吳健周 美英 史旭鋒 武岳

摘要目的：探討雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油治療對(duì)糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面愈合的影響。方法：將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、雌激素組、復(fù)方紫草油組、雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油組等5組；除空白組外，各組大鼠均建立糖尿病模型，成模后在所有大鼠背部造成深Ⅱ度燙傷?？瞻捉M與模型組不采取任何治療，各觀察組以相應(yīng)的藥物治療。于傷后第1、8、15、22天檢測(cè)各組大鼠創(chuàng)面愈合率、血糖及血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGFβ1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，第22天行創(chuàng)面組織病理學(xué)觀察并作病理評(píng)分。結(jié)果：與空白組比較，模型組大鼠創(chuàng)面愈合率顯著降低、血糖明顯升高，TGFβ1、VEGF含量顯著降低，病理評(píng)分顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；與模型組比較，各觀察組大鼠創(chuàng)面愈合率明顯升高、血糖明顯降低，TGFβ1、VEGF含量顯著升高，病理評(píng)分明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。結(jié)論：雌激素和復(fù)方紫草油可以促進(jìn)糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面的愈合，且雌激素與復(fù)方紫草油聯(lián)合用藥對(duì)糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面愈合具有協(xié)同作用。

關(guān)鍵詞糖尿病創(chuàng)傷；雌激素；復(fù)方紫草油；愈合

Healing Effect of Combined Treatment of Estrogen and Compound Radix

Arnebiae Oil on the Scald Wound of Diabetic Rats

Wu Jian， Zhou Meiying， Shi Xufeng， Wu Yue

（Department of Burns， Ganau Provincial Hospital， Lanzhou 730000， China）

AbstractObjective：To explore the effect of the burn wound healing in rats with diabetes by the combined treatment of estrogen and compound Radix Arnebiae Oil. Methods：A total of 40 male SD rats were divided randomly into 5 groups， inclduing blank group， model group， estrogen group， Compound Radix Arnebiae Oil group， combined estrogen and Compound Radix Arnebiae Oil group. Except the blank group， the others were established the diabetes model. After the success of the model building， the whole rats were caused deepⅡdegree burn in the back. Apart from the blank group and the model group， each treatment group was treated by the appropriate treatment methods. The wound healing rate and blood glucose of each rat was observed， and the expression of TGFβ1and VEGF in 1， 8， 15， 22 days realtime were detected. The wound tissue pathology of each rat was observed and made pathological grades. Results：Compared with the blank group， rat wound healing rate of the model group was significantly reduced， and the blood sugar level increased significantly. The level of TGFβ1and VEGF decreased significantly， and the pathological grades rise significantly （P<005）. Compared with the model group， the rat wound healing rate of each treatment group was obviously higher， and the blood sugar level was significantly lower. The TGFβ1and VEGF were significantly higher， and the pathological score significantly reduced （P<005）. Conclusion：The estrogen and the Compound Radix Arnebiae Oil can promote the healing of burn wound on diabetic rats and play a role of collaborative work.

Key WordsScald wound of diabetic rat； Estrogen； Compound Radix Arnebiae Oil； Healing effect

中圖分類(lèi)號(hào)：R242文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.042

糖尿病創(chuàng)面的修復(fù)是一個(gè)比較困難的過(guò)程，其修復(fù)受到多方面因素的影響，因此尋找有效的糖尿病創(chuàng)面修復(fù)方法是目前研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。當(dāng)前大量文獻(xiàn)報(bào)道，TGFβ1、VEGF在創(chuàng)傷的愈合過(guò)程中，起到重要的作用[12]。而當(dāng)前的研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病的治療過(guò)程中雌激素水平的高低與其出現(xiàn)的血脂、血糖異常等密切相關(guān)，絕經(jīng)后2型糖尿病的患者，體內(nèi)的雌激素水平下降可能與糖尿病并發(fā)微血管病密切相關(guān)[3]。而復(fù)方紫草油具有涼血解毒，生肌斂瘡，祛腐活血，生肌長(zhǎng)肉等功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也證實(shí)復(fù)方紫草油具有活血消腫、涼血、止痛生肌及促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用[4]。我們?cè)诖罅课墨I(xiàn)的基礎(chǔ)上提出雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油對(duì)糖尿病創(chuàng)傷的愈合具有較好療效的猜想，因此我們選擇了雌激素、復(fù)方紫草油及其聯(lián)合用藥對(duì)糖尿病燙傷的大鼠進(jìn)行干預(yù)，用以探討其雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油對(duì)糖尿病創(chuàng)傷愈合的影響。

1材料與方法

11材料

111動(dòng)物SPF級(jí)雄性SD大鼠（200±20）g，購(gòu)于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（甘）20160001，質(zhì)量檢測(cè)單位：蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測(cè)中心。

112藥物雌激素（苯甲酸雌二醇），武漢欣欣佳麗生物科技有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20050120；復(fù)方紫草油，健民集團(tuán)葉開(kāi)泰國(guó)藥（隨州）有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20044385。

113試劑與儀器大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGFβ1）ELISA檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品貨號(hào)：ml002856；大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）ELISA檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品貨號(hào)：ml002862。血糖儀（江蘇魚(yú)躍醫(yī)療設(shè)備有限公司），酶標(biāo)儀（Biotek），倒置顯微鏡（奧林巴斯IX71），移液器（Eppendorf），高速臺(tái)式離心機(jī)（Thermo）。

12方法

121分組與模型制備將40只雄性SD大鼠，體重為（200±20）g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組，即空白組、模型組、雌激素組、復(fù)方紫草油組、雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油組（聯(lián)合組）。除空白組外，其余各組大鼠均建立糖尿病模型，糖尿病模型的建立采用腹腔注射2%的枸櫞酸枸櫞酸鈉鎂溶液配制成的鏈脲佐菌素（STZ）溶液，劑量為65 mg/kg；注射一周后采血檢測(cè)隨機(jī)血糖的水平，并且觀察體重的變化。糖尿病模型成功的標(biāo)準(zhǔn)為：STZ注射后的基礎(chǔ)血糖<89 mol/L，誘導(dǎo)后的血糖>112 mol/L，大鼠的體重明顯地下降。造模成功后，對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行燙傷造模（包括空白組），剃去所有大鼠背部的毛發(fā)，用硫化鋇脫毛劑脫毛，24 h后在燙傷處理前，用3%的戊巴比妥鈉（15 mL/kg），給予大鼠腹腔注射麻醉，用控溫控電燙傷儀在75 ℃的溫度下作用11 s，造成直徑大約為25 cm的深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面（病理切片顯示有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原纖維腫脹玻璃樣變性、融合壞死，部分毛囊和皮脂腺崩解，符合深Ⅱ度燙傷的病理變化）。

122給藥方法空白組與模型組創(chuàng)傷面不作處理，肌注09%的氯化鈉注射液；雌激素組創(chuàng)傷面不作處理，肌注15 mg/kg的雌激素；復(fù)方紫草油組創(chuàng)傷面外涂適量復(fù)方紫草油，肌注09%的氯化鈉注射液；雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油組，創(chuàng)傷面外涂適量復(fù)方紫草油，肌注15 mg/kg的雌激素；連續(xù)干預(yù)21 d后，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。

123指標(biāo)檢測(cè)與方法1）各組大鼠創(chuàng)面的愈合率分別于傷后的第1、8、15、22天采用透明膠片描記加稱(chēng)重法測(cè)量每組大鼠局部創(chuàng)面之面積，計(jì)算的公式為：創(chuàng)面愈合率=（原始創(chuàng)面的面積未愈合創(chuàng)面的面積）/原始的創(chuàng)面面積×100%。2）各組大鼠各時(shí)間段血糖的變化分別于傷后的第1、8、15、22天早上8點(diǎn)檢測(cè)各組大鼠的血糖。3）各組大鼠各時(shí)間段血清中TGFβ1、VEGF的表達(dá)情況分別于傷后的第1、8、15、22天采用尾部采血法檢測(cè)各組大鼠血清中TGFβ1、VEGF的表達(dá)情況。4）各組大鼠創(chuàng)傷面病理形態(tài)及評(píng)分的變化情況，于傷后第22天，麻醉處死大鼠，取創(chuàng)傷面組織，經(jīng)固定后做HE染色。每張片子選取3個(gè)視野進(jìn)行病理評(píng)分，病理評(píng)分原則：0分：創(chuàng)面可見(jiàn)到部分復(fù)層上皮，表皮細(xì)胞形成較多，且分化良好，新生的膠原排列整齊，炎性細(xì)胞極少或無(wú)；1分：真皮全層仍可見(jiàn)少量的炎細(xì)胞，肉芽組織明顯，可見(jiàn)部分表皮細(xì)胞；2分：真皮全層仍可見(jiàn)較多的炎細(xì)胞，肉芽組織形成較少，可見(jiàn)少量的表皮細(xì)胞形成；3分：真皮全層仍可見(jiàn)大量的炎細(xì)胞，肉芽組織形成很少，未見(jiàn)表皮細(xì)胞形成。

13統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用SPSS 190統(tǒng)計(jì)軟件分析，組間顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析。以P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

21不同時(shí)間段各組大鼠創(chuàng)面的愈合率與空白組比較，模型組大鼠創(chuàng)傷面愈合率顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；與模型組比較，雌激素組、復(fù)方紫草油組、雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油組創(chuàng)傷面愈合率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），且聯(lián)合組愈合率均較雌激素組、復(fù)方紫草油組高。見(jiàn)表1。

22不同時(shí)間段各組大鼠血糖值的比較與空白組比較，模型組大鼠各個(gè)時(shí)間段血糖均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；與模型組比較，雌激素組、雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油組大鼠血糖明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；而復(fù)方紫草油組大鼠血糖較模型組有所降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見(jiàn)表2。

23不同時(shí)間段各組大鼠血清中TGFβ1的比較與空白組比較，模型組大鼠血清中TGFβ1的表達(dá)量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；與模型組比較，雌激素組、雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油組大鼠血清中TGFβ1的表達(dá)量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；而復(fù)方紫草油組大鼠血清中TGFβ1的表達(dá)量較模型組有一定的升高，但僅在22 d時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見(jiàn)表3。

24不同時(shí)間段各組大鼠血清中VEGF的比較與空白組比較，模型組大鼠血清中VEGF的表達(dá)量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；與模型組比較，雌激素組、雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油組大鼠血清中VEGF的表達(dá)量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；而復(fù)方紫草油組大鼠血清中VEGF的表達(dá)量較模型組有一定的升高，但僅在15 d、22 d時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見(jiàn)表4。

25各組大鼠創(chuàng)面病理形態(tài)的比較空白組病理形態(tài)可見(jiàn)一定炎細(xì)胞，及大量的肉芽組織，分化較好；模型組可見(jiàn)大量的炎細(xì)胞，肉芽組織較少，未見(jiàn)明顯的新生上皮細(xì)胞；雌激素組可見(jiàn)較多的炎細(xì)胞，及部分的新生肉芽組織；復(fù)方紫草油組可見(jiàn)較少的炎細(xì)胞，及較多的肉芽組織形成，可見(jiàn)較少的新生上皮細(xì)胞；聯(lián)合組可見(jiàn)較少的炎細(xì)胞，以及大量的新生上皮細(xì)胞；見(jiàn)圖1，病理評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表5。

3討論

糖尿病為臨床上常見(jiàn)的疾病，由于糖尿病患者的微血管病變，導(dǎo)致糖尿病患者對(duì)外界溫度的刺激表現(xiàn)不敏感，出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍，因而易被燙傷，其病情遷延，不易恢復(fù)。當(dāng)前研究發(fā)現(xiàn)女性在絕經(jīng)后，雌激素水平是下降的，其可影響患者的血糖、血脂水平[5]。雌激素水平的下降與2型糖尿病、高血壓、血脂異常、胰島素抵抗密切相關(guān)[6]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，雌激素對(duì)糖尿病患者具有一定的輔助治療作用。黃繼良等[7]研究示每日口服倍美力0625 mg，其可降低絕境后2型糖尿病患者之血糖，及其改善胰島素水平，顯著提高胰島素的敏感性；鐘國(guó)連[8]研究示尼爾雌醇雌激素可以顯著改善絕經(jīng)后2型糖尿病患者的胰島素抵抗及其血脂的異常。最新研究發(fā)現(xiàn)采用雌激素替勃龍治療圍絕經(jīng)期2型糖尿病患者，可顯著降低患者的血糖水平，獲得良好的臨床效果[9]。由此可見(jiàn)雌激素具有治療糖尿病的作用。而復(fù)方紫草油是臨床常備的外用中成藥，具有涼血解毒，生肌斂瘡，祛腐活血，生肌長(zhǎng)肉等功效，除輕中度燒燙傷外，臨床上還用于癤瘡久潰，創(chuàng)面不收、肌肉不生之癥；藥理研究發(fā)現(xiàn)其具有鎮(zhèn)痛、抗炎、活血化瘀、促進(jìn)創(chuàng)面愈合等作用[4，10]。其外用對(duì)皮膚的刺激性小，換藥時(shí)與傷口不粘連[11]，在治療肛瘺手術(shù)后創(chuàng)面的愈合[12]、糖尿病足、潰瘍等方面[13]，具有獨(dú)特的療效。相較于一些敷料而言，其治療燒燙傷等疾病價(jià)廉效佳，顯著降低醫(yī)保費(fèi)用支出和減輕患者負(fù)擔(dān)，值得臨床廣泛推廣應(yīng)用。

我們研究發(fā)現(xiàn)，與空白組比較，模型組大鼠各個(gè)時(shí)間段血糖均顯著升高（P<005），成功建立了糖尿病模型，再進(jìn)一步對(duì)大鼠進(jìn)行了模擬燙傷處理。在應(yīng)用雌激素、復(fù)方紫草油進(jìn)行治療8 d后，創(chuàng)面的愈合率高于模型組，TGFβ1與VEGF的表達(dá)升高（P<005），聯(lián)合組更明顯（P<005）；雌激素治療后大鼠創(chuàng)面有較多的炎性因子和部分肉芽組織，復(fù)方紫草油組可見(jiàn)較多的肉芽組織和少量的炎性因子，聯(lián)合觀察組可見(jiàn)大量的新生上皮細(xì)胞；病理評(píng)分與模型組比較，治療后降低，聯(lián)合組表現(xiàn)更明顯（P<005），可以看出，聯(lián)合組的療效要比單純的治療療效好，雌激素聯(lián)合復(fù)方紫草油治療糖尿病燙傷，發(fā)揮了協(xié)同促進(jìn)創(chuàng)面愈合的治療作用。在治療后，TGFβ1和VEGF的表達(dá)升高，我們猜測(cè)，糖尿病燙傷遷延難愈的主要原因與TGFβ1與VEGF的低表達(dá)密切相關(guān)，這可能是其病情遷延、不易恢復(fù)的發(fā)病機(jī)制之一[14]。

參考文獻(xiàn)

[1]王文婷，單菲，王曉川，等.TGFβ1對(duì)糖尿病大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的影響[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2011，49（7）：1923.

[2]楊永熙，馮佳雄，黃曉濤，等.糖尿病患者與非糖尿病患者下肢燒傷的治療結(jié)局差異性及機(jī)制研究[J].中華損傷與修復(fù)雜志（連續(xù)型電子期刊），2016，11（6）：428432.

[3]馬小慧，寧濤，吳鐵花，等.2型糖尿病患者性激素水平測(cè)定的臨床意義[J].實(shí)用糖尿病雜志，2015，11（2）：5556.

[4]封玉東，封麗，王婉，等.復(fù)方紫草油促進(jìn)燙傷面愈合和抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)中醫(yī)藥科技，2008，15（5）：378.

[5]陳芳.女性絕經(jīng)后雌激素水平與血脂、血糖和血同型半胱氨酸的關(guān)系研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2016，20（5）：758760.

[6]李廣紅，侯麗君，王輝，等.絕經(jīng)后女性2型糖尿病患者血清雌激素的臨床意義[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，36（2）：147149.

[7]黃繼良，施錦仁，趙瑞芝.雌激素對(duì)絕經(jīng)后婦女2型糖尿病患者胰島素敏感性的影響[J].河北醫(yī)藥，2001，23（3）：181182.

[8]鐘國(guó)連，呂維名，肖麗霞，等.雌激素補(bǔ)充治療對(duì)絕經(jīng)后2型糖尿病患者胰島素抵抗及脂代謝的影響[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，30（6）：869870.

[9]高偉聰，李麗，劉改欣.雌激素替代治療對(duì)2型糖尿病圍絕經(jīng)期婦女血糖的影響[J].臨床與病理雜志，2017，37（5）：10191024.

[10]周玉新，張永恒，王偉勇，等.復(fù)方紫草油在燒傷植皮術(shù)后的應(yīng)用[J].中華燒傷雜志，2002，18（2）：37.

[11]覃英姿.紫草油治療老年人重度褥瘡[J].藥物與臨床雜志，2005，4（2）：84.

[12]楊保華.復(fù)方紫草油紗用于肛瘺術(shù)后促進(jìn)創(chuàng)面愈合臨床研究[D].濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)，2008：141.

[13]姚明，葛曉東.紫草油紗治療糖尿病足潰瘍的臨床研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，37（7）：875876.

[14]王文婷.TGFβ1對(duì)糖尿病大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的影響[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2011，49（7）：1923