王亞洲 劉蔓文 唐培安 陸月明 趙葉飛 馮俊

[摘要]本文針對(duì)儲(chǔ)糧害蟲磷化氫抗性嚴(yán)重，影響儲(chǔ)糧安全的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，測(cè)定了湖南省12個(gè)赤擬谷盜品系的磷化氫和敵敵畏抗性水平，并對(duì)抗性分布和發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行分析。結(jié)果表明，12個(gè)品系的磷化氫抗性系數(shù)范圍為1.7～44.4，其中8個(gè)是敏感品系，其余4個(gè)為抗性品系。對(duì)不同場(chǎng)所的抗性情況分析發(fā)現(xiàn)，酒廠、加工廠、飼料廠和農(nóng)戶均有抗性品系和敏感品系，而來(lái)自糧庫(kù)的1個(gè)品系為敏感品系，表明赤擬谷盜對(duì)磷化氫的抗性水平與場(chǎng)所沒(méi)有顯著相關(guān)性。對(duì)赤擬谷盜敵敵畏抗性水平測(cè)定結(jié)果表明，12個(gè)品系的致死中濃度（LC₅₀）值為0.051～0.108g/L，相對(duì)敏感性水平在2.1倍以內(nèi)，表明這些赤擬谷盜品系對(duì)敵敵畏的敏感性差異不大，推測(cè)其對(duì)敵敵畏的抗性水平較低。

[關(guān)鍵詞]赤擬谷盜;磷化氫;敵敵畏;抗性測(cè)定

赤擬谷盜（Triholium castaneum）屬鞘翅目（Coleplera）、擬步甲科（Tenehrionidae）、擬谷盜屬（Triholium），是一種危害性嚴(yán)重的儲(chǔ)糧害蟲，分布于世界各地[1]，其食性雜，可危害谷物、油料、動(dòng)物性產(chǎn)品及加工品、中藥材等，其中面粉被害最重。除取食外，成蟲會(huì)分泌臭液，大量分泌時(shí)會(huì)產(chǎn)生污染，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。磷化氫（PH₃）是一種廣泛應(yīng)用于儲(chǔ)糧害蟲防治的熏蒸藥劑，具有穿透性強(qiáng)、擴(kuò)散性好、殺蟲效果顯著、成本低等特點(diǎn)[3]。然而由于長(zhǎng)期、單一使用磷化氫以及操作不規(guī)范等原因，儲(chǔ)糧害蟲對(duì)磷化氫產(chǎn)生了不同程度的抗性，磷化氫的殺蟲效果也因此大幅度降低[4]。敵敵畏是一種有機(jī)磷殺蟲劑，具有觸殺、熏蒸等作用，常被用作防治儲(chǔ)糧害蟲的空倉(cāng)殺蟲劑。本文測(cè)定了采白湖南省的12個(gè)赤擬谷盜的品系對(duì)磷化氫和敵敵畏抗性水平，并分析了抗性水平與采集場(chǎng)所的關(guān)系，不僅為儲(chǔ)糧害蟲磷化氫抗性治理提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，還為科學(xué)合理防治儲(chǔ)糧害蟲提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試?yán)ハx

供試?yán)ハx采白湖南省不同地區(qū)和場(chǎng)所，具體情況見(jiàn)表1。

1.1.2 儀器與試劑

恒溫恒濕培養(yǎng)箱（BSC-250）：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;氣密性注射器：Hamilton公司;電熱恒溫鼓風(fēng)干燥（DUG-9246A）：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;電子分析天平：賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;PH3氣體檢測(cè)儀：北京佳糧科貿(mào)有限公司;粉碎機(jī)：天津市泰斯特儀器有限公司;PH3發(fā)生和收集裝置：自制;濃硫酸、磷化鋅粉末、敵敵畏：南京市若研實(shí)驗(yàn)器材有限公司。

1.2 方法

1.2.1 飼料準(zhǔn)備

使用全麥粉作為飼料。將小麥洗凈后置于80℃干燥箱中消毒、烘干，干燥過(guò)程中每隔0.5h對(duì)小麥進(jìn)行翻動(dòng)以保證小麥水分均勻。烘干后參照GB 5497-1985《糧食、油料檢驗(yàn)水分測(cè)定法》調(diào)節(jié)小麥的水分至15%±1%，用粉碎機(jī)將小麥粉碎成全麥粉，密封后放入冰箱中冷藏保存。

1.2.2 試蟲培養(yǎng)

從每個(gè)選定的晶系中，分別挑選數(shù)百只赤擬谷盜成蟲，將其置于裝有200g全麥粉的500mL廣口瓶中，將廣口瓶置于南京財(cái)經(jīng)大學(xué)儲(chǔ)藏物昆蟲研究室內(nèi)飼養(yǎng)，設(shè)定培養(yǎng)條件為溫度30℃±1℃，相對(duì)濕度75%，無(wú)光照。待成蟲產(chǎn)卵3d后，挑出全部成蟲并轉(zhuǎn)移至另一瓶飼料中繼續(xù)產(chǎn)卵，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的培養(yǎng)后，挑選1～3周齡的羽化成蟲進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.3 磷化氫氣體發(fā)生與濃度測(cè)定

采用聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織（FAO）[5]推薦的裝置，PH₃氣體由磷化鋅和10%硫酸反應(yīng)制備而得，發(fā)生裝置見(jiàn)圖1。

1.2.4 磷化氫抗性測(cè)定

采用FAO推薦的磷化氫抗性測(cè)定方法，并稍做改動(dòng)。通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，設(shè)定5～7個(gè)濃度梯度，使試蟲死亡率為16%-84%，設(shè)1個(gè)空白對(duì)照，每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)。把50只試蟲放入熏蒸瓶，用高真空硅脂把熏蒸瓶與玻璃旋塞密封。使用相應(yīng)量程的氣密性注射器抽取PH₃氣體，從熏蒸瓶上的橡膠塞注入熏蒸瓶?jī)?nèi)，輕輕搖勻，置于溫度為30℃、相對(duì)濕度為75%、無(wú)光照的培養(yǎng)箱中密閉熏蒸20h。熏蒸結(jié)束后在通風(fēng)櫥中打開熏蒸瓶的玻璃旋塞，散氣1h后取出試蟲，給飼料飼養(yǎng)至少3d后，統(tǒng)計(jì)死亡數(shù)量，用毛筆觸碰蟲體，如果試蟲的附肢都不動(dòng)即視作死亡，記錄每個(gè)濃度下試蟲的死亡數(shù)與總數(shù)。

1.2.5 敵敵畏抗性測(cè)定

參考侯毅等[6]的方法，并稍做改動(dòng)。用丙酮將敵敵畏原油稀釋成不同的濃度，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，設(shè)定5-7個(gè)濃度梯度，使試蟲的死亡率為16%-84%，用丙酮做對(duì)照實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)。吸取1mL丙酮稀釋過(guò)的敵敵畏試劑，將試劑均勻地涂在直徑為9cm的培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放置在通風(fēng)處1h，待丙酮揮發(fā)之后，將30只試蟲放于培養(yǎng)皿中，讓其在培養(yǎng)皿中運(yùn)動(dòng)2h。將處理過(guò)的試蟲移到新的培養(yǎng)皿中，加入飼料，過(guò)24h，統(tǒng)計(jì)死亡數(shù)量，用毛筆觸碰蟲體，如果試蟲的附肢都不動(dòng)即視作死亡，記錄每個(gè)濃度下試蟲的死亡數(shù)與總數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 17.0軟件分析測(cè)定結(jié)果，分析得出12個(gè)品系的LC₅₀值、LC₉₉值和相應(yīng)的毒力回歸方程并計(jì)算抗性系數(shù)（Rf）以及相對(duì)抗性系數(shù)。其中，抗性系數(shù)（Rf）=試蟲實(shí)際LC₅₀/敏感品系LC₅₀，相對(duì)系數(shù)=試蟲實(shí)際LC₅₀/最小LC₅₀。

2 結(jié)果與分析

2.1 赤擬谷盜磷化氫抗性測(cè)定

赤擬谷盜各品系的磷化氫抗性數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。結(jié)果表明，12個(gè)赤擬谷盜品系的磷化氫抗性系數(shù)范圍為1.7-44.4，其中有8個(gè)品系是敏感品系，占調(diào)查總數(shù)的66.7%，其余4個(gè)品系為抗性品系，其中1個(gè)低抗品系、2個(gè)中抗品系、1個(gè)高抗品系，抗性品系占調(diào)查總數(shù)的33.3%。對(duì)不同場(chǎng)所的抗性情況分析發(fā)現(xiàn)，酒廠、加工廠、飼料廠和農(nóng)戶均有抗性品系和敏感品系，而來(lái)自糧庫(kù)的1個(gè)品系為敏感品系，表明赤擬谷盜對(duì)磷化氫的抗性水平與場(chǎng)所沒(méi)有顯著相關(guān)性。與已有研究相比，本文所測(cè)定的赤擬谷盜磷化氫抗性水平不高。

2.2 赤擬谷盜敵敵畏抗性測(cè)定

12個(gè)赤擬谷盜品系的敵敵畏抗性數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。結(jié)果表明，12個(gè)品系的致死中濃度（LC₅₀）值為0.051-0.108g/L，相對(duì)敏感性水平在2.1倍以內(nèi)，表明這些赤擬谷盜品系對(duì)于敵敵畏的敏感性差異不大。12個(gè)赤擬谷盜品系來(lái)源于湖南省5個(gè)市5種不同的場(chǎng)所，推測(cè)湖南不同地區(qū)的赤擬谷盜品系對(duì)于敵敵畏的抗性水平較低，可以用敵敵畏來(lái)進(jìn)行空倉(cāng)熏蒸，以期達(dá)到理想的熏蒸效果。

3 結(jié)論

磷化氫作為儲(chǔ)糧熏蒸劑，具有成本低、效果好、施藥方便等特點(diǎn)，廣泛運(yùn)用于儲(chǔ)糧害蟲防治。然而由于長(zhǎng)期且單一地使用磷化氫，儲(chǔ)糧害蟲對(duì)磷化氫產(chǎn)生了十分嚴(yán)重的抗藥性[7]，導(dǎo)致磷化氫的殺蟲效果大幅度下降。曹陽(yáng)等[8]對(duì)五種儲(chǔ)糧害蟲11個(gè)品系的磷化氫抗性進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，與敏感品系相比，赤擬谷盜抗性品系的磷化氫抗性已高達(dá)449倍，而谷蠹與米象的抗性分別達(dá)327倍與148倍。嚴(yán)曉平等[9]對(duì)我國(guó)23個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū)）、55個(gè)地區(qū)糧庫(kù)中的主要儲(chǔ)糧害蟲進(jìn)行抗性測(cè)定，結(jié)果表明，低抗性蟲樣占9.8%、中抗性蟲樣占7.6%、高抗性蟲樣占13.0%、極高抗性蟲樣占15.2%。本文主要研究了湖南省5個(gè)市5種不同場(chǎng)所的12個(gè)赤擬谷盜品系對(duì)磷化氫的抗性數(shù)據(jù)，12個(gè)品系的磷化氫抗性系數(shù)范圍為1.7-44.4，抗性品系占調(diào)查總數(shù)的33.3%。對(duì)不同場(chǎng)所的抗性情況分析發(fā)現(xiàn)，赤擬谷盜對(duì)磷化氫的抗性水平與場(chǎng)所沒(méi)有顯著相關(guān)性。赤擬谷盜晶系對(duì)磷化氫的抗性數(shù)據(jù)表明，湖南省這5個(gè)市的赤擬谷盜品系對(duì)磷化氫的抗性不嚴(yán)重，磷化氫仍然可以作為防治赤擬谷盜的熏蒸劑。然而由于樣本數(shù)量較少，這些磷化氫抗性數(shù)據(jù)僅作為參考。與前人報(bào)道的赤擬谷盜抗性水平相比，本文測(cè)定的抗性水平偏低，其原因可能與樣本的采集地、采集場(chǎng)所、樣本經(jīng)歷的磷化氫熏蒸過(guò)程有關(guān)。

敵敵畏是一種有機(jī)磷殺蟲劑，具有觸殺、熏蒸等作用，常被用作防治儲(chǔ)糧害蟲的空倉(cāng)殺蟲劑。侯毅等[6]通過(guò)藥膜法測(cè)定了赤擬谷盜成蟲對(duì)于敵敵畏的抗性，致死中濃度（LC₅₀）為493.99mg/L。劉新等[10]測(cè)定了小麥蛾對(duì)敵敵畏的抗性，致死中濃度（LC₅₀）為618.5μg/mL。王長(zhǎng)青等[1]研究了中華微蛾對(duì)敵敵畏的抗性，致死中濃度（LC₅₀）為98.21mg/L。勞傳忠等[2]研究了敵敵畏對(duì)小眼書虱成蟲的觸殺效果，結(jié)果表明，致死中濃度（LC₅₀）為0.344 2μg/cm²。本文主要測(cè)定了湖南省5個(gè)市的12個(gè)赤擬谷盜品系對(duì)于敵敵畏的抗性水平，12個(gè)品系的致死中濃度（LC₅₀）值為0.051-0.108g/L，相對(duì)敏感性水平在2.1倍以內(nèi)，表明這些赤擬谷盜品系對(duì)于敵敵畏的敏感性差異不大，據(jù)此推測(cè)，赤擬谷盜對(duì)敵敵畏沒(méi)有產(chǎn)生較強(qiáng)的抗藥性，敵敵畏仍然可以作為儲(chǔ)糧空倉(cāng)殺蟲的有效藥劑。

參考文獻(xiàn)

[1]陳艷，張紅建，謝更祥，等.海南地區(qū)赤擬谷盜抗藥性及磷化氫完全致死濃度與時(shí)間的研究[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017（5）：63-66.

[2]張生芳.中國(guó)儲(chǔ)藏物甲蟲[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社，1998.

[3]段錦艷，吳海晶，唐培安，等.8個(gè)品系銹赤扁谷盜和谷蠹的磷化氫抗性測(cè)定[J].糧食儲(chǔ)藏，2016 （1）：1-4.

[4]周天智，劉士強(qiáng)，馬文斌，等.鄂中地區(qū)四種儲(chǔ)糧害蟲對(duì)磷化氫抗性發(fā)展及對(duì)策研究[J].糧食儲(chǔ)藏，2011 （4）：6-9.

[5] ANONYMOUS. Reconmmend methods for the detection andmeasurement of resistance of agricultural pest to pesticidesTeantative method for adulrs of some major pests of stored cerealswith methylbromide and phosphine[J].FAO Plant ProtectionBulletin，1975（10）：120-122.

[6]侯毅，靳然，王志超，等.常用殺蟲劑對(duì)赤擬谷盜成蟲和幼蟲的毒力測(cè)定[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007 （2）：190-192.

[7]禹建輝，謝令德，沈茜，等.湖北不同地區(qū)銹赤扁谷盜磷化氫抗性比較[J].武漢工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013 （2）：22-25.

[8]曹陽(yáng)，劉梅，鄭彥昌.五種儲(chǔ)糧害蟲11個(gè)品系的磷化氫抗性測(cè)定[J].糧食儲(chǔ)藏，2003 （2）：9-11+25.

[9]嚴(yán)曉平，周浩，沈兆鵬，等，中國(guó)儲(chǔ)糧昆蟲歷次調(diào)查總結(jié)與分析[J].糧食儲(chǔ)藏，2008 （6）：3-11.

[10]劉新，尤民生.敵敵畏、高效氯氰菊酯及其混劑對(duì)小菜蛾的毒力與藥效[J].福建農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000 （2）：206-209.

[11]王長(zhǎng)青，吉志新，王長(zhǎng)安.敵敵畏·除蟲菊提取液混配對(duì)中華微蛾的增效作用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010 （5）：2438-2440.

[12]勞傳忠，冼慶，劉芳芳，等.殺蟲劑對(duì)小眼書虱成蟲的觸殺毒力[J].糧食儲(chǔ)藏，2007 （4）：11-12+18.