謝楚平

甲狀腺癌作為一種內(nèi)分泌惡性腫瘤, 有著相當(dāng)高的發(fā)病率且發(fā)病率逐年上升。PTC占甲狀腺癌的85%左右。PTC的發(fā)生涉及多個(gè)基因的突變, 如BRAF、NRAS、PD-L1、PD-1基因等［1,2］。但是BRAF基因突變和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否存在相關(guān)性以及其具體的情況在醫(yī)學(xué)界一直沒有定論, 爭議頗多。目前, 爭議主要有：BRAF基因突變可能和 PTC 的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性；BRAF基因突變有可能讓PTC 分化情況更糟糕；如果BRAF基因突變那么會(huì)使得PTC 發(fā)生淋巴

結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性增大；BRAF基因突變和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移不相關(guān)［3］。不同研究間總會(huì)存有不同的干擾因素, 研究樣本情況等也不可能做到完全相同, 所以研究結(jié)論不一致［4］。因此,本研究主要探究BRAF基因突變與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月～2018年3月在本院病理診斷為 PTC 并進(jìn)行了淋巴結(jié)清掃術(shù)的85例患者為研究對象。對參與本次研究患者的年齡、性別、發(fā)病情況、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、是否有鈣化、癌灶情況、手術(shù)的具體情況等進(jìn)行詳細(xì)記錄。本次研究采集85例PTC患者手術(shù)切除所得的新鮮組織, 負(fù)責(zé)的病理學(xué)醫(yī)生將患者瘤旁的正常和腫瘤組織進(jìn)行區(qū)分后立即保存于液氮中, 要求每個(gè)病例至少有3名病理學(xué)教授嚴(yán)格根據(jù)世界衛(wèi)生組織分類標(biāo)準(zhǔn)開展形態(tài)學(xué)觀察。

1.2 方法 DNA提取把石蠟切片切成厚度為 8 μm 的切片后, 一個(gè)離心管可放入1～ 2 片。之后進(jìn)行DNA 脫蠟操作確認(rèn)消化后用QINGEN石蠟組織 DVA 提取盒的使用方法進(jìn)行 DNA抽取。BRAF基因突變的檢測：在抽取到 DNA 后進(jìn)行PCR測序來檢測BRAF 基因第 15 號外顯子以判斷其是否發(fā)生突變。操作方法：在避光環(huán)境下將BRAF 混勻并完成配置。在反應(yīng)體系 PCR 板中放入待測樣本的DNA以及標(biāo)準(zhǔn)品, 加增 26 個(gè)循環(huán)孔, 每個(gè)循環(huán)孔都要進(jìn)行熒光素(FAM)以及ROX 參比熒光信號的搜集。樣本突變信號出現(xiàn)典型的S 型擴(kuò)增曲線升起, 則代表樣本 BRAF基因突變陽性；樣本突變信號沒有典型的 S 型曲線升起或者Ct≥23 時(shí)認(rèn)為該樣本 BRAF基因突變陰性。 在PCR反應(yīng)體系中添加熒光基團(tuán),

通過熒光信號的積累來實(shí)時(shí)進(jìn)行PCR過程的檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)；PTC 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)因素采用Logistic回歸分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BRAF基因突變檢測結(jié)果 85例PTC 患者中有50例患者的腫瘤組織檢查發(fā)現(xiàn)有BRAFV600E點(diǎn)突變, BRAF基因突變率為58.82%(50/85), 樣本DNA的提取及突變基因檢測的實(shí)驗(yàn)比較效果明顯。見表1。

表1 PTC 中BRAFV600E測序結(jié)果(n)

2.2 PTC 患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)因素的單因素和多因素分析85例患者中有55.29%(47/85)的患者發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。單因素分析結(jié)果顯示, 不同年齡、是否原發(fā)病灶包膜浸潤、是否單發(fā)病灶、不同腫瘤大小、有無腫物鈣化、有無神經(jīng)壓迫癥狀者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占比不同(P＜0.05)。將上述因素納入多因素分析中, 多因素分析結(jié)果提示年齡≥45歲、原發(fā)病灶包膜浸潤、多發(fā)病灶、腫瘤大?。?0 mm為PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素 (OR＞1,P＜0.05)。

2.3 PTC 患者BRAF基因突變相關(guān)因素的分層分析 BRAF基因突變和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有關(guān)聯(lián), BRAF基因突變和其他變量間可能存在一定的交互關(guān)系。故進(jìn)行 BRAF基因突變與其他自變量的雙變量交互作用分析, 最終發(fā)現(xiàn)腫瘤鈣化和腫瘤大小＞40 mm均和 BRAF基因突變存在交互作用。見表2。

表2 PTC患者與BRAF基因突變相關(guān)因素的分層分析［n(%)］

3 討論

研究顯示BRAFV600E基因突變會(huì)讓腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)增殖和分化, 這屬于甲狀腺癌中的一種遺傳學(xué)事件并且其在 PTC 中發(fā)生率最高, 目前有研究結(jié)果顯示幾率最高可達(dá)80%, 而甲狀腺癌患者有85%左右都屬于PTC［5］。所以深入探究 BRAF基因突變與 PTC 之間具有的關(guān)系是有利于進(jìn)一步明晰甲狀腺腫瘤細(xì)胞的發(fā)生機(jī)制、病理內(nèi)容等具體情況, 可以推進(jìn)該方面的治療進(jìn)展, 有利于患者更好地恢復(fù)。盡管現(xiàn)有的研究仍找不到BRAF基因突變的發(fā)生與PTC臨床病理特征具體關(guān)系, 但相信隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展, 最后一定能探索到其中的奧秘。本次旨在對BRAF基因突變與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性進(jìn)行研究, 所得數(shù)據(jù)也具有一定的代表性。國內(nèi)外對于該課題的研究自然也不少, 相關(guān)研究顯示：BRAF 的發(fā)生是和PTC有著緊密聯(lián)系的, 其中BRAF 基因突變很有可能是因?yàn)镻TC 的征性遺傳學(xué)發(fā)生了變化；BRAF基因突變會(huì)讓患者的預(yù)后情況更差。不同的研究所顯示的BRAF 基因突變在PTC之中的突變率也是不一樣的：有研究選擇了100例甲狀腺癌患者作為樣本最后發(fā)現(xiàn)其 BRAF 基因突變只在PTC 中進(jìn)行表達(dá), 其陽性率為55%；也有研究給出PTC中BRAF的突變率發(fā)生區(qū)間為33%～78%［6-8］。我國近期的相關(guān)研究結(jié)果顯示BRAF基因在PTC中的突變率為64.63%。本次研究中85例PTC患者其BRAF 的突變率為58.82%(50/85)。這一數(shù)據(jù)和國內(nèi)、外研究的結(jié)果相近, 因此認(rèn)為PTC與BRAF基因突變是具有一定關(guān)聯(lián)的［9］。國外有關(guān)專家在對 PTC 患者進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)BRAF基因突變的患者有著很高的頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率；有醫(yī)學(xué)團(tuán)隊(duì)在深入研究了340例分化型甲狀腺癌的病理資料后, 通過數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn) BRAF 基因突變和頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移已經(jīng)成為了PTC術(shù)后復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)后因素［10］。本次研究中的85例患者有47例出現(xiàn)了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移, 轉(zhuǎn)移率為55.29%, 所以認(rèn)為BRAF基因突變的患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幾率很大。作者還對進(jìn)行BRAF基因突變與其他自變量的雙變量交互作用進(jìn)行了分析, 最后得出結(jié)論：PTC患者存有一定的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率, 但BRAF基因突變是PTC的特征性分子事件, 年齡≥45歲、多發(fā)病灶、腫瘤＞40 mm的患者更有可能出現(xiàn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。對于該課題的研究作者會(huì)一直進(jìn)行,也希望該方面的研究成果越來越多, 以支持臨床的相關(guān)治療,讓更多的患者能恢復(fù)健康, 提高生活質(zhì)量。