国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

三黃瀉心湯體外抑制耐藥金黃色葡萄球菌活性測定

2018-09-07 08:13:18王鈺雄劉偉偉李雪萍何熙果王艷秋
實用中醫(yī)藥雜志 2018年4期
關鍵詞:麥氏瀉心湯菌液

王鈺雄,劉偉偉,李雪萍,何熙果,王艷秋

(1.成都中醫(yī)藥大學2013級本科生,四川 成都 611137;2.成都中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院,四川 成都611137;3.成都中醫(yī)藥大學2015級本科生,四川 成都 611137)

“三黃瀉心湯”亦稱“瀉心湯”,是張仲景的經典方劑,由黃連、大黃、黃芩組成,有瀉火解毒、清熱燥濕、除痞止血之功效,是中醫(yī)臨床治療心胃火邪內熾證的常用方劑。本研究對三黃瀉心湯的傳統(tǒng)湯劑進行標準耐藥金黃色葡萄球菌和普通耐藥金黃色葡萄球菌的抑菌作用進行觀察,探討三黃瀉心湯的抑菌作用。

1 實驗儀器與藥物

實驗儀器:恒溫培養(yǎng)箱,凈化工作臺,DHG--9125A電熱恒溫鼓風干燥箱,壓力蒸汽滅菌器,電子天平等。

藥物:大黃、黃連、黃芩(成都新荷花藥業(yè)有限公司),營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(成都中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院實驗室提供),普通耐藥金黃色葡萄球菌(成都中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院實驗室提供),標準耐藥金黃色葡萄球菌(中科院生物研究所提供)。

2 方法與結果

2.1 三黃瀉心湯的制備

取中藥飲片大黃10g,黃連5g,黃芩5g(質量比為2∶1∶1)混合,加300mL純化水浸泡30 min,煎煮60 min,后濃縮為200mL,制成含生藥1g/mL藥液,即每1mL濃縮液相當于原生藥1g,過濾后放入燒杯內密封,置4℃保存?zhèn)溆?。實驗時,稀釋至相應濃度。

2.2 0.5麥氏藥敏菌液的制備

0.5麥氏比濁管:0.2mL0.25%BaCl2、9.8mL1%H2SO4,約1×108/mL。1麥氏比濁管:0.4mL0.25%BaCl2、9.6mL1%H2SO4,約3×108/mL。

普通耐藥菌菌液。將純化的普通耐藥菌接種于普通瓊脂平板上,做好標記,35℃培養(yǎng)24 h,無菌操作挑取新鮮培養(yǎng)的菌落,加入3mL的無菌生理鹽水試管中,混勻后與0.5麥氏和1麥氏標準管比較,逐步調整菌液濃度至0.5麥氏左右,作為供試菌液。

標準耐藥菌菌液。按說明書方法,在超凈臺復蘇細菌。用接種環(huán)蘸取菌液,直接涂布到瓊脂平板上,做好標記35℃培養(yǎng)24h。按上述方法制作0.5麥氏標準耐藥菌,作為供試菌液。

2.3 最低抑菌濃度(MIC)測定及結果

二倍試管稀釋法。取無菌試管10只,編號A1-A10,于A2-A10中加入10mL無菌水,取中藥原液20mL,于A1中加入10mL。A2中加入10mL,混合后取出10mL,加入到A3中,以此類推至A9,混合后取出10mL,棄之。A10中只有無菌水。這樣就形成了從A1-A9濃度依次為10%(1∶10)、5%(1∶20)、2.5%(1∶40)、1.25%(1∶80)、0.625%(1∶160)、0.3125%(1∶320)、0.15625%(1∶640)、0.078125%(1∶1280)、0.0390625%(1∶2560)。

制備含藥瓊脂培養(yǎng)基。瓊脂培養(yǎng)基配方為:牛肉膏3.0g,蛋白胨10.0g,氯化鈉5.0g,瓊脂20g,溶解于1000mL純水中,pH=7.3±0.1。

取上述540mL培養(yǎng)基,分裝于10個燒瓶,每個54mL,編號B1-B10,取上述稀釋中藥液,按6mLA1加入B1,6mLA2加入B2,以此類推,逐次將藥液與培養(yǎng)基混勻,混合后于121℃高壓滅菌15min,冷至50℃時,將B1中培養(yǎng)基在超凈臺上分別傾注6個平皿,每個10mL含藥培養(yǎng)基,重新編號。濃度由高到低依次為A1、A2、A3、A4、A5、A6……J1、J2、J3、J4、J5、J6共60個培養(yǎng)皿。放4℃?zhèn)溆?。這樣每個培養(yǎng)基的含藥濃度為對應2.3.1中藥液濃度的1/10。另制備若干普通瓊脂培養(yǎng)基備用[1]。

接種。在超凈臺內,用接種環(huán)蘸取上述0.5麥氏普通耐藥菌菌液,在管壁擠壓去多余的菌液,均勻地涂布在A-J組的平板上,另用燒灼滅菌的接種環(huán)在未編號的空白瓊脂培養(yǎng)基上,以接種的操作劃線。將上述61個平板置于35℃溫箱,培養(yǎng)24h。24h后觀察并記錄各平板結果,以無菌生長的含藥平板的藥濃度為普通耐藥菌MIC。同樣的操作,確定標準耐藥菌MIC。

結果顯示,三黃瀉心湯對標準耐藥金黃色葡萄球菌、普通耐藥金黃色葡萄球菌的MIC分別為2.5mg/mL、0.3125mg/mL,空白培養(yǎng)基未見細菌生長。結果見表1-2。

表1 不同濃度三黃瀉心湯對普通耐藥金黃色葡萄球菌抑菌作用測定結果 (mg/mL)

表2 不同濃度三黃瀉心湯對標準耐藥金黃色葡萄球菌抑菌作用測定結果 (mg/mL)

3 討 論

三黃瀉心湯中大黃、黃連和黃芩三味中藥,其各成分均有一定抗菌作用[2]。本實驗結果提示三黃瀉心湯具有抑制MRSA的作用,對臨床分離的普通耐藥性金黃色葡萄球菌的抑制作用強于標準MRSA。

現(xiàn)代研究證實,MRSA細菌耐藥的原因與β-內酰胺酶的產生和青霉素結合蛋白2a(PBP2a)的產生有關,PBP2a是一種β-內酰胺類抗生素低親和性蛋白,在MRSA細菌耐藥中起著主要的作用[3]。FtsZ蛋白是最早出現(xiàn)的細菌分裂蛋白,在細胞分裂中起主要作用,介導PBP2在細胞分裂過程中插入到細胞膜中,由于PBP2是MRSA抗β內酰胺類抗菌素所需要的,因此破壞其活性可重新使MRSA對β內酰胺類變得敏感。抑制FtsZ蛋白還能抑制MRSA的生長和生存能力。因此我們推測FtsZ蛋白有可能是三黃瀉心湯治療MRSA的作用靶點之一。

本研究表明,三黃瀉心湯對普通耐藥菌和標準耐藥菌均有較強的抑制作用,對前者的活性是后者的8倍,由此證明三黃瀉心湯對耐藥菌有較強的抑制作用,但三黃瀉心湯對于FtsZ的作用影響有待進一步研究。

猜你喜歡
麥氏瀉心湯菌液
多糖微生物菌液對油菜吸收養(yǎng)分和土壤氮磷淋失的影響
辨證仍是中醫(yī)之魂——從小瀉心湯止血說起
Bonfire Night
鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗中通過吸光度值測定菌液濃度的方法研究
慢性胃炎采用半夏瀉心湯治療的臨床觀察
復合微生物菌液對黃瓜生長和抗病蟲性效應研究
上海蔬菜(2015年2期)2015-12-26 05:03:40
經麥氏點橫切口與傳統(tǒng)麥氏切口闌尾切除的臨床對比研究
大黃黃連瀉心湯加味治療胃癌癌前病變30例
半夏瀉心湯治療慢性咳嗽42例
腸癰湯內服聯(lián)合大蒜三黃糊劑麥氏點外敷治療急、慢性闌尾炎230例
临江市| 景洪市| 涿鹿县| 秀山| 黄平县| 项城市| 津南区| 颍上县| 于田县| 双城市| 乐昌市| 那坡县| 荥经县| 潮州市| 荆门市| 仁化县| 乐昌市| 广水市| 德江县| 永兴县| 金湖县| 乌兰察布市| 阿拉善左旗| 莱西市| 连江县| 武强县| 广安市| 当涂县| 忻州市| 托克逊县| 邮箱| 怀集县| 新民市| 清新县| 舟曲县| 肇东市| 卢湾区| 东台市| 安泽县| 手机| 孟连|