高暢，付玲玲，張志

摘要：目的：研究馬齒莧多糖的超聲提取工藝優(yōu)化。方法： 以多糖提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對(duì)馬齒莧多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果：馬齒莧多糖提取的優(yōu)化工藝條件為：料液比1∶20、超聲溫度70 ℃、超聲時(shí)間30 min、超聲功率250 W。在該條件下，多糖提取率為6.88 %。結(jié)論：超聲法提取馬齒莧多糖快速、高效，具有良好的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：馬齒莧；多糖；超聲提??；正交試驗(yàn)

基金項(xiàng)目：吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院大學(xué)生科技創(chuàng)新項(xiàng)目（項(xiàng)目標(biāo)號(hào)：201611439006）

中圖分類(lèi)號(hào)： TS255.36 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/j.cnki.jlny.2018.16.024

馬齒莧又稱(chēng)馬莧、五行草、長(zhǎng)命菜等，馬齒莧科馬齒莧屬一年生肉質(zhì)草本植物。《本草綱目》記載“其葉并比如馬齒、而性滑利似覓，故名馬齒覓”。馬齒莧是世界衛(wèi)生組織提名為最有用處的藥用植物之一，也是我國(guó)衛(wèi)生部規(guī)劃的78種藥食同源野生植物之一，全草均可作為藥用?，F(xiàn)代藥理研究表明馬齒莧中含有多糖、黃酮、有機(jī)酸、生物堿、香豆素、揮發(fā)油等化學(xué)有效成分外還含有對(duì)人體有益的氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素等營(yíng)養(yǎng)成分。目前關(guān)于馬齒莧多糖的研究主要集中在藥理活性方面，研究表明，馬齒莧多糖藥理活性具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫力等，表現(xiàn)出了可觀的潛在藥用價(jià)值。而研究馬齒莧多糖的提取工藝方面文獻(xiàn)在科學(xué)領(lǐng)域較少。近年來(lái)超聲提取法在植物多糖的提取中廣泛應(yīng)用，本試驗(yàn)采用超聲法提取馬齒莧中的多糖，為馬齒莧多糖的開(kāi)發(fā)利用提供物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 材料

具有根、莖、葉的新鮮馬齒莧可以改成馬齒莧全株（采摘于花期前），產(chǎn)自吉林地區(qū)，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院鑒定。

1.2 試劑

D-葡萄糖，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；苯酚，天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司；石油醚，丙酮，乙醚，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)制劑有限公司。

1.3 儀器與設(shè)備

KQ-50DA型數(shù)控超聲波提取機(jī)，昆山市超聲儀器有限公司；725N紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海精科儀器有限公司；R1001-VN旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；AUY220電子分析天平，日本島津公司。

2 試驗(yàn)方法

2.1 馬齒莧多糖的超聲提取及含量檢測(cè)

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 精密稱(chēng)取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品1 g，以蒸餾水為溶劑，溶解定容于100mL容量瓶中搖勻，從中量取1mL溶液，定容于100mL容量瓶中并搖勻，即得0.1 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確量取上述溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL置于10mL容量瓶中，采用苯酚-硫酸法，再各加1.0mL 6%苯酚試劑搖勻，迅速加入5mL濃硫酸溶液，將試管放入沸水中顯色15min，冷卻至室溫定容。以水為空白，于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)490nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度（A），得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程。

2.1.2 馬齒莧的前期處理 將新鮮馬齒莧全株用自來(lái)水沖洗，以去除表面雜質(zhì)。將沖洗后的馬齒莧在陰涼干燥處晾曬至無(wú)水分，放入55℃干燥箱中烘干。干燥后的馬齒莧用粉碎機(jī)粉碎，經(jīng)40目過(guò)篩后于密封袋中保存。稱(chēng)取適量的馬齒莧干品置于索氏提取器中采用5倍石油醚連續(xù)回流脫脂2次，后再用5倍95 %乙醇回流提取2次，濾渣置于通風(fēng)處晾干。以除去馬齒莧干品中的單糖、低聚糖、甙類(lèi)等雜質(zhì)。經(jīng)上述處理后所得馬齒莧粉末于65 ℃恒溫干燥箱中干燥至恒重，用于提取多糖。

2.1.3 馬齒莧多糖的超聲提取 稱(chēng)取一定量經(jīng)上述處理的馬齒莧粉末，放置在100mL圓底燒瓶中，以水作為提取溶劑，按照不同的提取溫度、提取時(shí)間、超聲功率、料液比進(jìn)行提取，所得提取液趁熱抽濾，減壓濃縮至小體積，離心去除雜質(zhì)，加入無(wú)水乙醇至提取液濃度為75%沉淀，靜置24h后過(guò)濾，用95%乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮洗滌數(shù)次，在60℃干燥箱中干燥至恒重的馬齒莧多糖粗品。

2.1.4 樣品液中多糖含量的測(cè)定 稱(chēng)取上述實(shí)驗(yàn)制得的馬齒莧多糖粗品1g，用蒸餾水溶解。按照2.1.1項(xiàng)下的方法，采用苯酚-硫酸法測(cè)定馬齒莧粗多糖中多糖的含量。測(cè)樣品吸光度，根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與回歸方程，計(jì)算樣品中葡萄糖含量：

馬齒莧多糖提取率（%）=樣品中的多糖含量/原材料質(zhì)量×100%

2.2 正交試驗(yàn)

通過(guò)預(yù)試驗(yàn)和參考文獻(xiàn)的篩選，選取超聲功率（A）、料液比（B）、超聲溫度（℃）及超聲時(shí)間（D）作為考察因素，在各自的不同水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，見(jiàn)表1。

3 結(jié)果與分析

3.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

按2.1.1進(jìn)行操作，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖1。

結(jié)果表明，葡萄糖在0.02～0.1mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，其回歸方程Y=6.695X+0.1301，相關(guān)系數(shù)R2=0.9937。

3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果分析（表2，表3）

由表3方差分析結(jié)果顯示，因素A、B、C、D中B因素具有顯著性差異，由表2正交試驗(yàn)結(jié)果表明，各因素對(duì)超聲法提取馬齒莧中多糖提取率的影響大小依次為： B （料液比）>C（超聲溫度）>A（超聲功率）>D（超聲時(shí)間）。最佳工藝組合為B1C3A3D1，即料液比為1∶20，提取溫度70℃，超聲功率250W，超聲時(shí)間30min。

3.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)實(shí)際情況，將最佳提取工藝條件優(yōu)化為如下：料液比為1∶20，提取溫度70℃，超聲功率250W，超聲時(shí)間30min，提取2次。進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，得到馬齒莧多糖提取率，結(jié)果見(jiàn)表4。

結(jié)果表明：馬齒莧多糖提取率的平均值為6.88 %，說(shuō)明該工藝條件下所提取的多糖的提取率較高，重復(fù)性良好，符合最佳工藝條件。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法提取馬齒莧中多糖，通過(guò)預(yù)試驗(yàn)和參考文獻(xiàn)選取超聲功率、料液比超聲溫度和超聲時(shí)間為考察因素，每個(gè)因素選取三個(gè)指標(biāo)進(jìn)行提取工藝優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)得出，各因素對(duì)超聲法提取馬齒莧中多糖提取率的影響大小依次為：B（料液比）>C（提取溫度）>A（超聲功率）>D（超聲時(shí)間）。最后得到的最佳提取工藝條件為料液比為1∶20，提取溫度為70 ℃，微波功率為200W，超聲時(shí)間30min，提取2次。最后進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，得到馬齒莧多糖提取率為6.88%。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：高暢，在讀本科生，研究方向：藥物制劑。

通訊作者：張志，碩士研究生，講師，研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。