基于GICT技術(shù)快速篩查水產(chǎn)品中氟苯尼考?xì)埩?/h1>
2018-09-19 07:24陳貴生桑麗雅榮朝振沈亞東賴年悅
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年26期
陳貴生，桑麗雅，桂 淦，榮朝振，方 凱，沈亞東，賴年悅*
(1.巢湖市柘皋鎮(zhèn)農(nóng)村服務(wù)中心，安徽巢湖 238062；2.杭州南開日新生物技術(shù)有限公司，浙江杭州 310051；3.合肥市畜牧水產(chǎn)技術(shù)推廣中心，安徽合肥 230001)
氟苯尼考又稱氟代甲砜霉素，是與氯霉素活性相似的廣譜抗生素，對絕大多數(shù)革蘭氏陰性和陽性水產(chǎn)病原菌呈高度抗菌活性，具有高效、吸收快等特點(diǎn)，自面市以來得到廣泛應(yīng)用。尤其是在氯霉素、硝基呋喃類抗生素被禁用后，氟苯尼考在水產(chǎn)品養(yǎng)殖中得到更加廣泛的使用。相對于氯霉素和甲砜霉素而言，氟苯尼考的毒性低、環(huán)境污染小、不易引起動(dòng)物再生障礙性貧血，也不會致畸、致癌和致突變，但具有一定的免疫毒性和胚胎毒性。此外，氟苯尼考的使用也會使得水體中抗生素累積，破壞生態(tài)環(huán)境，對水產(chǎn)品質(zhì)量安全造成影響。
20世紀(jì)90年代，在現(xiàn)代單克隆抗體技術(shù)和新材料技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型檢測技術(shù)——膠體金免疫層析技術(shù)(colloidal gold immunochromato graphic strip assay,GICT)，其原理是以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔膜的毛細(xì)管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色反應(yīng)，檢測抗原/抗體，此技術(shù)具有特異性強(qiáng)、操作簡便快捷、檢測成本低、無需特殊儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于廣大基層檢驗(yàn)人員的現(xiàn)場檢測需要，已在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、毒品監(jiān)控、食品安全等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[1-2]。目前，國內(nèi)外的一些生物科技公司研發(fā)出水產(chǎn)品藥物殘留檢測的膠體金快速檢測試劑條或試劑盒，為膠體金免疫層析技術(shù)應(yīng)用于水產(chǎn)品藥物殘留提供條件[3]。
為強(qiáng)化水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管，加大監(jiān)測的范圍和頻率，自2013年5月起，合肥市在全省率先啟動(dòng)水產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測工作，利用膠體金免疫層析技術(shù)對水產(chǎn)品中藥物殘留實(shí)施監(jiān)控，有力推動(dòng)安徽省水產(chǎn)品市場準(zhǔn)入制度和基地準(zhǔn)出制度的實(shí)施[4]。筆者利用膠體金快速檢測試劑條，對采集的水產(chǎn)品組織中氟苯尼考?xì)埩暨M(jìn)行快速檢測，以期為水產(chǎn)品中的違禁藥物殘留監(jiān)控提供技術(shù)支持。
1 材料與方法
1.1材料
1.1.1試材。檢測樣品來源于水產(chǎn)品市場或養(yǎng)殖基地，將抽取的樣品帶回實(shí)驗(yàn)室，取每份樣品的可食部分約100 g，用組織搗碎機(jī)充分絞碎混勻，裝入樣品袋，標(biāo)明標(biāo)識，冷凍保存，備用。
1.1.2試劑。所用試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682規(guī)定的二級水。氟苯尼考抗原和抗體均來自杭州南開日新生物技術(shù)有限公司實(shí)驗(yàn)室。濃鹽酸(HCl)純度>37%、磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)、乙酸乙酯(C4H8O2)、正己烷(C6H14)、甲醇(CH4O)、吐溫-20(C58H114O26)。
1.1.3設(shè)備。電子天平，感量0.01 g；均質(zhì)機(jī)，轉(zhuǎn)速≥8 000 r/min；離心機(jī)，轉(zhuǎn)速≥4 000 r/min；氮?dú)獯蹈蓛x或空氣吹干儀，加熱溫度≥60 ℃；移液槍，1～10、10～100、100～1 000 μL；氟苯尼考膠體金免疫層析快速檢測試劑板組成(圖1)。
圖1 氟苯尼考膠體金快速檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 Schematic diagram of the structure of florfenicol colloidal gold rapid detection kit
1.2方法
1.2.1溶液制備。
1.2.1.11 mol/L鹽酸溶液。量取8.6 mL濃鹽酸，加蒸餾水定容至100 mL，室溫保存。
1.2.1.20.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(含0.5 %吐溫-20，pH 7.4)。溶解8.0 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na2HPO4、0.24 g KH2PO4、0.5 mL吐溫-20定容于800 mL水中，溶解并用水定容至1 L，用鹽酸溶液調(diào)整pH至7.4，經(jīng)121 ℃滅菌15 min，4 ℃下避光保存。
1.2.1.3氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100 mg/L)。分別準(zhǔn)確稱取10 mg氟苯尼考，用100 mL甲醇溶解，-18 ℃冰箱中保存，有效期180 d。
1.2.1.4氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)中間液(1 mg/L)。準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1 mL于1 000 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，4 ℃冷藏避光保存，有效期30 d。
1.2.2試樣制備。魚去鱗、去皮，取肌肉部分；蝦去頭、殼、腸腺，取肌肉部分。樣品的肌肉組織約50 g，剪碎，用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，備用。
1.2.3氟苯尼考快速篩查樣品前處理。稱取2 g(精確到0.1 g)備用樣品于5 mL離心管中，加入3 mL乙酸乙酯，劇烈振蕩3 min后，室溫下4 000 r/min離心5 min；用移液管移取2 mL 上清液于新的5 mL離心管中，至60 ℃下氮(空)氣吹干；然后向吹干的試管中依次加入0.3 mL正己烷和0.3 mL磷酸鹽溶液，充分混勻，并用滴管吸取試管內(nèi)溶液沖洗管內(nèi)壁上殘留物，靜置2 min，待檢。
1.2.4氟苯尼考?xì)埩魷y定。取出氟苯尼考膠體金免疫層析快速檢測試劑板，置于平整的臺面上。吸取“1.2.3”中待測液100 μL于加樣孔中，在3～5 min讀取結(jié)果。以磷酸鹽緩沖液代替試樣提取液作為空白對照進(jìn)行試驗(yàn)。
1.2.5質(zhì)控試驗(yàn)。每一批次試驗(yàn)時(shí)，選取已知未含氟苯尼考的均質(zhì)水產(chǎn)品組織作為質(zhì)控樣，稱取2份平行樣，其中一份作為陰性質(zhì)控樣，另一份添加標(biāo)準(zhǔn)溶液使其終濃度為50 μg/kg，作為陽性質(zhì)控樣。按“1.2.3”“1.2.4”方法與步驟進(jìn)行試驗(yàn)。
1.3結(jié)果判定
1.3.1判定方法。吸取待檢液垂直滴加3滴(約100 μL)于加樣孔中，加樣后開始計(jì)時(shí)按照規(guī)定時(shí)間內(nèi)讀取結(jié)果(圖2)。陰性(-)：待測試驗(yàn)檢測線(T線)出現(xiàn)紅色條帶，且顏色比控制線(C線)深或一樣深(圖3)為陰性，表明樣品中不含氟苯尼考或氟苯尼考?xì)埩袅?50 μg/kg。陽性(+)：待測試樣檢測線(T線)出現(xiàn)紅色條帶，但顏色比控制線(C線)淺或檢測線(T線)未出現(xiàn)紅色條帶(圖3)為陽性，表明樣品中氟苯尼考?xì)埩袅俊?50 μg/kg。無效: 未出現(xiàn)C線(圖3)。
圖2 測試方法示意圖Fig.2 Schematic diagram of the test method
圖3 結(jié)果判定示意圖Fig.3 Schematic diagram of the result determination
1.3.2質(zhì)控試驗(yàn)要求。陰性質(zhì)控樣結(jié)果應(yīng)為陰性或陰性質(zhì)控樣定量檢測濃度< 50 μg/kg；陽性質(zhì)控樣結(jié)果應(yīng)為陽性或陽性質(zhì)控樣定量檢測濃度≥50 μg/kg，否則試驗(yàn)無效。
1.3.3結(jié)果確認(rèn)。該標(biāo)準(zhǔn)采用參比方法為GB/T 20756—2006《可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》。如被檢測樣中氟苯尼考檢測結(jié)果為陽性時(shí)，可根據(jù)需要采用參比方法進(jìn)行確證檢測。
2 結(jié)果與分析
2018年4—7月，合肥市畜牧水產(chǎn)技術(shù)推廣中心、合肥市漁政監(jiān)督管理站監(jiān)督抽查了該市養(yǎng)殖基地、水產(chǎn)品市場的鰱、鳙、鯽魚、鳊魚、草魚、河蟹、對蝦、多寶魚、鱸魚、甲魚等10個(gè)品種100多個(gè)樣品，應(yīng)用膠體金快速篩查樣品中氟苯尼考藥殘指標(biāo)。結(jié)果顯示，檢測限能達(dá)到≤50 μg/kg，符合國家規(guī)定的藥殘標(biāo)準(zhǔn)，一定程度上能夠滿足現(xiàn)場檢測的需要，檢測方便，用時(shí)短，比儀器方法檢測節(jié)省了大量的時(shí)間。同時(shí)應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對膠體金快速篩查的100份樣本(包括92份陰性樣本和8份陽性樣本)進(jìn)行比對[5-6]，結(jié)果表明膠體金快速檢測與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的結(jié)果符合率為 95.4%。
膠體金免疫層析技術(shù)是基于抗原抗體特異性反應(yīng)進(jìn)行的檢測，所以在檢測實(shí)際樣本時(shí)，由于待檢樣品種類繁多、成分復(fù)雜，容易影響抗原抗體反應(yīng)以及膠體金顆粒與蛋白的吸附，有的抗體特異不強(qiáng)且與目標(biāo)物的結(jié)構(gòu)類似物有交叉反應(yīng)，加之免疫膠體金法是一種定性篩檢方法，所采用的檢測板是根據(jù)線與線的深淺對比進(jìn)行判別，因樣品基質(zhì)的不同，檢出限在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，造成假陽性結(jié)果[7]。因此，對快速法檢出的陽性樣品應(yīng)送實(shí)驗(yàn)室用大型儀器檢測方法進(jìn)行確證，以確保水產(chǎn)品質(zhì)量安全。
3 結(jié)論與討論
國際上現(xiàn)在通用的水產(chǎn)品藥物殘留檢測方法是篩選加確證的方法，即首先采用一種簡便的方法對待檢測樣品進(jìn)行快速篩選，然后采用準(zhǔn)確性較高的方法對篩選結(jié)果為疑似陽性的樣品再進(jìn)行確證分析[8]。膠體金免疫層析技術(shù)是利用試劑盒及試劑按照操作規(guī)程對水產(chǎn)品中的不同藥物殘留進(jìn)行快速檢測，對其陽性樣品進(jìn)行快速篩選，與精密儀器檢測技術(shù)相比，具有易攜帶、操作簡單、檢測成本低、快速準(zhǔn)確、易保存和不受檢測條件限制等優(yōu)點(diǎn)。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，膠體金免疫層析技術(shù)不僅發(fā)展?jié)摿薮?，而且市場和?yīng)用前景廣闊，特別適用于廣大基層檢驗(yàn)人員的現(xiàn)場檢測需要，因此在未來的水產(chǎn)品藥物殘留檢測中，膠體金免疫層析技術(shù)將會成為重要的技術(shù)手段。
高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(HPLC/MS/MS)、氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(GC/MS/MS)、微生物法、酶聯(lián)免疫法(ELISA)和Charm Ⅱ 等是目前檢測水產(chǎn)品中藥物殘留的主要方法[9-10]，他們大多具有靈敏度高、重復(fù)性好等特點(diǎn)，特別是色譜法更具有確證能力，但這些方法存在檢測時(shí)間長、成本高和不易現(xiàn)場檢測等問題，難以滿足現(xiàn)場快速檢測要求，很難在普通養(yǎng)魚場、水產(chǎn)品市場，甚至中小型企業(yè)中普及應(yīng)用，無法實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測，給水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管工作帶來許多不便。
要進(jìn)一步研究膠體金免疫層析技術(shù)在水產(chǎn)品檢測中的應(yīng)用，提高檢測靈敏度，實(shí)現(xiàn)多元檢測、定量或半定量檢測。在滿足檢測快速而簡便的條件下，應(yīng)盡可能提高檢測的特異性和敏感度，減少假陰性和假陽性。另外，目前市面上的各種快速檢測產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，給監(jiān)管人員帶來不少麻煩，建議使用水產(chǎn)品專用，且經(jīng)農(nóng)業(yè)部或權(quán)威檢測機(jī)構(gòu)驗(yàn)證的快檢產(chǎn)品。
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20世紀(jì)90年代，在現(xiàn)代單克隆抗體技術(shù)和新材料技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型檢測技術(shù)——膠體金免疫層析技術(shù)(colloidal gold immunochromato graphic strip assay,GICT)，其原理是以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔膜的毛細(xì)管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色反應(yīng)，檢測抗原/抗體，此技術(shù)具有特異性強(qiáng)、操作簡便快捷、檢測成本低、無需特殊儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于廣大基層檢驗(yàn)人員的現(xiàn)場檢測需要，已在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、毒品監(jiān)控、食品安全等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[1-2]。目前，國內(nèi)外的一些生物科技公司研發(fā)出水產(chǎn)品藥物殘留檢測的膠體金快速檢測試劑條或試劑盒，為膠體金免疫層析技術(shù)應(yīng)用于水產(chǎn)品藥物殘留提供條件[3]。
為強(qiáng)化水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管，加大監(jiān)測的范圍和頻率，自2013年5月起，合肥市在全省率先啟動(dòng)水產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測工作，利用膠體金免疫層析技術(shù)對水產(chǎn)品中藥物殘留實(shí)施監(jiān)控，有力推動(dòng)安徽省水產(chǎn)品市場準(zhǔn)入制度和基地準(zhǔn)出制度的實(shí)施[4]。筆者利用膠體金快速檢測試劑條，對采集的水產(chǎn)品組織中氟苯尼考?xì)埩暨M(jìn)行快速檢測，以期為水產(chǎn)品中的違禁藥物殘留監(jiān)控提供技術(shù)支持。
1 材料與方法
1.1材料
1.1.1試材。檢測樣品來源于水產(chǎn)品市場或養(yǎng)殖基地，將抽取的樣品帶回實(shí)驗(yàn)室，取每份樣品的可食部分約100 g，用組織搗碎機(jī)充分絞碎混勻，裝入樣品袋，標(biāo)明標(biāo)識，冷凍保存，備用。
1.1.2試劑。所用試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682規(guī)定的二級水。氟苯尼考抗原和抗體均來自杭州南開日新生物技術(shù)有限公司實(shí)驗(yàn)室。濃鹽酸(HCl)純度>37%、磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)、乙酸乙酯(C4H8O2)、正己烷(C6H14)、甲醇(CH4O)、吐溫-20(C58H114O26)。
1.1.3設(shè)備。電子天平，感量0.01 g；均質(zhì)機(jī)，轉(zhuǎn)速≥8 000 r/min；離心機(jī)，轉(zhuǎn)速≥4 000 r/min；氮?dú)獯蹈蓛x或空氣吹干儀，加熱溫度≥60 ℃；移液槍，1～10、10～100、100～1 000 μL；氟苯尼考膠體金免疫層析快速檢測試劑板組成(圖1)。
圖1 氟苯尼考膠體金快速檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 Schematic diagram of the structure of florfenicol colloidal gold rapid detection kit
1.2方法
1.2.1溶液制備。
1.2.1.11 mol/L鹽酸溶液。量取8.6 mL濃鹽酸，加蒸餾水定容至100 mL，室溫保存。
1.2.1.20.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(含0.5 %吐溫-20，pH 7.4)。溶解8.0 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na2HPO4、0.24 g KH2PO4、0.5 mL吐溫-20定容于800 mL水中，溶解并用水定容至1 L，用鹽酸溶液調(diào)整pH至7.4，經(jīng)121 ℃滅菌15 min，4 ℃下避光保存。
1.2.1.3氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100 mg/L)。分別準(zhǔn)確稱取10 mg氟苯尼考，用100 mL甲醇溶解，-18 ℃冰箱中保存，有效期180 d。
1.2.1.4氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)中間液(1 mg/L)。準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1 mL于1 000 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，4 ℃冷藏避光保存，有效期30 d。
1.2.2試樣制備。魚去鱗、去皮，取肌肉部分；蝦去頭、殼、腸腺，取肌肉部分。樣品的肌肉組織約50 g，剪碎，用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，備用。
1.2.3氟苯尼考快速篩查樣品前處理。稱取2 g(精確到0.1 g)備用樣品于5 mL離心管中，加入3 mL乙酸乙酯，劇烈振蕩3 min后，室溫下4 000 r/min離心5 min；用移液管移取2 mL 上清液于新的5 mL離心管中，至60 ℃下氮(空)氣吹干；然后向吹干的試管中依次加入0.3 mL正己烷和0.3 mL磷酸鹽溶液，充分混勻，并用滴管吸取試管內(nèi)溶液沖洗管內(nèi)壁上殘留物，靜置2 min，待檢。
1.2.4氟苯尼考?xì)埩魷y定。取出氟苯尼考膠體金免疫層析快速檢測試劑板，置于平整的臺面上。吸取“1.2.3”中待測液100 μL于加樣孔中，在3～5 min讀取結(jié)果。以磷酸鹽緩沖液代替試樣提取液作為空白對照進(jìn)行試驗(yàn)。
1.2.5質(zhì)控試驗(yàn)。每一批次試驗(yàn)時(shí)，選取已知未含氟苯尼考的均質(zhì)水產(chǎn)品組織作為質(zhì)控樣，稱取2份平行樣，其中一份作為陰性質(zhì)控樣，另一份添加標(biāo)準(zhǔn)溶液使其終濃度為50 μg/kg，作為陽性質(zhì)控樣。按“1.2.3”“1.2.4”方法與步驟進(jìn)行試驗(yàn)。
1.3結(jié)果判定
1.3.1判定方法。吸取待檢液垂直滴加3滴(約100 μL)于加樣孔中，加樣后開始計(jì)時(shí)按照規(guī)定時(shí)間內(nèi)讀取結(jié)果(圖2)。陰性(-)：待測試驗(yàn)檢測線(T線)出現(xiàn)紅色條帶，且顏色比控制線(C線)深或一樣深(圖3)為陰性，表明樣品中不含氟苯尼考或氟苯尼考?xì)埩袅?50 μg/kg。陽性(+)：待測試樣檢測線(T線)出現(xiàn)紅色條帶，但顏色比控制線(C線)淺或檢測線(T線)未出現(xiàn)紅色條帶(圖3)為陽性，表明樣品中氟苯尼考?xì)埩袅俊?50 μg/kg。無效: 未出現(xiàn)C線(圖3)。
圖2 測試方法示意圖Fig.2 Schematic diagram of the test method
圖3 結(jié)果判定示意圖Fig.3 Schematic diagram of the result determination
1.3.2質(zhì)控試驗(yàn)要求。陰性質(zhì)控樣結(jié)果應(yīng)為陰性或陰性質(zhì)控樣定量檢測濃度< 50 μg/kg；陽性質(zhì)控樣結(jié)果應(yīng)為陽性或陽性質(zhì)控樣定量檢測濃度≥50 μg/kg，否則試驗(yàn)無效。
1.3.3結(jié)果確認(rèn)。該標(biāo)準(zhǔn)采用參比方法為GB/T 20756—2006《可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》。如被檢測樣中氟苯尼考檢測結(jié)果為陽性時(shí)，可根據(jù)需要采用參比方法進(jìn)行確證檢測。
2 結(jié)果與分析
2018年4—7月，合肥市畜牧水產(chǎn)技術(shù)推廣中心、合肥市漁政監(jiān)督管理站監(jiān)督抽查了該市養(yǎng)殖基地、水產(chǎn)品市場的鰱、鳙、鯽魚、鳊魚、草魚、河蟹、對蝦、多寶魚、鱸魚、甲魚等10個(gè)品種100多個(gè)樣品，應(yīng)用膠體金快速篩查樣品中氟苯尼考藥殘指標(biāo)。結(jié)果顯示，檢測限能達(dá)到≤50 μg/kg，符合國家規(guī)定的藥殘標(biāo)準(zhǔn)，一定程度上能夠滿足現(xiàn)場檢測的需要，檢測方便，用時(shí)短，比儀器方法檢測節(jié)省了大量的時(shí)間。同時(shí)應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對膠體金快速篩查的100份樣本(包括92份陰性樣本和8份陽性樣本)進(jìn)行比對[5-6]，結(jié)果表明膠體金快速檢測與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的結(jié)果符合率為 95.4%。
膠體金免疫層析技術(shù)是基于抗原抗體特異性反應(yīng)進(jìn)行的檢測，所以在檢測實(shí)際樣本時(shí)，由于待檢樣品種類繁多、成分復(fù)雜，容易影響抗原抗體反應(yīng)以及膠體金顆粒與蛋白的吸附，有的抗體特異不強(qiáng)且與目標(biāo)物的結(jié)構(gòu)類似物有交叉反應(yīng)，加之免疫膠體金法是一種定性篩檢方法，所采用的檢測板是根據(jù)線與線的深淺對比進(jìn)行判別，因樣品基質(zhì)的不同，檢出限在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，造成假陽性結(jié)果[7]。因此，對快速法檢出的陽性樣品應(yīng)送實(shí)驗(yàn)室用大型儀器檢測方法進(jìn)行確證，以確保水產(chǎn)品質(zhì)量安全。
3 結(jié)論與討論
國際上現(xiàn)在通用的水產(chǎn)品藥物殘留檢測方法是篩選加確證的方法，即首先采用一種簡便的方法對待檢測樣品進(jìn)行快速篩選，然后采用準(zhǔn)確性較高的方法對篩選結(jié)果為疑似陽性的樣品再進(jìn)行確證分析[8]。膠體金免疫層析技術(shù)是利用試劑盒及試劑按照操作規(guī)程對水產(chǎn)品中的不同藥物殘留進(jìn)行快速檢測，對其陽性樣品進(jìn)行快速篩選，與精密儀器檢測技術(shù)相比，具有易攜帶、操作簡單、檢測成本低、快速準(zhǔn)確、易保存和不受檢測條件限制等優(yōu)點(diǎn)。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，膠體金免疫層析技術(shù)不僅發(fā)展?jié)摿薮?，而且市場和?yīng)用前景廣闊，特別適用于廣大基層檢驗(yàn)人員的現(xiàn)場檢測需要，因此在未來的水產(chǎn)品藥物殘留檢測中，膠體金免疫層析技術(shù)將會成為重要的技術(shù)手段。
高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(HPLC/MS/MS)、氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(GC/MS/MS)、微生物法、酶聯(lián)免疫法(ELISA)和Charm Ⅱ 等是目前檢測水產(chǎn)品中藥物殘留的主要方法[9-10]，他們大多具有靈敏度高、重復(fù)性好等特點(diǎn)，特別是色譜法更具有確證能力，但這些方法存在檢測時(shí)間長、成本高和不易現(xiàn)場檢測等問題，難以滿足現(xiàn)場快速檢測要求，很難在普通養(yǎng)魚場、水產(chǎn)品市場，甚至中小型企業(yè)中普及應(yīng)用，無法實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測，給水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管工作帶來許多不便。
要進(jìn)一步研究膠體金免疫層析技術(shù)在水產(chǎn)品檢測中的應(yīng)用，提高檢測靈敏度，實(shí)現(xiàn)多元檢測、定量或半定量檢測。在滿足檢測快速而簡便的條件下，應(yīng)盡可能提高檢測的特異性和敏感度，減少假陰性和假陽性。另外，目前市面上的各種快速檢測產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，給監(jiān)管人員帶來不少麻煩，建議使用水產(chǎn)品專用，且經(jīng)農(nóng)業(yè)部或權(quán)威檢測機(jī)構(gòu)驗(yàn)證的快檢產(chǎn)品。
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