廖金英 黃秋華 林鑫冰 游奶壽 吳小玲 張成輝

[摘要]本試驗(yàn)采用高效液相色譜法（HPLC法）對(duì)復(fù)方太子參口服液中的太子參環(huán)肽B圖譜進(jìn)行分析，并探討了其他可能作為復(fù)方太子參口服液定性定量的特征性成分。此法采用Welchrom C18（4.6×250mm，5μm）柱，柱溫為室溫、檢測(cè)波長(zhǎng)為203mn、流動(dòng)相為乙腈一水（30：70）、流速1.0mL/min、進(jìn)樣量20μL。結(jié)果表明復(fù)方太子參口服液中的太子參環(huán)肽B峰形、分離度均符合要求，此法可用于復(fù)方太子參口服液中太子參環(huán)肽B鑒別。復(fù)方太子參口服液中檢測(cè)有其他太子參特征峰，也可用于復(fù)方太子參口服液鑒別。本研究將為高效液相色譜法鑒別復(fù)方太子參口服液提供寶貴的理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]復(fù)方太子參口服液;太子參環(huán)肽B;高效液相色譜法

太子參（Pseudostellaria heterophylla）別名童參、米參、孩兒參、雙批七、四葉參，是石竹科孩兒參屬植物[1]。素有“中國(guó)太子參之鄉(xiāng)”美譽(yù)的福建柘榮，其種植的太子參是聞名全國(guó)的道地藥材，享譽(yù)國(guó)內(nèi)外[2]，已經(jīng)成為柘榮縣許多大規(guī)模企業(yè)的主要生產(chǎn)原料[3]。福建省閩東力捷迅藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的復(fù)方太子參口服液以太子參為主成分，此外還有茯苓、靈芝等成分，具有益氣生津、健脾消食的功效。目前主要采用薄層色譜法對(duì)口服液中的太子參進(jìn)行定性鑒別，方法較復(fù)雜，且影響因素較多，會(huì)產(chǎn)生陰性結(jié)果，鑒別結(jié)果較不穩(wěn)定。

目前，太子參藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)還沒(méi)有統(tǒng)一的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[4]。環(huán)肽類(lèi)化合物是太子參中含有的特色成分，目前已經(jīng)從太子參中分離出了16種環(huán)肽類(lèi)化合物[5]。已有研究表明，太子參環(huán)肽B是太子參的主要活性成分，目前關(guān)于太子參環(huán)肽B測(cè)定的報(bào)道中，普遍采用高效液相色譜法[6-9]。高效液相色譜法可以適應(yīng)中藥和中成藥成分的多樣性、復(fù)雜性以及分離難度大的特點(diǎn)，因此，高效液相色譜法在中藥化學(xué)成分分析領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，發(fā)展迅速[10]。為此，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)復(fù)方太子參口服液中的太子參環(huán)肽B進(jìn)行鑒別，并對(duì)其他的特征成分進(jìn)行了初步的分析，以期為復(fù)方太子參口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器

高效液相色譜儀Acme 9000：韓國(guó)英麟機(jī)器有限公司;紫外檢測(cè)器Acme 9000：韓國(guó)英麟機(jī)器有限公司;電子分析天平BSA224S：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司;超純水機(jī)ING-CHE2kuv：默克化工技術(shù)有限公司;津騰針式過(guò)濾器：孔徑0.22μm。

1.1.2 試劑及藥品

甲醇、乙腈均為色譜純：美國(guó)Fisher公司;太子參環(huán)肽B標(biāo)準(zhǔn)品（HPLC≥98%，B21236-20mg）：上海源葉生物科技有限公司;太子參對(duì)照藥材（規(guī)格1g/瓶）：中國(guó)食品藥品建東研究院;復(fù)方太子參口服液（規(guī)格10mL/瓶）：福建省閩東力捷迅藥業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 太子參環(huán)肽B對(duì)照溶液的配制

精密稱(chēng)取太子參環(huán)肽B標(biāo)準(zhǔn)品（98%）3.3mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，充分混勻，制成323.4μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。用移液管準(zhǔn)確移取1mL太子參環(huán)肽B對(duì)照品儲(chǔ)備液，置于10mL容量瓶中用甲醇定容，充分混勻，制成32.34μg/mL太子參環(huán)肽B對(duì)照品溶液。同法，再稀釋2倍和5倍，分別得到16.17μg/mL和6.468μg/mL太子參環(huán)肽B對(duì)照品溶液，配置好的對(duì)照品溶液用0.22μm的針式過(guò)濾器過(guò)濾，備用。

1.2.2 太子參對(duì)照藥材溶液的制備

精密稱(chēng)取太子參對(duì)照藥材1g，加入4mL甲醇，超聲提取45min，用針式過(guò)濾器過(guò)濾，存于樣品瓶中備用。另取部分續(xù)濾液用甲醇稀釋1倍，制成太子參對(duì)照藥材稀釋液，備用。

1.2.3 供試品溶液的配制

隨機(jī)抽取10支復(fù)方太子參口服液，將內(nèi)容物倒出，混合均勻，從中隨機(jī)取樣，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，將續(xù)濾液置樣品瓶中，制成未稀釋的混合供試品溶液。另取5mL未稀釋的混合供試品溶液，置于10mL容量瓶中用甲醇定容后搖勻，制成稀釋2倍的供試品溶液，過(guò)濾，置樣品瓶中備用。同法制成稀釋4倍的供試品溶液。最終得到3個(gè)濃度梯度的10瓶混合的供試品溶液。

1.2.4 色譜條件

色譜柱：WelchromC18（4.6×250mm，5μm）柱;柱溫：室溫;檢測(cè)器：Acme 9000紫外檢測(cè)器;檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm;流動(dòng)相：乙腈-水（30：70）;進(jìn)樣量：20μL。

1.2.5 復(fù)方太子參口服液中太子參特征峰檢測(cè)

取太子參環(huán)肽B對(duì)照溶液、太子參對(duì)照藥材溶液和3個(gè)濃度梯度的供試品溶液，按1.2.4下的色譜條件進(jìn)樣，采集時(shí)間為40min。對(duì)比太子參環(huán)肽B、太子參對(duì)照藥材和供試品三者高效液相色譜圖的共有峰，并記錄其中峰面積隨供試品溶液濃度變化而變化的色譜峰。并計(jì)算太子參環(huán)肽B峰與鄰近色譜峰的分離度R，R越大，說(shuō)明太子參環(huán)肽B峰與鄰近色譜峰的分離越好，均要求滿足R>1.5。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方太子參口服液中太子參環(huán)肽B的鑒別

太子參環(huán)肽B對(duì)照品溶液的液相檢測(cè)圖譜如圖1所示。由圖1中可以看出，隨著太子參環(huán)肽B對(duì)照品溶液濃度的增大，保留時(shí)間為18.9min左右的色譜峰面積也隨之增大，其他色譜峰無(wú)明顯變化，說(shuō)明此峰即為太子參環(huán)肽B的特征峰。

復(fù)方太子參口服液供試溶液和太子參對(duì)照藥材溶液的高效液相色譜圖見(jiàn)圖2。據(jù)圖2可知，供試品和太子參對(duì)照藥材中均含有一個(gè)保留時(shí)間為18.9min左右的色譜峰，可判定供試品溶液及對(duì)照藥材溶液中均含有太子參環(huán)肽B。另結(jié)果顯示供試品中太子參環(huán)肽B與前后鄰近峰的分離度分別為3.4、17.4，太子參對(duì)照藥材溶液中太子參環(huán)肽B與鄰近峰的分離度為18.6，太子參環(huán)肽B對(duì)照品溶液中太子參環(huán)肽B與鄰近峰的分離度分別為33.7，分離度均大于1.5，說(shuō)明太子參環(huán)肽B與各溶液的其他組分離良好，且從圖中可以看出峰形較好。由此可知，太子參環(huán)肽B可作為太子參的特征成分用于復(fù)方太子參口服液的鑒別。

2.2 復(fù)方太子參口服液中特征峰分析

復(fù)方太子參口服液中其他特征峰成分測(cè)定的結(jié)果如圖3所示，供試品溶液與太子參對(duì)照藥材中保留時(shí)間相同且峰面積隨供試品溶液濃度變小而相應(yīng)變小的色譜峰的保留時(shí)間分別為4.37min、7.37min左右，這兩個(gè)特征峰對(duì)應(yīng)的成分可能是供試品溶液中含有且含量較大的太子參特征成分，也可作為復(fù)方太子參口服液定性鑒別。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用太子參環(huán)肽B的最大吸收波長(zhǎng)203nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，此波長(zhǎng)與甲醇的末端吸收接近，甲醇是本試驗(yàn)的溶劑，采用此波長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)較大的溶劑峰，但太子參環(huán)肽B峰與鄰近峰的分離度良好，對(duì)太子參環(huán)肽B的測(cè)定無(wú)影響[11]。

復(fù)方太子參口服液的配方較復(fù)雜，干擾成分較多，本試驗(yàn)采取直接過(guò)濾的方法配制供試品溶液，故復(fù)方太子參口服液中太子參環(huán)肽B的檢測(cè)結(jié)果含量較低，在配制供試品溶液時(shí)，可以用乙酸乙酯萃取，濃縮處理后再進(jìn)行檢測(cè)，但采用此法也會(huì)造成太子參環(huán)肽B的損失[12]。

本試驗(yàn)所需的太子參環(huán)肽B標(biāo)準(zhǔn)品是以太子參為原料，提取分離純化而得到的[13]，價(jià)格昂貴，故采用此法成本較高。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)復(fù)方太子參口服液中除太子參環(huán)肽B以外，還檢測(cè)到其他特征峰存在，但還不確定是何特征物質(zhì)，可以對(duì)其成分做進(jìn)一步研究。此外，福建柘榮產(chǎn)的太子參中太子參環(huán)肽A的含量是太子參環(huán)肽B含量的10-20倍[14-20]，也可對(duì)其進(jìn)一步研究，為復(fù)方太子參口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供更多的參考。

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