聶福貴，尹相吉，錢(qián)英紅 ，郭少平，陳湘江，徐躍峰，楊曉野，王 瑞

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；3.內(nèi)蒙古阿拉善盟畜牧獸醫(yī)工作站，內(nèi)蒙古 阿拉善左旗 750306；4.山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局，山東 諸城 262200）

近年來(lái)，我國(guó)奶牛產(chǎn)業(yè)呈現(xiàn)穩(wěn)定和持續(xù)發(fā)展的態(tài)勢(shì)，奶牛存欄數(shù)逐年增加，奶牛養(yǎng)殖在畜牧業(yè)中的比重越來(lái)越大。內(nèi)蒙古自治區(qū)作為我國(guó)最大的奶牛、綿羊及山羊放牧區(qū)和中國(guó)駱駝主要產(chǎn)區(qū)之一［1］，其地處歐亞大陸內(nèi)部，面積 118.3 萬(wàn) km2，資源儲(chǔ)量豐富，素有“東林西礦、南農(nóng)北牧”之稱(chēng)，草原面積約占高原面積的80%，屬歐亞溫帶草原區(qū)的一部分，是我國(guó)四大牧場(chǎng)之一。近年來(lái)，為提高養(yǎng)殖業(yè)的整體水平，推動(dòng)養(yǎng)殖業(yè)健康穩(wěn)定的發(fā)展，進(jìn)一步提高養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益，在國(guó)家的號(hào)召下，全區(qū)各地都在從過(guò)去的散養(yǎng)模式積極向規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化的方向發(fā)展。

但是，隨著養(yǎng)殖方式的轉(zhuǎn)變，諸如飼養(yǎng)管理和疫病防治等問(wèn)題也逐漸凸顯，而寄生蟲(chóng)病一直以來(lái)都是影響?zhàn)B殖業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要因素，困擾著廣大養(yǎng)殖戶(hù)。首先寄生蟲(chóng)可以消耗營(yíng)養(yǎng)并導(dǎo)致機(jī)體抵抗力降低，易誘發(fā)其他疾病，降低了牛的養(yǎng)殖效益；其次由于藥物防治不當(dāng)還可能導(dǎo)致牛肉、牛奶及其制品的食品安全性問(wèn)題；再就是人獸共患寄生蟲(chóng)病和多種動(dòng)物共患寄生蟲(chóng)病，如牛常發(fā)的弓形蟲(chóng)病、隱孢子蟲(chóng)病、新孢子蟲(chóng)病、血吸蟲(chóng)病、肝片吸蟲(chóng)病和棘球蚴病等，嚴(yán)重威脅著人民群眾的身體健康。由于寄生蟲(chóng)發(fā)病多呈隱性或慢性經(jīng)過(guò)，加上牛本身的耐受力較其他動(dòng)物強(qiáng)，盡管造成的損失很大，但不易被人察覺(jué)，因而常被忽視［2］。從目前對(duì)牛常見(jiàn)寄生蟲(chóng)調(diào)查數(shù)據(jù)來(lái)看，各地感染情況存在較大差異，因此，為了解內(nèi)蒙古地區(qū)規(guī)模化牛場(chǎng)牛體寄生蟲(chóng)的感染情況，為今后治療和預(yù)防本地區(qū)寄生蟲(chóng)病提供數(shù)據(jù)參考，筆者于2015—2017年，對(duì)內(nèi)蒙古呼和浩特市和錫林郭勒盟的部分牛場(chǎng)進(jìn)行寄生蟲(chóng)的流行病學(xué)調(diào)查。

表1 2015年規(guī)模化牛場(chǎng)牛感染寄生蟲(chóng)情況

1 材料與方法

1.1 樣品采集

于2015—2017年間，共采集奶牛樣品1 009份，包括糞樣（主要用于線(xiàn)蟲(chóng)、球蟲(chóng)、絳蟲(chóng)、吸蟲(chóng)）、全血（主要用于檢測(cè)血液原蟲(chóng)）、鼻拭子（主要用于肺絲蟲(chóng)檢測(cè)）、陰道拭子（主要用于檢測(cè)毛滴蟲(chóng)）。

1.2 試劑

飽和食鹽水：將蒸餾水煮沸后，向其加入食鹽直至飽和，倒入燒杯中放涼備用；生理鹽水：稱(chēng)取9 g NaCl倒入三角瓶中，然后加入1 000mL蒸餾水，用玻璃棒攪拌混勻，制成0.9%NaCl溶液；快速瑞姬氏染液試劑盒 （南京建成生物工程研究所）；牛新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒（廣州測(cè)迪生物科技有限公司）。

1.3 糞便樣品的檢查

1.3.1 飽和鹽水漂浮法：稱(chēng)取糞樣2 g，放入燒杯中，量取58 mL飽和食鹽水倒入燒杯中，用鑷子將糞樣攪拌混勻，再用糞篩過(guò)濾至新的燒杯中，然后將濾液倒入事先準(zhǔn)備好的小玻璃瓶中至有凸液面即可，漂浮20min，用蓋玻片蘸取濾液，在顯微鏡下觀(guān)察［3-5］。

1.3.2 離心沉淀法：稱(chēng)取5 g糞樣，置于燒杯中，加25 mL清水，攪拌均勻。經(jīng)糞篩過(guò)濾至10mL離心管中，置離心機(jī)上離心5 min（轉(zhuǎn)速為1 000 r/min），然后傾去管內(nèi)上層液體，再加9 mL清水，混勻，重復(fù)離心2次，直至上清液清亮為止，倒去部分上清液，留約為沉淀物1/2的液體量，用吸管抽吸混勻后，吸取糞液滴在載玻片上，加蓋玻片后鏡檢［3-5］。

1.4 血液樣品的檢查

1.4.1 血涂片的檢查：取一塊干凈的載玻片置于桌面上，將一滴全血滴在載玻片中央，然后取一塊蓋玻片與全血接觸，待血蔓延開(kāi)后，以45°角從右向左快速推動(dòng)，將血液涂成舌狀，然后采用瑞姬氏染液染色，在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察血液中原蟲(chóng)的感染情況。

1.4.2 新孢子蟲(chóng)的檢查：按照牛新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作步驟進(jìn)行，計(jì)算血清陽(yáng)性率，并做分析。

1.5 鼻腔拭子和陰道拭子的檢查

首先用棉拭子收集鼻腔和陰道表面的黏液，然后用一次性塑料吸管吸取生理鹽水，反復(fù)沖洗棉拭子，將得到的液體倒入10mL離心管內(nèi)，再放入離心機(jī)中離心5 min（1 500 r/min）。待離心完成后，棄上清，吸取沉淀于載玻片上進(jìn)行鏡檢，觀(guān)察是否有肺絲蟲(chóng)蟲(chóng)卵或毛滴蟲(chóng)等原蟲(chóng)。

1.6 蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)

對(duì)糞便樣品，采用麥克馬斯特氏法計(jì)數(shù)每克糞便蟲(chóng)卵數(shù)（EPG）。首先按1.3的方法制備樣品，然后用滴管將樣品加到麥克馬斯特計(jì)數(shù)板內(nèi)，在顯微鏡下計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)室內(nèi)的全部蟲(chóng)卵，取平均值，再乘以 200，得到的結(jié)果即為 EPG［3-5］。

1.7 蟲(chóng)卵的鑒定

對(duì)檢獲的蟲(chóng)卵，依據(jù)蟲(chóng)卵的大小、形狀、顏色、卵殼和內(nèi)容物等特征，與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，鑒別蟲(chóng)卵的種類(lèi)［6］。

2 結(jié)果與分析

2.1 2015年規(guī)?；膛?chǎng)寄生蟲(chóng)感染情況

2015年共計(jì)調(diào)查了4個(gè)牛場(chǎng)333頭奶牛，由表1可知，主要檢出的寄生蟲(chóng)為線(xiàn)蟲(chóng)（主要為毛圓科線(xiàn)蟲(chóng)）和艾美耳球蟲(chóng)；就感染數(shù)量來(lái)看，球蟲(chóng)感染較線(xiàn)蟲(chóng)嚴(yán)重，其中以土左旗牛場(chǎng)（2）感染最多，有65例，感染率為65%，線(xiàn)蟲(chóng)感染率相較球蟲(chóng)低，且屬帶蟲(chóng)狀態(tài)，另有肺絲蟲(chóng)1例。利用免疫學(xué)方法檢測(cè)新孢子蟲(chóng)病，發(fā)現(xiàn)錫林郭勒盟牛場(chǎng)血清學(xué)陽(yáng)性率可達(dá)71.9%；土左旗牛場(chǎng)（2）次之，為30%；土左旗牛場(chǎng)（1）較少，為 6%；呼市周邊牛場(chǎng)（2）未檢出。在4家牛場(chǎng)內(nèi)均未檢出吸蟲(chóng)、絳蟲(chóng)、血液原蟲(chóng)和毛滴蟲(chóng)。

表2 2016年規(guī)模化牛場(chǎng)牛感染寄生蟲(chóng)情況

表3 2017年規(guī)?；?chǎng)牛感染寄生蟲(chóng)情況

表4 2015—2017年主要感染寄生蟲(chóng)對(duì)比

2.2 2016年規(guī)?；膛?chǎng)寄生蟲(chóng)感染情況

2016年共計(jì)調(diào)查了4個(gè)牛場(chǎng)381頭奶牛，由表2可知，4家牛場(chǎng)均未檢出包括線(xiàn)蟲(chóng)、球蟲(chóng)、吸蟲(chóng)、肺絲蟲(chóng)、毛滴蟲(chóng)和血液原蟲(chóng)在內(nèi)的任何寄生蟲(chóng)，感染率為0。

2.3 2017年規(guī)?；膛?chǎng)寄生蟲(chóng)感染情況

2017年共計(jì)調(diào)查了4個(gè)牧場(chǎng)295頭奶牛，由表3可知，主要感染的寄生蟲(chóng)為線(xiàn)蟲(chóng)與球蟲(chóng)，其中以球蟲(chóng)為主。在被調(diào)查的4個(gè)牧場(chǎng)中，呼市周邊牛場(chǎng)（1）球蟲(chóng)感染率最高，為16.7%；土左旗牛場(chǎng)（2）的球蟲(chóng)感染強(qiáng)度最高，為100～2 900個(gè)/g。此外，4家牧場(chǎng)均未檢出吸蟲(chóng)、絳蟲(chóng)、肺絲蟲(chóng)、毛滴蟲(chóng)和血液原蟲(chóng)。

2.4 2015—2017年主要寄生蟲(chóng)感染情況對(duì)比

圖1 2015—2017年規(guī)?；?chǎng)寄生蟲(chóng)感染率

由表4可知，在2015—2017年的3年時(shí)間內(nèi)，內(nèi)蒙古部分地區(qū)規(guī)?；?chǎng)的寄生蟲(chóng)感染情況整體呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。如圖1所示，2015年線(xiàn)蟲(chóng)和球蟲(chóng)的總感染率為52.8%，2016年達(dá)最低為0，2017年相比2016年感染率有所上升，但總體上來(lái)看，依然呈下降趨勢(shì)。

3 討論

通過(guò)該次調(diào)查，對(duì)內(nèi)蒙古呼和浩特市和錫林郭勒盟等地的規(guī)?；?chǎng)3年間的寄生蟲(chóng)感染情況進(jìn)行了深入的了解。由調(diào)查結(jié)果可知，感染的寄生蟲(chóng)主要為線(xiàn)蟲(chóng)、球蟲(chóng)和新孢子蟲(chóng)，個(gè)別牛場(chǎng)在鼻拭子中檢出了肺絲蟲(chóng)，未有其他寄生蟲(chóng)（絳蟲(chóng)、吸蟲(chóng)、毛滴蟲(chóng)、血液原蟲(chóng)）檢出，且寄生蟲(chóng)的總感染情況基本呈逐年下降的趨勢(shì)，這表明養(yǎng)殖戶(hù)在調(diào)查之前并未對(duì)寄生蟲(chóng)給予足夠的重視，之后在調(diào)查的基礎(chǔ)上，加強(qiáng)了對(duì)寄生蟲(chóng)的防治工作，相關(guān)預(yù)防和驅(qū)蟲(chóng)工作取得了很好的成效。

在調(diào)查的牛場(chǎng)中，以艾美耳球蟲(chóng)和毛圓科線(xiàn)蟲(chóng)感染最為普遍。牛球蟲(chóng)病是由艾美耳屬的幾種球蟲(chóng)寄生于牛腸道引起的，牛主要表現(xiàn)為急性腸炎、血痢等為特征的病癥，多發(fā)生于犢牛［6］。牛線(xiàn)蟲(chóng)病是由線(xiàn)蟲(chóng)寄生于牛的消化道內(nèi)引起的，主要表現(xiàn)明顯的持續(xù)性腹瀉、排出帶黏液和血的糞便，幼畜發(fā)育受阻，進(jìn)行性貧血，嚴(yán)重消瘦，甚至?xí)橛猩窠?jīng)癥狀［7］。由于這兩大類(lèi)寄生蟲(chóng)獨(dú)特的生活史和生物學(xué)特性，在各地均流行廣泛，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的危害，因此在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)給與足夠重視。

除了前述兩類(lèi)蟲(chóng)體外，2015年還檢出了新孢子蟲(chóng)，并且感染數(shù)量相對(duì)較多。奶牛新孢子蟲(chóng)病是由犬新孢子蟲(chóng)引起的一類(lèi)多種家畜共患原蟲(chóng)病，其特征是奶牛體重和產(chǎn)奶量明顯下降，造成孕畜流產(chǎn)、死胎、新生幼畜運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)疾病，淘汰期提前，可造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。一般認(rèn)為，該病主要通過(guò)胎盤(pán)感染和經(jīng)口傳播［8］，如在歐洲和美國(guó)75%～95%的犢牛通過(guò)胎盤(pán)感染，而新西蘭主要經(jīng)口傳播［9］。對(duì)于新孢子蟲(chóng)病的治療，尚無(wú)特效藥，國(guó)內(nèi)對(duì)于奶牛新孢子蟲(chóng)病一直未給與足夠的重視，這可能是導(dǎo)致所調(diào)查牛場(chǎng)新孢子蟲(chóng)感染率居高的原因。對(duì)于該病的防治，應(yīng)在查明傳染源的基礎(chǔ)上，通過(guò)科學(xué)預(yù)防措施來(lái)進(jìn)行控制。

此外，在調(diào)查的1 009份樣品中未檢出吸蟲(chóng)，主要原因是與當(dāng)?shù)氐牡乩項(xiàng)l件有關(guān)。呼和浩特市、呼和浩特市所屬的土默特左旗及錫林郭勒盟屬于山地平原地區(qū)，四季氣候變化明顯，日溫差大，降雨量少，年均降雨量?jī)H350mm，而吸蟲(chóng)的發(fā)育過(guò)程必須有中間宿主螺類(lèi)，這些地區(qū)年降雨量很少，少有湖泊河流，因此螺類(lèi)稀少，吸蟲(chóng)沒(méi)有了中間宿主自然無(wú)法生存［10］。

針對(duì)以上的調(diào)查結(jié)果和基于調(diào)查結(jié)果的防控效果，為了更好地防控寄生蟲(chóng)的感染，筆者建議內(nèi)蒙古地區(qū)的規(guī)模化牛場(chǎng)應(yīng)該做到以下幾點(diǎn)：①在線(xiàn)蟲(chóng)的防控中，整體防治效果較理想，線(xiàn)蟲(chóng)感染率也較低，但驅(qū)凈率高低不同，因此，可在目前防治的基礎(chǔ)上，調(diào)查剩余蟲(chóng)體是否具有耐藥性，并與其他驅(qū)蟲(chóng)藥交叉使用，提高驅(qū)蟲(chóng)效果并盡量避免耐藥性現(xiàn)象的產(chǎn)生。②針對(duì)球蟲(chóng)病的防治上，應(yīng)將犢牛與成年牛分群飼養(yǎng)，避免球蟲(chóng)卵囊污染犢牛的飼料；舍飼牛的糞便和圈舍需集中消毒，每周一次；做好藥物驅(qū)蟲(chóng)工作，一年分2次進(jìn)行。③對(duì)于新孢子蟲(chóng)病血清學(xué)陽(yáng)性牛，應(yīng)及時(shí)淘汰，并做好消毒和無(wú)害化處理，并加強(qiáng)牧場(chǎng)內(nèi)犬的管理，不要讓犬吃到流產(chǎn)胎兒、胎膜或死犢牛；規(guī)范奶牛場(chǎng)飼養(yǎng)管理，科學(xué)調(diào)配飼料，增強(qiáng)奶牛體質(zhì)，提高奶?？共×?；在引進(jìn)牛只時(shí)，一定要進(jìn)行檢疫，避免將染有新孢子蟲(chóng)的病牛引入牛場(chǎng)［11］。