0.98(3H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[31]，鑒定為三七皂苷Fe。

化合物22：白色無定型粉末，分子式C47H80O17。ESI-TOF-MSm/z917.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.35(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.15(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1′)，5.01(1H，d，J=7.5 Hz，H-ara-1?)，4.96(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)；8個甲基質(zhì)子：δH1.99(3H，s)，1.65(3H，s)，1.63(3H，s)，1.59(3H，s)，1.48(3H，s)，1.45(3H，s)，1.04(3H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)數(shù)據(jù)見表1。參照文獻[38]，鑒定為西洋參皂苷L10。

表1 20(S)-原人參二醇型皂苷1～3、11、13～15、19～22的13C-NMR數(shù)據(jù)(pyridine-d5，125 MHz)

續(xù)表1

表2 20(S)-原人參三醇型皂苷4～10、12、16～18的13C-NMR數(shù)據(jù)(pyridine-d5，125 MHz)

續(xù)表2